前立腺発がんおよび良性前立腺過形成の評価のための腎皮膜異種移植および皮下ペレット移植

我々はマウスに圧縮されたホルモンペレットの製造だけでなく、皮下の外科的移植について説明します。この戦略は、ホルモン発癌および良性前立腺増殖の調節を評価するために、無胸腺ヌードマウスの腎被膜下に細胞および組織の異種移植片の増殖と組み合わせることができる。

このビデオで紹介されている手法は、発がんのホルモン調節と前立腺の良性成長を評価する実験に役立ちます。まず、連続投与を可能にするホルモンペレットを製造するために使用される控訴プレス。次に、先端が丸みを帯びたガラスピペットは、腎臓が外部に出された後に準備されます。

ピペットチップは、グラフトの挿入を支援するために使用されます。その後、圧縮されたホルモンペレットは皮下に移植されます。最終的に、良性組織異種移植片の成長に対するホルモン治療の影響を示す結果が得られます。

このビデオで紹介されている手法は、実行が簡単で再現性があります。この方法は、良性細胞の悪性腫瘍への形質転換にホルモンがどのように関与しているか、前立腺の良性成長がホルモンによってどのように調節されているかなど、この分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の意味は、良性人工関節過形成と前立腺癌に対する潜在的な新しい治療法と予防戦略にまで及びます。

一般に、この技術に不慣れな個人は、腎臓カプセルの技術的側面に苦労します。Xenograftペレットは、適切な保護具を着用しながら化学安全フードで調製され、相互汚染を防ぐためにペレット製造装置を完全に洗浄し始めます。次に、必要な量のホルモンパウダーを計量し、プレス中の損失に対応するために約5%の追加材料を確保します。

一部のホルモンは、ペレット製造前に混合される結合剤または充填剤を必要とします。ここでは、エストラジオールをコレステロール充填剤と組み合わせ、25ミリグラムのペレットを作ります。すべての重量を量り、結合したら、粉末をdsetに移します。

染料をプレスの下に置き、レバーをしっかりと押し下げてペレットを圧縮します。一定の圧力を使用して、表面積と体積の比率を一定に保ちます。次に、染料ホルダーを逆にして、レバーをもう一度押し下げてペレットを解放します。

ペレットの完全性を検査し、最終質量が目的の範囲内にあるかどうかを判断します。ペレットは手術前に作製し、適切な保護具を着用しながら使用するホルモンや薬剤の安定性に応じて保管することができます。ガラスのパスティエピペットの先端を炎、ブンゼンバーナーに通して、火で磨かれた丸みを帯びた先端を作成します。

ホットスポットを避けるために、ピペットを一定かつわずかに動かしてください。次に、ピペットを約60度の角度で炎の中に入れ、先端が湾曲して丸みを帯びた形になります。このチップは、腎嚢の下に移植片用のポケットを作成するために使用されます。

外科的処置を開始する前に、必要なすべての器具を滅菌し、作業エリアを準備してください。動物が適切に麻酔されたら、ベタジンとアルコールを繰り返し塗布して手術部位を消毒します。滅菌ドレープをその領域に適用した後、2〜3センチメートルの背側正中線切開を行います。

次に、下にある真皮を体壁から分離します。切開部の両側を分離して両側移植するか、片側移植片だけにします。分離したら、マウスを横方向の位置に置き、筋肉壁を通して腎臓プロファイルを見て腎臓を見つけます。

親指と人差し指で優しく圧力をかけると、細い虹彩はさみを使用して内臓を視覚化し、主要な血管や脊髄神経を避けるように注意するのに役立ちます。背骨と平行に体壁に1センチの切開をします。はさみをそっと広げて、この切開部を1.5〜2センチに広げます。

それらを最初の切開部に配置した後、腎臓の両側の筋肉壁の外側に穏やかな圧力を加えることにより、腎臓を外部に押し出します。次に、皮膚の端を体壁に載せる外側の腎臓の下に押し込みます。他の構造も存在する場合は、腎臓が外部化されている間、それらをそっと押し込むことができます。

滅菌生理食塩水を適用することにより、腎臓カプセルの水分補給を維持します。.腎臓嚢をそっと持ち上げ、2〜4ミリメートルの切開を行います。切開部のサイズは移植片のサイズによって決まりますが、カプセルの完全性を維持するために最小限に抑える必要があります。

以前に準備したピペットの丸みを帯びた閉じた端を、腎臓の表面に接するカプセルの下に挿入します。.挿入したら、腎臓を傷つけないように細心の注意を払って、移植片用の小さなポケットをそっと開きます。実質組織移植片は、外科的切除中に得られた新鮮な前立腺組織から調製されます。

腎臓嚢の切り口を持ち上げ、移植片をポケットに挿入します。ピペットチップを使用して、いくつかの移植片を腎臓嚢の下に配置し、腎臓表面に等間隔で配置することができます。移植が完了したら、筋肉壁の切開部の側面をそっと持ち上げて、腎臓を体腔に戻します。

グラフトがカプセルの下から滑り落ちないように注意してください。皮下ペレット移植に進む前に、単一の縫合糸を使用して筋肉壁を閉じます。移植が完了したら、下にある真皮を頭蓋方向に体壁から分離します。

皮膚切開部の頭蓋面をそっと持ち上げてポケットを作り、ホルモンペレットを保持しながらポケットを作ります まっすぐな鋸歯状の鉗子で優しく、ペレットを首筋に挿入します。歯付き鉗子を使用して、皮膚の端を位置合わせし、切開を閉じるために2〜3つの外科的創傷クリップを適用します。この例では、良性前立腺肥大症の患者からの一次組織異種移植片に外因性テストステロンが補充されました。

1か月間、矢印は異種移植片の位置を示します。腎カプセル移植は、ホルモン発がんの評価にも使用できます。ここでは、良性前立腺上皮および誘導性泌尿生殖器機構を含む細胞組換え体が、未治療のマウスで良性の成長を形成します。

この例では、テストステロンとエストラジオールのペレットを4ヶ月間皮下投与し、腎嚢に浸潤する前立腺がんを選択した宿主で同じ移植片を増殖させます。このビデオを見れば、圧縮ホルモンペレットの製造方法と埋め込み方法、手術用のファイヤーポリッシュガラスピペットの作り方、腎臓カプセル異種移植片の作り方をよく理解できるはずです。この手順を試みるときは、腎カプセルを優しく取り扱い、水分を維持し、この手順に従って腎実質を損傷しないようにすることを覚えておくことが重要です。

組織学、免疫組織化学、および分子技術などの他の方法を使用して、R-N-A-D-N-Aまたは目的のタンパク質を検出することができます。これにより、観察された良性または悪性の成長の性質をより適切に評価することができます。これらの実験で利用されるホルモンは、催奇形性で発がん性がある可能性があることを忘れないでください。

圧縮ホルモンペレットの製造業者は、常に化学安全フードで行う必要があります。このビデオで概説されている手順の各ステップでは、常に適切な個人用保護具を着用する必要があります。