脛骨神経切断 - マウスにおける脱神経誘発性骨格筋萎縮のために標準化されたモデル

このビデオの全体的な目標は、マウスの骨格筋萎縮の脛骨神経切断モデルを実証することです。これは、坐骨神経とその3つの枝、脛骨神経、シル神経、および腓骨神経を分離することによって達成されます。分離されると、脛骨神経は切断されます。

除神経後、傷口を密閉し、動物の状態を綿密に監視します。最終的に、除神経後の筋肉量の漸進的な減少を示すサンプルが得られます。除神経誘発性骨格筋萎縮の脛骨神経切断モデルは、ラットの十分に検証されたモデルで一般的に採用されており、これは坐骨神経切断に関連するものよりもはるかに罹患率が低いです。

このモデルをマウスで使用するために適合させましたので、ここでデモンストレーションします。これにより、研究者は遺伝子操作マウスの存在を利用し、骨格筋量の調節に重要なタンパク質がない場合の筋萎縮のプロセスを研究することができます 動物の罹患率を最小限に抑えながら。まず、つま先つまみで十分な麻酔を確認した後、マウスの体重を記録し、触診で坐骨神経の切り込みを特定し、そこから膝まで外側の大腿部と臀部を剃ります。

次に、アルコールとプロヨウ素を繰り返し塗布してその領域を清掃します。滅菌手袋を着用しながら、マウスを横向きに、手術用または解剖用の顕微鏡の下に置きます。触診により坐骨神経ノッチを特定します。

坐骨神経ノッチから膝にかけて大腿外側の皮膚を切開します。肌をやさしく広げます。細かいハサミを使用して、皮膚のすぐ下にある外側大腿部の平らな表在筋である大腿二頭筋を特定します。

大腿二頭筋を筋線維に沿って分割し、スプリングリトラクターを挿入します。坐骨神経とその枝を露出させるには、大腿二頭筋のすぐ下にある坐骨神経を特定します。光沢のある白色が特徴で、直径は約0.8ミリメートルです。

それは坐骨神経のノッチから膝まで走り、膝窩のレベルで脛骨腓骨神経と酩骨神経に分岐します。腓骨神経と頓骨神経枝から脛骨を超微細鉗子とスプリングマイクロ解剖ハサミで優しく分離します。脛骨神経は最大の枝であり、通常は中心にあります。

坐骨神経とその枝を優しく扱うことは、この手順の成功に不可欠です。サル神経と会陰神経の枝が損傷したり伸びたりしないように注意してください。これらの枝が損傷したり伸びたりすると、ターゲットも減少します。

超微細鉗子で神経を外側の外膜層にちょうど保持し、神経をたるませておくことで、一時的な除神経のための神経潰れや牽引損傷を回避できます 2〜4週間で完全な再手術が予想されるため、超微細鉗子で脛骨神経を15秒間押しつぶし、完全で持続的な除神経を実現します。マイクロディスセッションハサミで脛骨神経をできるだけ遠位に切断します。完全な除神経が必要な場合は、膝窩血管を慎重に避けてください。

切除された脛骨神経の端を大腿二頭筋の前面に10Tナイロンで縫合し、大腿二頭筋を5つのTビクリルで近似して、胃とヒラメ筋の異常再形成を防ぎます。除神経が完了したら、ランニングファイブのVicryl縫合糸で皮膚を閉じます。準備ができたら、吸入した麻酔薬の電源を切りますが、酸素の流れを維持します。

鎮痛剤を単独で投与した後、マウスを寝具のない暖かく清潔なケージに収容します。歩き回るまで、マウスを直接観察してください。完全に回復したら、マウスを清潔で頑丈な底ケージに移し、十分な柔らかい寝具を敷きます。

褥瘡のかかとの潰瘍の発症や咀嚼の証拠がないか、手術肢と足を毎日検査します 軽微な問題は、局所抗生物質またはオジンなどの消毒薬で管理できます。動物の安楽死を必要とするエンドポイント指標は、体重減少、セルフケアが不十分であること、猫背の姿勢の証拠です。さらに、1〜2週間の創傷ケアで治癒しない創傷破壊や潰瘍のある動物も犠牲にする必要があります。

さらに、過度の痛みを感じている動物 術後の時点で、分析のために目的の組織が収集されます。安楽死後、手術用と反対側のコントロール脚の両方の内側を剃り、解剖顕微鏡でアルコールで洗浄し、足首から膝までメスでふくらはぎの内側の皮膚を切開し、手術肢の足首の周りを円周します。次に、皮膚を筋肉からそっと引き抜き、太ももに向かって近位に引っ張ります。

脚のすべての筋肉を露出させるには、脚の後面で膝から足首まで伸びるふくらはぎの筋肉である胃筋を特定します。次に、膝の内側の側面で胃筋の近位にある大腿二頭筋の遠位挿入を見つけます。その遠位挿入部では、大腿二頭筋は薄くて膜状に見え、はさみと鈍い端の解剖を使用して胃の最も近位部分を覆っています。

大腿二頭筋の遠位挿入部を胃筋からそっと分離します。その遠位挿入を踵骨に追加すると、胃筋はアキレス腱に先細になります。白くてしなやかに見えるアキレス腱を特定します。

アキレス腱を鉗子で保持します。胃筋をつかんだり押しつぶしたり、アキレス腱を踵骨挿入部から分断したりしないように注意してください。腱を保持したままのハサミを使用して、非常に穏やかな牽引を使用して、淡い赤い胃筋を遠位挿入部から膝の起点に向かって深く赤いヒラメ筋からゆっくりと持ち上げます。

このプロセスを容易にするために、胃の起源を内側および外側の大腿骨顆から分割することにより、脚から胃を解剖します。ハサミを使う。筋肉をつぶさないように注意してください。

ヒラメ筋は、胃の目の前ですぐにはっきりと見えるようになります。スーをアキレス腱への挿入から後肢の起点まで持ち上げます。取り外したら、精密なスケールで筋肉を別々に計量します。

次に、筋肉を垂直に半分に分割してスナップフリーズと液体窒素、半分を組織学のために分割します。最後に、コントロールの未評価側でこれらの手順を繰り返して、コントロール胃筋とヒラメ筋を採取します。胃筋は、除神経された後肢と対側のコントロール後肢から 1 週間、2 週間、または 4 週間で採取され、比率として表されました。

除神経は、時間の経過とともに筋肉量の漸進的な減少を誘発しました。ミオ線維の断面積は、ここに見られるように免疫染色後に測定されました。速筋タイプ2本繊維はブラウンに染まり、遅筋タイプ1本はステン、ステンホワイトタイプ2本。

けいれん線維は、除神経された筋肉の断面積の漸進的な減少を示しました。このビデオを見てから4週間以上経つと、マウスの脛骨神経離断術ができるようになるはずです。これにより、除神経誘発性骨格筋萎縮の再現性があり、堅牢で、十分に検証されたモデルが提供されます。