トウモロコシとテオシンテ線における ウスチラゴ の病原性を評価するための迅速かつ効率的な方法

この手順の全体的な目標は、針注射、USTA Lago maus 細胞懸濁液培養による接種、および maze tete および maze teosinte cross intres lines の耐病性反応スクリーニングを実施することです。これは、最初に接種とスクリーニングのための植物系統を選択することによって達成されます。次に、実験用および対照用針注射接種実験用の種を植えます。

10日後、U製の細胞懸濁液を各植物の茎に注入します。最後に、実験プラントと制御プラントの抵抗反応を比較します。最終的には、あなたと一緒に接種された植物の表現型を視覚化することにより、針注射接種が成功したことを示す結果を得ることができます。マイス。

この技術の主な利点は、病原体を葉の間に直接送達することです。これにより、病原体の侵入の問題が解消されます。ここに示すように、接種とスクリーニングのための植物系統の選択を開始するために、2つの迷路系統、5つのテオシンテ系統、およびU Maisに対する特性のない耐性を持つ40の迷路テオシンテクロスラインを、この研究の実験的および対照針注射接種実験に使用しました。

各植物系統の4つの種子を小さなフラットに植えます 指で種子を土に約半インチ押し込み、土で軽く覆います。次に、植物を成長チャンバーに入れ、種子が浸るまで水をやり、水やり後に種子が土壌の下に留まるようにします。摂氏28度と20度の昼と夜の環境、それぞれ14時間と10時間の明暗サイクルで植物を育てます。

そして、キャノピーの上部には、毎秒約500マイクロモル/平方メートルの光合成活性放射線が照射されます。日中と夜間の相対湿度をそれぞれ約70%と90%に維持し、すべての植物を同じ成長チャンバーに保持して、実験全体で一致する成長環境を維持します。種を植えてから8日後、滅菌ループを使用して、冷凍グリセロールストックからジャガイモのデキストロース寒天またはPDAプレートに糸状に糸状にしました 摂氏30度で2日間インキュベートし、定期的に監視して、層流フードの下でよく成長していることを確認します。

滅菌爪楊枝を使用して、各株に対して1つのコロニーを選択し、それらをPDブロスの3ミリリットルチューブに入れます。培養物を摂氏30度、200RPMで2日間インキュベートし、定期的に成長を確認します。次に、培養物のOD600を測定して、培養物がOD1.0に成長したことを確認します。

水を使用して、培養物を最終濃度1ミリリットルあたり100万細胞、最終容量30ミリリットルにします。この濃度の病原性細胞懸濁液は、一貫して植物の良好な感染をもたらします。次に、接種する前に、作った2つを菌株として等量混ぜます。

3ミリリットルのシリンジに細胞懸濁液を充填する前に、コントロールシリンジに水を入れて、植物へのダメージを最小限に抑えて注入します。組織は、各シリンジの端に457ミリメートル×1.3センチメートルのゼロポイントの皮下注射針を取り付けます。植物を成長チャンバーから取り出し、土壌ラインのすぐ上に90度の角度で注入します。

U mausの針を実験植物の茎に、茎の中央に来るまで慎重に挿入します。約100マイクロリットルの細胞懸濁液を注入します。それは茎を突き抜け、植物の渦の中に移動するときに見えます。

シリンジが空になるまで、追加の実験プラントを注入し続けます。次に、水を入れて針から植物組織をきれいにし、すべての植物が注入されるまで注射器を補充します。水注射器を使用して、同様の方法でコントロールプラントを注入します。

注射が完了したら。植物を毎日成長チャンバーに戻します。土壌のみに水をやり、病原体の発達と植物の抵抗性反応を確認します。

1〜5の耐性反応評価を使用して、接種またはDPIの7日後、10日後、14日後、および21日後の各植物の耐性反応をスケーリング、スコアリング、および記録します。評価スケールの数値は、疾患の重症度が上がるにつれて増加します。例えば、A1Cの1つのAまたは2つの抵抗反応は抵抗を示します。

3、4、または5の耐性反応は感受性を示します。実験プラントと制御プラントの抵抗反応を比較し、A1C 1 aまたは2の抵抗反応定格を持つ実験プラントを選択します。これらの植物はマティスに対する抵抗性であると考えられています。

この実験では、腐植土を接種した植物の大部分は感染しやすいものでした。植物は、黒いテリオ胞子を伴う茎と基底の胆汁の形成によって示される深刻な病気の発症を示しました。病気の重症度のために、いくつかの植物は接種後に死にました。

対照的に、対照植物は非常に清潔で、植物のどの部分にも病原体の発生を示さず、実験植物での病原体の発生は、U Maisの針注射接種によるものであったことを示しており、U Maisに耐性のある3つのMais Teosinte交差攻撃線が特定され、接種の成功は軽度の硬化症によって確認されました。 生産中のシアン、またはマイナーな葉の胆汁の形成。この手法は、再現性を備えた非常に効率的な方法で行うことができます。これは、多数の植物の接種と表現型決定に役立ちます。