禁欲ラットで探しているヘロインに長期の食事制限の影響を研究するための手順

食物制限されたラットで薬物探索のロバスト増強のデモンストレーションを可能にする手順が記載されている。ヘロイン自己投与の訓練後、ラットは、彼らは穏やかに制限された食品である時に、薬物のない環境で、禁欲期間を経る。薬物探索はその後、薬物に関連した環境でテストされています。

この手順の全体的な目標は、離脱条件下で実験室のラップでヘロインを求めるヘロインへの再発に対する慢性的な食物制限などの環境操作の影響を研究することです。これは、最初にラットの頸静脈に静脈内カテーテルを外科的に挿入して、回復期間後にヘロインを自己投与できるようにすることによって達成されます。ラットは、オペラントコンディショニングチャンバーでヘロインを10日間自己投与するように訓練されています。

手順の次のステップは、ラットが動物施設に輸送され、食物へのアクセスが制限されている、または制限されていない期間にさらされる禁欲段階です。最後に、ラットはオペラント条件付けチャンバーに戻され、ヘロインの反応がヘロインの発現を妨げるレバーでの反応が、ヘロインの送達がない場合にキュー、光、およびトーンの活性化をもたらすヘロインシーキングテストを受けます。最終的に、慢性的に食物制限されたラットヘロインの病歴を持つ自己投与は、薬物摂取環境への再曝露と薬物関連の手がかりに起因する、離脱条件下でのヘロインシーキングの大幅な増加を示します。

この手法が、復職手続きなどの既存の方法よりも優れている主な点は、人間の状態では観察されない明示的なオペラント消滅がないことです。さらに、慢性と急性の操作を使用すると、人間の状態に関してより大きな構成概念の妥当性が可能になります。この方法は、薬物や食物を求める行動の根底にある一般的な神経学的メカニズムなど、薬物依存症の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。

カテーテルは大量に調製され、長期間使用するためにオートクレーブ滅菌されます。カテーテルを構築するには、まず弾性チューブを12センチメートルの長さに切断します。つまようじまたは18ゲージの針を使用して、先端から3センチメートルのカテーテルの周りにシリコンの小さな滴を置きます。

シリコンを24時間乾燥させてからオートクレーブ処理を行い、オートクレーブ処理前にプラスチック製の台座に対して直角にコネクターとして機能する5アップカニューレの長管を曲げます。手術当日にカテーテルを組み立てるには、スコラスティックチューブの長辺を5アップカニューレの曲がった金属チューブに押し込み、プラスチック製の台座の約半分まで押し込みます。タイゴンチューブとブレンドされた22ゲージの針を介して、滅菌生理食塩水で満たされた1ミリリットルのシリンジに5アップチューブを接続します。

生理食塩水をカテーテルに流して、流れを妨げないようにします。剃る前に動物に麻酔をかけ始め、アルコールと外科的スクラブで右肩と頭の領域を清掃します。乾燥を防ぐために目にジェルを塗った後、ペニシリンと生理食塩水を注射して感染や脱水から保護します。

標準的な技術を使用して、周囲の組織から分離された外頸静脈を露出させます。湾曲した鉗子を静脈の下に挿入して、静脈を持ち上げ、わずかに伸ばした状態に保ちます。静脈に小さなV字型の切り込みを入れ、切り口を開いたままにします。

血管拡張器を使用して、カテーテルの短い3センチメートルの先端を静脈に進み、シリコンドロップが切開点に達するまで心臓に向かって進めます。カテーテルを静脈に3本の縫合糸で結び、そのうちの1本はできるだけ遠くまでつなぎます。1つはシリコンドロップに吻側だけ、3番目はできるだけ吻側です。

生理食塩水をカテーテルに通して、カテーテルが詰まったままで、縫合糸がきつすぎないようにします。次に、ラットの腹側を下にして置きます。頭部を切開し、止血剤を挿入して皮膚を下の組織から分離し、皮下ポケットを作成します。

皮膚の下の止血剤を、カテーテルが挿入された肩の開口部に導きます。結合組織を突破し、5つの基部の下の最も吻側ポイントでカテーテルをしっかりと固定します。5つを上に取り外し、カテーテルの長い方の端を皮膚の下に通し、頭のてっぺんにある切開部から出します。

はさみを使用して、止血剤がクランプされた場所の下のカテーテルを切断し、5つのアップの長い方の端を再度取り付けます。カテーテルを5本の金属シャフトに沿って引き上げ、プラスチック製の台座に生理食塩水を通し、自由な流れを確保します。縫合糸で傷を閉じた後、ラットを定位固定装置に入れます。

露出した頭蓋骨がきれいで乾いたら、手動のドリルビットを使用して表面に4〜5個の穴を開けます。次に、穴に小ネジを差し込んで、ヘッドキャップの足場として機能します。5アップコネクタをネジの間に置き、カテーテルの余分な長さを前に作った皮下ポケットに押し込みます。

最後に、歯科用セメントを使用して、頭蓋骨の上部まで5つを貼り付けます。セメントが完全に乾いたら、ラットを定位固定装置から取り出し、完全に回復するまで監視します。.ラットはオペラントコンディショニングチャンバーに個別に収容されます。

ファンを備えた防音コンパートメントに収納されています。2つの格納式レバーは、右側のサイドウォールの床から9センチメートル上に取り付けられており、各レバーの上にキューライトが付いています。トーンモジュールはアクティブレバーの上に配置され、赤いハウスライトは左側のサイドウォールの上部中央に配置されています。

食べ物と水はlibitumで入手できます。薬剤ポンプは、液体スイベルと金属スプリングで保護されたタイゴンチューブを介してカテーテルに取り付けられています。ヘロインの自己投与は、手術からの回復と24時間の慣れ期間の後に開始されます。

まず、カテーテルをヘパリンゲンタマイシン溶液で洗い流します。次に、5アップコネクタをTigonチューブに接続し、金属製のスプリングを取り付けます。各セッションは、ダークフェーズの開始時に、アクティブレバーと非アクティブレバーを伸ばし、ハウスライトの照明とQライトトーンコンプレックスのアクティブ化から開始します。

30秒間、ラットは、3時間間隔で区切られた3時間のセッションを3回行う間に、10日間ヘロインを自己投与することが許されます。アクティブレバーの応答により、薬物ポンプが作動し、22回目のタイムアウト期間が開始され、その間にハウスライトが消灯され、アクティブレバーの上のQライトトーンコンプレックスがアクティブになります。非アクティブなレバーの応答は記録されますが、プログラム可能な結果はありません。

自己投与トレーニングの後、ラットをオペラント条件付けチャンバーから取り出し、餌と水に無制限にアクセスできる動物施設に個別に収容します。翌日の薬物ウォッシュアウトの日には、食事制限を受けたグループの食事の量を減らして禁欲期間を開始し、食事制限を受けたグループでは食物への無制限のアクセスを維持します。禁欲の朝に薬物探索テストを行います。

14日目、ラットをオペラントコンディショニングチャンバーに戻し、金属スプリングに取り付けます。1時間または3時間のセッションを許可し、その間、アクティブレバーと非アクティブレバーの反応は、薬物の入手可能性を除いて、自己投与トレーニングと同じ結果をもたらします。.これらの結果は、ヘロイン全体を通して体重が安定していることを示しています。

自己投与トレーニング 禁欲中、食事制限のあるラットは体重を増加させ、食物制限のあるラットは体重を約10〜15%減少させますここで見られるように、注入とアクティブなレバーの反応はトレーニング日にわたって増加しましたが、非アクティブなレバーの反応は増加しませんでした。禁欲期間の後、食物制限ラットに対する反応能動レバーは、満腹ラットと比較して有意に増加した。一方、非アクティブなレバーの応答は最小限であり、この手順に従うとグループ間で同等です。

頭蓋内注射、マイクロダイアリシス、ウェスタンブロッティング、免疫組織化学的手法などの他の方法を使用して、特定の神経化学的および薬理学的システムを標的とすることができます。このビデオを見た後、ラットの頸静脈に静脈内カテーテルを外科的に埋め込む方法と、標準的なオペラント条件付けチャンバーでヘロイン自己投与手順を行う方法について明確に理解できるはずです。