DOI: 10.3791/50810-v
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生化学的ア プローチは、膜タンパク質のin vivoでのタンパク質-タンパク質相互作用（PPI）を識別するために記載されている。この方法は、タンパク質架橋、アフィニティー精製および質量分析を組み合わせて、ほぼすべての細胞型または生物に適用可能である。このアプローチでは、一過性のPPIのさえ識別が可能となる。
この手順の全体的な目標は、膜連鎖球菌タンパク質相互作用実験または膜スパインを通じて、in vivoタンパク質、膜タンパク質のタンパク質相互作用を同定することです。これは、ホルムアルデヒド用の可逆的架橋剤を用いたin vivo架橋によって達成されます。2番目のステップは、鎖状にタグ付けされたメンブレンベイトタンパク質を架橋された獲物タンパク質と一緒に精製することです。
次に、沸騰させることで架橋を逆転させます。最後のステップは、デザル硫酸ナトリウム、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはSDSページによるメンブレンベイトタンパク質と共精製された獲物タンパク質の分離です。最終的には、イムノブロッティングおよび質量分析分析を使用して獲物タンパク質を同定し、膜タンパク質相互作用の解析を可能にします。
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