Name: 自然送信時に結核マラリア重複感染を研究する実験モデル結核菌とマラリアベルゲイ /i (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-17T21:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 2 s
Description: 学ぶ結核とマラリアの重複感染マウスモデル構築法。吸入暴露システムでMycobacterium tuberculosisを感染させ、蚊による自然感染でPlasmodium bergheiを接種し、両病原体の相互作用をin vivoで解析する。

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著者は、蚊の繁殖のためのミリアムエステルに感謝したいと思います。この作品は、研究センターBorstelから、社内の資金によってサポートされ、ライプニッツセンター感染によって資金調達に参加しました。

<ol><li>Mueller, A. -K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+Transmission+of+Plasmodium+berghei+Exacerbates+Chronic+Tuberculosis+in+an+Experimental+Co-Infection+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Natural Transmission of Plasmodium berghei Exacerbates Chronic Tuberculosis in an Experimental Co-Infection Model.</a> PLoS ONE. 7, e48110(2012).</li>
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</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

私たちは、マウスが生産的にマウンテンバイクやPで感染させることができる方法を説明しました感染の彼らの自然な経路を介してベルゲイ 。我々は実験的結核13やマラリア12を研究する感染プロトコルを確立し、最近ではマウスモデル1にマウンテンバイクとマラリア間の同時感染を研究するためにそれらを採用して適用します。 成功の感染症のための最も重要な工程は、所望の数字の両病原体の伝播である。彼らは時間をかけて生存能力を失うことになる、との株式もともと決定力価が最も可能性の高い、もはや正確でなくなるので、マイコバクテリア株は2歳以上であってはならない。その結果、感染用量は予想よりはるかに低いだろう。そのため、保存培養のCFU力価は数カ月ごとに決定されるべきである。同様に重要なのは最初の場所で標準化された栽培やマウンテンバイクの在庫の発生がある。このような培養条件媒体、補助剤、時間、容積がMtbの異なる株を用いた実験からのデータを比較できるようにするために標準化されるべきである。マイコバクテリアの培養中に凝集する傾向があり、従ってそれは同じ成長期に、標準化さ収穫細菌を培養条件を維持し、分注中に頻繁に再懸濁することが重要である。そうでなければ、CFU力価および感染の結果に大きなばらつきがある場合もあります。 均質に感染した蚊のバッチの生成は、別の重要なステップです。別の蚊は、個々のマウスを餌にするので、一つの感染実験に使用される蚊の全てが同じバッチから来て、蚊の90％以上が感染しているだけのバッチが使用されることが重要である。 現在のモデルは、単一の感染した宿主における免疫応答と比較することによって、重複感染宿主における免疫応答および免疫モジュレーションを分析するために使用することができる。我々はVAを適用することができますいろいろな読み取り方法は、よくこのような目的の組織または体液のサイトカインやケモカインを検出するための組織学、免疫組織化学、免疫細胞集団のフローサイトメトリー解析、またはPCRおよびELISAなどの方法論を確立しました。このようなマウスモデルは、特定の制限があることに留意すべきである。 マウンテンバイクに感染した人の大半は臨床症状の兆候の潜伏感染を開発する一方で、マウスは、進行性の肺の病理に慢性疾患を発症する。それでも、C57BL / 6マウスのMtb感染に対して比較的抵抗性であり、ヒト結核患者で観察されるような古典的な肉芽腫を発症しない。その結果、マウスでの免疫病理学的反応が適切でもない潜在も活性ヒト結核疾患を反映しない。ヒトおよびマウスでの潜伏と慢性疾患との間の不一致にもかかわらず、マウスは広範囲のMtb感染を制御し、調査する価値があり、必要不可欠なツールである宿主因子を同定し、研究するために使用されてきた感染症における免疫応答。重要なことに、Mtbの感染に対する感受性は、一般的に使用される近交系マウス系統間でかなり変動し、DBAまたはC3Hなどのより感受性系統共、単一の感染の研究に含めることができる。また、離れて本明細書に記載の病原体種から、関心のある任意の他のマイコバクテリウム種 （ 例えば、臨床分離株）を使用することができる。単一のマラリアモデルは、ヒトの疾患のあらゆる側面を複製しない間も同様に、様々なマウスモデルは密接に自然に獲得した人間のマラリア感染のさまざまな側面に似ているん。例えば、P.ベルゲイ ANKAとP.ヨエリ YM/17XLは広くPで、ヒト（ 熱帯熱マラリア原虫によって誘発される）重症マラリアのモデルを研究しているベルゲイ ANKAは、人間の脳malari S 14,15のための優れたモデルとみなされている。 P.ベルゲイ NK65はhyperparasitaemia急性マラリア、貧血のための優れたモデルであり、最近でてきたマラリア関連急性呼吸窮迫症候群（ARDS MA-16）のための実験モデルとして記述。記載され共感染モデルを用いて、我々は最近、同時P.ことを示すことができたベルグヘイ NK65感染は、慢性結核1を悪化させる。 離れて別のげっ歯類のマラリア原虫を使用してから、感染イベントの順序やタイミングは、基礎となる研究課題に応じて適用することができる。フィールドに、併用プラスモディウム感染症は、Mtbの感染または後発の時点で存在してもよい。いずれのシナリオでもマウンテンバイクやマラリアに対する免疫応答が異なる影響を受ける可能性があります。そのため、マウスはマウンテンバイクの感染の前または後のいずれか原虫スポロゾイトを感染させることができる。さらに、マウスは、異なる時間に挑戦することができる急性、慢性対上のマラリア誘発性免疫応答の影響を評価するためのMtb感染後結核。マラリア、結核の重複感染を研究するためのマラリア原虫を選択する際に重要なのは、一つは、いくつかの齧歯類マラリア原虫株は、特定のマウス系統の急性疾患を引き起こすとマウンテンバイクが免疫応答性の慢性および長期的な感染症を引き起こす間だけ数日から数週間以内に、感染に屈することに注意する必要がありますマウス。従って、重複感染のタイミングは、実験動物の早期死亡を回避するために重要である。 複数の病原体種との同時感染による宿主免疫の変調はよくわかっていないままです。重複感染宿主の免疫系との相互作用がマラリアと同時感染が病因、疾患の結果、ワクチン接種、免疫診断、および治療 ​​をどのように影響するかの理解に貢献していきます-我々の実験共感染モデルは、マイコバクテリウムを調査するための強力なツールが用意されています。

ヒト集団はほとんど唯一の病原体にさらされていない。特に、サハラ以南のアフリカなどの感染症の発生率が高いとの地域では、同時感染は、プライムが、非常に過小な公衆衛生上の問題を表している。結核、マラリア、それぞれ、ヒトにおいて最も一般的な細菌や寄生虫感染であり、熱帯の貧しい集団における罹患率および死亡率の主な原因であり続けている。結核、マラリアとの重複感染のリスクのある多数の個人間の広い地理的なオーバーラップにもかかわらず、非常に少ないが、様々な、多くの場合、同時に重複感染個体ではマラリア原虫と結核菌に対して惹起される免疫調節因子およびエフェクターを打ち消すの間の相互作用について知られている。 混合感染の齧歯類モデルは、このように相互インフルに光を流して、1ホスト内の異なる病原体に対する差分免疫反応を特徴づけることができまた、治療と予防のための新しい提案を識別するのに役立ちます変調病理及び個々の疾患の臨床結果を、ences。私たちは、同じホスト1内の結核菌（MTB）との同時感染によって引き起こされる波及効果やげっ歯類のマラリア原虫種を調査することを可能に実験用マウスモデルを確立している。重要なのは、可能な限り厳密に自然に獲得したヒトの感染をエミュレートするために、我々のモデルは、両方の病原体によって使用される感染の自然経路を実装しています。結核は、したがって、主に肺に現れる空気感染、です。それらは咳やくしゃみの間に感染性エアロゾル小滴を放出するとき原因物質は、Mtbのエアロゾル経路を介して活動性疾患を持つ人々によって送信される。従って、エアロゾル感染は自然感染を模倣するために選択される方法である。 マウンテンバイクを含有する浮遊粒子の発生を使用することによって達成することができる吸入暴露システムの。この全身曝露室は、感染が2開始され、肺の肺胞に吸入されるMTB-含む感染性エアロゾル液滴（ 図1）に実験動物を暴露できます。 一方、マラリア原虫は、自然に女性ハマダラカ蚊に刺さによって送信されたアピコンプレックス寄生原虫によって引き起こされる媒介疾患である。血粉中に、感染スポロゾイトは、ホストの皮膚の下に寄託され、その後、血流を通して肝臓に達する。肝細胞の中に彼らは開発し、急速に肝臓段階のシゾントに掛けます。最終的には、成熟したシゾントは破裂し、それらが赤血球侵入、複製、赤血球破裂、およびreinvasion 3の進行サイクルを開始する場合、血流への病原性の第一世代のメロゾイトの数千人を解放します。 マラリア原虫のライフサイクルコンチン一部のメロゾイトなどのUEは、性的寄生虫段階に血食事中に蚊によって撮影することができます男性と女性の生殖母細胞を、開発しています。蚊では、 マラリア原虫スポロゾイトは蚊の中腸内に存在するオーシスト以内に発症し、最終的に別のホスト3,4に前方送信のための唾液腺に移行する。 実験動物モデルにおいてエアロゾル、したがって、最も関連性の高い経路を介したMtbの送達は非常に一般的であるが、マラリア、結核重複感染5-7研究を含む多くの実験齧歯類マラリア感染の研究は生じさせ、寄生さ赤血球をマウスに感染させることによって実施されている臨床的にサイレント肝臓段階のフェーズを排除しながら血液段階のマラリア感染へ。しかし、肝臓期は、抗マラリア原虫の免疫8月11日のための感染症と関連する時に必須のステップです。我々は、肝のpHを含めるようにしてそれはそれゆえ重要と考えるそれぞれマラリアやマラリア、結核の同時感染は、両方の研究において、マラリア伝染とメンテナンスのASE。また、天然に送信されたスポロゾイトではなく、単離された唾液腺由来のスポロゾイトを注入するの蚊によってマラリア感染を確立することを促し、針感染12、を介して送信されるものよりも感染性であることが示されている。マラリア原虫の天然の送信のための感染性の蚊を得るための唯一の方法は、脊椎動物宿主（ここではマウス）および蚊ベクターの両方において寄生虫のライフサイクル全体を維持することである。従って、寄生虫メンテナンスのための昆虫館へのアクセスは、 咬合天然伝送を行うために不可欠である。 ここに記載さ我々のプロトコルは、 マラリアとの同時感染は、慢性結核1への影響をスポロゾイトか調査するために開発されました。そうするために、マウスをエアロゾルM.に感染している結核および40日後、ときM.結核感染は、慢性期に到達した、マウスマラリア感染蚊に曝される。重複感染動物におけるマラリア、結核の両方の結果はそれぞれ、組織中の血液寄生虫及び細菌負荷を監視することによって追跡することができる。我々のプロトコルでは、我々は彼らの自然感染ルートとどのように成功し、病原体の伝達を確認するために経由して、両方の病原体をマウスに感染させる方法を詳しく説明します。我々の手では、両方の実験的な感染のために一般的に達成感染率は100％である。これらのプロトコルは、最も挑戦的な人間の感染症の2間の重複感染をモデル化し、研究するために、我々がそうであるように、別々に感染または、両方の研究に適用することができます。このモデルは、このプロトコルに記載されているもの以外の他のマイコバクテリウムおよび齧歯類マラリア原虫種に適用可能である。

<table><tbody><tr><td>ブラトン</td><td>Sch&uuml;lke</td><td></td><td>有効成分:アルデヒド(ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、シュウアルデヒド、エチルヘキサナール)</td></tr><tr><td>ミドルブルック7H9&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>M0178</td><td>Mtbブロス培養用ミ</td></tr><tr><td>ドルブルック7H11&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>283810</td><td>Mtb培養用寒天培地</td></tr><tr><td>ミドルブルックOADC濃縮培地</td><td>BD Biosciences</td><td>212240</td><td>Mtb培養染色</td></tr><tr><td>皿</td><td>科学サービス</td><td>E62542-12</td><td></td></tr><tr><td>24スライドホルダーW /ハンドル</td>科学<td>サービス</td><td>E62543-06</td><td></td></tr><tr><td>Giemsas Azur-Eosin-Methyleneブルー溶液</td><td>メルクミリポア</td><td></td><td></td>109204</tr><tr><td>ライト&acute;s ステイン</td><td>シグマ</td><td>W0625</td><td></td></tr><tr><td>吸入暴露システム</td><td>グラスコール</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ネブライザー-ベンチュリ</td><td>グラスコール</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アイスクリームカップ</td><td>H&auml;agen-Dazs</td><td></td><td>蚊のケージとして使用される</td></tr><tr><td>メタルフレームの蚊のケージ</td><td>BioQuip Products</td><td>1450A</td><td></td></tr></tbody></table>

自然送信時に結核マラリア重複感染を研究する実験モデル結核菌とマラリアベルゲイ</i

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

同時感染は自然に病原性生物の別個のタイプの地理的なオーバーラップのために発生します。同時感染はほとんどの場合、各単一病原体に対するそれぞれの免疫応答を調節することにより、病因および疾患の転帰に影響を及ぼし得る。重複感染患者は、抗感染介入に示差的に応答することができる。サハラ以南のアフリカの多くの地域でcoendemicが、どちらもマイコバクテリア、マラリア原虫マラリア原虫によって引き起こされるように結核の間の同時感染は、詳細に研究されていない。マラリア結核の同時感染は宿主免疫し、各疾患の経過を調節する方法に挑戦が、科学的、臨床的に関連性の高い質問にアプローチするために、我々は、私たちは共感染宿主内で両方の病原体に対する誘発される免疫応答を分析することを可能にする実験的なマウスモデルを確立。注目すべきは、最も正確に模倣自然に獲得したヒト感染するために、我々は実験的な実行それぞれ感染の彼らの自然なルート、 すなわちエアロゾルおよび蚊に刺され、両方によって病原体によるマウスの感染。

マウンテンバイクとP.によるマウスの感染それぞれ自然な経路を介してベルゲイ 、 すなわちエアロゾルや蚊に刺され、すべての動物の一貫性と再現性の感染の結果（ 表1）1。我々は最初の発生（prepatency）及び血液中の寄生虫の数（P.ベルゲイ寄生虫 ）と異なる器官でのマウンテンバイクの負担を、決定することによって、成功した感染症やマラリア、結核の両方の経過をモニターすることができます。感染性の蚊に刺されによる成功したマラリア原虫の伝送の例を表1及び図3に示されている。 4-5日後（ 表1及び図3A）血液段階の寄生虫の存在によって確認されるように、各マウスに10スポロゾイト感染蚊の供給は100％の感染率となった。重要なのは、我々は同じ実験GRの個々のマウスの血液中に、同様の寄生虫番号を検索OUP、一貫した再現感染蚊に刺された結果によってそのスポロゾイト送信を示す。 MTB-重複感染した動物のそれとナイーブ対照マウスにおけるprepatencyを比較することで、我々はそのprepatency若干マウンテンバイク （ 表1、図3B）でpreinfectedされていたマウスでは遅延している見ることができます1。我々は以前に1を報告しているように、我々は、図3（b）に示すように、毎日ギムザ染色した血液塗抹標本に寄生虫を監視することにより、マラリアのコース上のMtb同時感染の影響を判断することができます。 個々のマウス（ 図4A）との間の比較的低い変動と肺の中の細菌の成功沈着吸入暴露システムの結果を利用してマウンテンバイクによるマウスの感染。我々は、肺およびCFU決定により経時的に関心のある他の臓器中のマイコバクテリアの負荷に追従することができる。の肺におけるマイコバクテリア負荷例マウンテンバイクは、P.の非存在下または存在下でC57BL / 6マウスを感染させベルゲイは、 図4Bに示されている。 表1。蚊に刺されによるスポロゾイト送信後Prepatency。すべてのマウスがPの自然送信後血液段階の感染症を開発蚊に刺さでスポロゾイトをベルゲイ 。 1 PLoSのONEの許可を得て7（10）、e48110から適応。 <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 実験マウス群（C57BL / 6） </td><td> 10感染蚊に刺されによる挑戦 </td><td> グループあたりの動物の血液段階陽性動物/番号の番号 </td><td> 平均prepatency [D] </td></tr><tr><td>ナイーブ</td><td> P.ベルゲイ </td><td> 7月7日</td><td> 4,4 </td></tr><tr><td> MTBは、感染した</td><td> P.ベルゲイ </td><td> 7月7日</td><td> 5,5 D&gt; </td></tr></tbody></table><img alt="図1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50829/50829fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50829/50829fig1.jpg"> 図1。実験手順の全体的なスキーム。C57BL / 6マウスを、グラス-コルエアロゾルチャンバ内のMtb含有エアロゾル液滴に晒されている。一日のエアロゾル感染後のMtbの取り込みは、肺のCFU分析によって検証する。 40日（結核感染マウスでは慢性的になっています） マウンテンバイクチャレンジ後、動物をPにさらされているベルゲイは蚊を感 ​​染させた。成功したスポロゾイトの送信を確認し、 マラリア原虫感染の経過をたどるために、寄生虫は蚊に刺された後の3日間を開始ギムザ染色した血液塗抹標本で毎日監視されている。 / files/ftp_upload/50829/50829fig2highres.jpg "SRC =" / files/ftp_upload/50829/50829fig2.jpg "/&gt; 図2。蚊のケージのスケッチは、感染性の蚊は、ハーフパイントのアイスクリームのカートンとしてカートンの内部に収容されている。小さな開口部は、カートンの側面に切断し、蚊のための安全な入り口を作成するには、それぞれの作品に切ったスリットとラテックスの二重の層で覆われている。濾紙片を垂れを吸収するためにカートンの内底にテープで固定されている。アイスクリームのカップはテープとゴムバンドでカートンに固定されている（ナイロンメッシュ）ネッティングで閉鎖されています。 <img alt="図3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50829/50829fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50829/50829fig3.jpg"> 図3。寄生された赤血球（スケールバー、20＆＃を示すライトの`sのステンド血液塗抹標本の血液寄生虫。a）実施例181;。マウス血液中のm）B）寄生虫を毎日ギムザ染色血液塗抹標本を分析することによってモニターした。重複感染マウスは、 マラリア原虫単独感染マウス（n = 10）に比べて減少寄生虫を持っています。結果は、平均±SDとして示されているが、*** P &lt;0.001。 1 PLoSのONEの許可を得て7（10）、e48110より転載。 <img alt="図4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50829/50829fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50829/50829fig4.jpg"> 図4。肺内のマウンテンバイクの検出。C57BL / 6マウスを、エアロゾルマウンテンバイクの100 CFUでチャレンジし、40日後に、Pとの共感染された蚊に刺されによるベルゲイ 。A）ある日のエアロゾル感染後マウンテンバイク 、所望の数の取り込みは、CFU決定のために全肺ホモジネートをメッキすることにより確認した。B）細菌同時感染時のLの負荷は、CFU分析（d40/d0 のMtb）を介して3匹のマウスの肺溶解物において測定した。 12日の同時感染した後、肺溶解物を MTBコントロールのマラリアの重複感染の影響を判断するためにCFU分析に播種した。肺の中のMtb番号は、P.との同時感染の間に増加していることに注意してくださいベルグヘイ NK65。 X軸ラベル：同時感染後のMtb -infection/time後の時間。 1 PLoSのONEの許可を得て7（10）、e48110から適応。

結核、マラリア、人間と熱帯の貧しい集団における罹患率および死亡率の主要な原因の中で最も流行している感染症の2つです。我々は、感染の彼らの自然な経路を経て、両方の病原体攻撃後のマウスにおけるマラリア結核の重複感染の結果を研究するための実験的なモデルシステムを確立した。

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

この手順の全体的な目標は、in vivo で結核とマラリアの同時感染の影響を調査するために使用できる実験マウスモデルを確立することです。これは、まず実験動物をEMに曝露することによって達成されます。吸入曝露システムを使用した感染性エアロゾル飛沫を含む結核。第2ステップでは、肺組織のCFU分析により、所望の数のM結核の取り込みを確認します。エアロゾル感染の1日後、40日後、マウスは感染性の蚊にさらされ、マラリア原虫のスポロゾイトが自然に伝染します。これは、血液食中に皮膚全体に沈着します。最終ステップでは、マラリアの血液段階の寄生虫の発生は、ギムサ染色、血液塗抹標本の分析によって監視されます。最終的には、肺における結核の負担と、共感染動物の血液中の寄生虫の数を列挙して、結核とマラリアの経過をそれぞれ決定できます。この方法は、マラリア原虫との同時感染が結核菌感染の病因と制御にどのように影響するかなど、結核、マラリアの重複感染の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。このプロトコルは、オジウムブリとの同時感染が免疫適格なC 57 PL 6マウスである結核微生物の慢性期にどのように影響するかを調査するために開発されました。また、ノックアウトマウスを含む他のマウス系統に適用したり、他のマイコバクテリウムまたはオジウム種と一緒に使用したりすることもできます。結核菌を温めることから始めます。既知のCFU力価のストック。細胞が融解したら、27ゲージの針が取り付けられた1ミリリットルの注射器を使用して、懸濁液を5回慎重に混合して細菌の塊を分散させ、エアロゾルの生成を避け、所望の感染用量に応じて、必要な量のマイコバクテリアストックを滅菌PBSを含む50ミリリットルのチューブに移し、最終容量の6ミリリットルにします。次に、実験動物を個々に仕切り分けられたメッシュバスケットに入れます。バスケットを円形のエアゾールチャンバーに入れ、チャンバーの蓋を閉めます。ベンチュリネブライザーユニットを3つのステンレス鋼ソケットジョイントに取り付けます。マイコバクテリア懸濁液を10ミリリットルのシリンジに吸引し、18ゲージの鈍い針を取り付け、シリンジを密閉された輸送ボックス内のエアロゾルチャンバーに運びます。次に、ネブライザースクリューキャップを取り外し、マイコバクテリア懸濁液をユニットに慎重に注入します。エアロゾルの発生にご注意ください。シリンジを2%バートンが入った鋭利物容器に廃棄し、ネブライザーを密封します。.サイクルが完了したら、吸入装置を運転します。エアロゾルチャンバーを開く前に、マイコバクテリア懸濁液が完全に噴霧されていることを確認してください。電動空気清浄マスクヘルメットを装着し、動物をケージに戻し、エアロゾル感染の1日後にネブライザーバスケットとエアロゾルチャンバー内を滅菌し、クラス2のバイオセーフティキャビネット内の解剖板上の吸収紙に指定された安楽死した制御動物を置き、マウスごとに70%エタノールでマウスを消毒します。まず、腹部の中央に小さな切開を行い、次に動物の頭の上の皮膚を引っ込めます。次に、手術用ハサミを使用して腹部と胸郭を開きます。肺にアクセスできるように胸壁を取り外してから、肺を取り除きます。肺を2ミリリットルの均質化緩衝液を備えた15ミリリットルのチューブに移し、次に5ミリリットルの注射器のプランジャーを使用して、100マイクロメートルのふるいを通して組織を小さなペトリ皿に濾します。バリアチップを備えた1ミリリットルのピペットを使用して、ふるいを数回洗い流し、約250マイクロリットルの肺ホモジネートを8つの寒天プレートに分配します。使い捨てのスプレッダーを使用して、プレートが乾いたらサンプルを慎重にプレートします。各プレートをパーフィルで密封します。それらをアルミホイルで包み、摂氏37度で少なくとも4週間直立させてインキュベートします。ナイーブマウスまたはマイコバクテリウムに感染したマウスに蚊に刺されてマラリアに感染させるには、麻酔をかけた動物を蚊かごのネットに置き、感染性の蚊が膜を介して餌を供給できるようにして、スポロゾイトの感染を確実にします。マウスをケージに10〜15分間放置します。マウスをペーパータオルの上にケージに戻し、ペーパータオルで覆って、麻酔から目覚めるまで暖かく保ちます。ケージのネットを通して70%エタノールまたは他の消毒剤を蚊に噴霧して蚊を殺し、ケージをオートクレーブしてケージを滅菌します。パラを監視するには、針を使用して各感染動物の静脈の最後を穿刺し、1滴の血液を採取します。スライドガラスの両端で、別のスライドを使用して、下部スライドの長さの半分に1滴の血液を引っ張ります。次に、スプレッドスライドを裏返し、もう一方の端を2番目の塗抹標本に使用します。スライドを染色ラックに置きます。血液塗抹標本を絶対メタノールで簡単に固定し、次に風乾します。次にスライドするのは、ギザに汚れを浸します。10分後、脱イオン水で満たされた染色用VEEにスライドを数回浸したり入れたりして、余分な汚れを洗い流します。最後に、スライドを垂直位置で風乾します。スポロゾイトが蚊に刺されることによる実験動物の感染は、4〜5日後に血液期寄生虫の存在によって確認されるように、100%の感染率をもたらします。表に示されているように、ナイーブ結核に感染したマウスと結核菌に感染したマウスの両方に蚊に刺されることで、実験グループ内のすべての動物に一貫した再現性のある感染がもたらされます。pre patency と naive Control マウスを、それと結核菌の重複感染動物と比較することにより、pre patency がわずかに遅れていることが観察できます。結核菌に事前に感染したマウスでは、吸入曝露システムの使用により結核菌のマウスでは、個々のマウス間のばらつきが比較的少ない状態で、動物の肺への細菌の沈着が成功しました。感染したC 57ブラックシックスマウスの肺のマイコバクテリア負荷は、p burgaの存在下で増加します。.対照的に、共感染マウスは、マラリア原虫の単一感染マウスと比較してパラ血症が減少しています。この手順に続いて、フローサイトメトリーPCR Elizaや組織学的手法などの方法を目的の組織または体液に対して実行し、悪性寄生虫や結節基底に対して同時に誘発される免疫応答と、共感染した宿主でのそれらの相互作用を解剖することができます。ヒトの病原体である結核菌の微生物を扱うことは非常に危険であり、感染性エアロゾルへの曝露を常に避けるための対策を講じる必要があることを忘れないでください。結核菌に関するすべての実験作業は、適切なバイオセーフティレベル3の施設で実施されなければなりません。

an-experimental-model-to-study-tuberculosis-malaria-coinfection-upon

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

不定冠詞<em&gt;のin vitro</em研究する&gt;共同感染モデル<em&gt;熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）</emヒトの第一次単球由来の免疫細胞に&gt;-HIV-1の相互作用

出典:Mueller, A., 他結核菌とベルゲイ菌の自然伝播による結核-マラリア共感染を研究する実験モデル。J. Vis. Exp.(2014年)このビデオは、ネブライザーを用いたチャンバーシステムを用いてマイ コバクテリウム・結核(Mtb)...

マウスモデルにおける肺感染症に対する 結核菌 のエアロゾル投与

このビデオは、ヒトのM1およびM2分極単球由来マクロファージにおける結核菌感染に対する応答を研究する方法を示しています。フローサイトメトリーを使用すると、感染したマクロファージ集団と非感染したマクロファージ集団に関連するさまざまな表面マーカーの研究が可能になります。...

結核菌に感染した単球由来細胞の完全分化型マクロファージ感染モデル

マラリア-HIV同時感染のin vitro細胞培養モデルの生成

このビデオでは、脳マラリアの実験的なマウスモデルの生成を示しています。Plasmodium bergheiに感染した雌の蚊から分離されたスポロゾイトは、拘束されたマウスの尾静脈に注入され、血液脳関門の破壊と脳の炎症を引き起こし、脳マラリアを引き起こします。この感染マウスモデルは、脳マラリアに関連するin...

宿主蚊由来スポロゾイトを用いた実験的脳マラリアのマウスモデル作製

ヒトの同時感染はin vitroで再現するのが困難です。しかし、ヒトマラリア原虫は、新たに分離されたヒト末梢血単核細胞がHIVに自然に感染したのと同様に、in...

アン<em&gt;インビトロ</em&gt; HIV重感染のコンテキストでのマラリアに対する免疫応答を測定するためのモデル

ヒト結核感染は複雑なプロセスであり、in...

上の機能的研究のための3Dヒト肺組織モデル<em&gt;結核菌</em&gt;感染

私たちは、実験的な脳マラリアのマウスモデルを記述し、磁気共鳴画像法を用いて生体内で炎症性および微小血管の病理をどのように追跡できるかを示します。...

磁気共鳴映像法を用いた実験的大脳マラリアモデルにおける浮腫発生と微小血管病変のin vivo追跡

その自然の病原体菌 marinumを使用して大人のゼブラフィッシュ モデルひと結核にプロトコルを紹介します。抽出された DNA と感染したゼブラフィッシュの内臓からの RNA は、抗酸菌の合計負荷魚と qPCR...

結核抗酸菌 marinum感染成人ゼブラフィッシュをモデル化

ガレリアメロネラは最近、結核複合体の再現性、安価、倫理的に許容可能な感染モデルとして設立されました。ここでは、生物発光マイコバクテリウム・ボビスBCGルクスを用いたG.メロネラの正常な感染を確立するためのステップを説明し、実証する。...

結核複合体を研究するための感染モデルとしての無脊椎動物ガレリアメロネラの使用

ここでは、減衰BSL-2承認の 結核菌...

初期血管内感染中のマウス肺における減弱型自生 性結核菌 のインバイタルイメージング

学ぶ結核とマラリアの重複感染マウスモデル構築法。吸入暴露システムでMycobacterium tuberculosisを感染させ、蚊による自然感染でPlasmodium bergheiを接種し、両病原体の相互作用をin vivoで解析する。

自然送信時に結核マラリア重複感染を研究する実験モデル結核菌とマラリアベルゲイ

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