Name: プランクトン細胞(MBC-P)およびバイオフィルム細胞(MBC-B)の抗菌剤の最小殺菌濃度の確立 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-02T20:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: 学ぶ 96ウェルマイクロプレートを用いて、バイオフィルム形成菌の浮遊細胞とバイオフィルム細胞の抗菌剤耐性を比較する方法。最小殺菌濃度（MBC）の測定により、バイオフィルムが細菌の耐性を高めるメカニズムを解明できます。

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著者は、この原稿の編集上の助けのために李張、西安志李、アーロン・ヒンツ、クレイトン・ホールに感謝したいと思います。このアッセイは当初、ダートマスのガイゼル医学部ジョージ・オトゥールの研究室で開発されました。博士マーの研究室での研究は、カナダの自然科学工学研究評議会と嚢胞性線維症カナダからの助成金によって支えられている。

1. MBC-B
<ol><li>
バイオフィルムの成長 (オトゥール 9 から適応).
	<ol>
<li>37°Cで富の培地で16時間の目的および変異株の野生型株の培養を成長させる。</li>
		<li>飽和した一晩培養物1:100を抗生物質耐性アッセイ用の新鮮な培地に希釈する。 P. 緑素吸塩 の標準培地は、M63最小限の培地で、硫酸マグネシウムとアルギニンを添加した( 表1参照)。この培地は、より堅牢なバイオフィルムの形成を刺激する。</li>
		<li>96ウェルマイクロティター皿にウェルあたり100μlの希釈液を加える( 表1参照)。これらのアッセイは、通常、各株の三重で行われるので、各株の24のウェルがあるはずです。</li>
		<li>マイクロタイタープレートを37°Cで24時間インキュベートします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
前形バイオフィルムを抗生物質の濃度勾配にさらす
	<ol>
<li>7つの井戸のための抗生物質の10x希釈シリーズを準備する。例: 抗生物質トブラマイシンの場合、ウェル内の最終濃度は 0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.006 mg/ml 5-8. 25 mg/mlのストックから、4、2、1、0.5、0.25、0.125、および0.06 mg/mlの10x希釈液を調製する。氷の上に置いておきなさい。</li>
		<li>マルチチャンネルピペットを使用して、使用済み上清(プランクトニックセルを含む)を取り除く( 表1参照)。</li>
		<li>すべてのウェルに90 μl M63(Mg/Arg)を加えます。</li>
		<li>所望の最終濃度を達成するために、各10倍の抗生物質濃度の10 μlを加えます。反復および株ごとに最終ウェルに10μl水(抗生物質制御なし)を加えます。</li>
		<li>マイクロタイタープレートを37°Cで24時間インキュベートします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
メディアをリフレッシュし、生きた細胞の剥離を可能にする。
	<ol>
<li>マルチチャンネルピペットを使用して、使用済み上清(プランクトン細胞を含む)を取り除きます。</li>
		<li>すべてのウェルに115 μl M63(Mg/Arg)を加えます。</li>
		<li>マイクロタイタープレートを37°Cで24時間インキュベートします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
生細胞のアッセイ。
	<ol>
<li>96ウェルマイクロティタープレートごとに2枚のLB寒天プレートにラベルを付けます。</li>
		<li>100%エタノールにプロングを浸し、ブンゼンバーナーの開いた炎を横切って突起を通過させることによって、マルチプロング装置( 表1を参照)を殺菌します。繰り返す。プロングを少し冷まします。マルチプロング装置を用いて、マイクロタイタープレートの各ウェルからLB寒天板の表面にプランクトン培養液の〜3μl(通常は突起の先端に保持される量)を移す。</li>
		<li>LB寒天プレートを37°Cで16時間インキュベートします。</li>
		<li>細菌増殖のためのカットオフを目で同定することにより、抗生物質の最小殺菌濃度を決定する(図1)。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. MBC-P
<ol><li>
細菌株の準備
	<ol>
<li>37°Cで富の培地で16時間の目的および変異株の野生型株の培養を成長させる。</li>
		<li>飽和した一晩培養物1:100を抗生物質耐性アッセイ用の新鮮な培地に希釈する。 P. 緑素吸塩 の標準培地は、M63最小限の培地で、硫酸マグネシウムとアルギニンを添加した( 表1参照)。</li>
		<li>96ウェルマイクロティター皿にウェルあたり90μlの希釈液を加える( 表1参照)。これらのアッセイは、通常、各株の三重で行われるので、各株の24のウェルがあるはずです。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
抗生物質の濃度勾配にプランクトニック細胞を曝露する
	<ol>
<li>7つの井戸のための抗生物質の10x希釈シリーズを準備する。例: 抗生物質トブラマイシンの場合、ウェルの最終濃度は 0.032、0.016、0.008、0.004、0.002、0.001、および 0.0005 mg/ml です。25 mg/ml の在庫から、0.32、0.16、0.08、0.04、0.02、0.01、および 0.005 mg/ml の希釈液を準備します。氷の上に置いておきなさい。</li>
		<li>所望の最終濃度を達成するために、各10倍の抗生物質濃度の10 μlを加えます。反復および株ごとに最終ウェルに10μl水(抗生物質制御なし)を加えます。</li>
		<li>マイクロタイタープレートを37°Cで24時間インキュベートします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
生細胞のアッセイ。
	<ol>
<li>96ウェルマイクロティタープレートごとに2枚のLB寒天プレートにラベルを付けます。</li>
		<li>100%エタノールにプロングを浸し、ブンゼンバーナーの開いた炎を横切って突起を通過させることによって、マルチプロング装置( 表1を参照)を殺菌します。繰り返す。プロングを少し冷まします。マルチプロング装置を用いて、マイクロタイタープレートの各ウェルからLB寒天板の表面にプランクトン培養液の〜3μl(通常は突起の先端に保持される量)を移す。</li>
		<li>LB寒天プレートを37°Cで16時間インキュベートします。</li>
		<li>細菌増殖のために遮断を同定することにより、抗生物質の殺菌濃度を最小限に抑える(図2)。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. Approved standard-eighth edition. , Ninth Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2009).</li>
<li>Hoiby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+resistance+of+bacterial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Antimicrob.+Agents%22%5BJournal%5D)">Antibiotic resistance of bacterial biofilms.</a> Int. J. Antimicrob. Agents. 35 (4), 322-332 (2010).</li>
<li>Mah, T. F., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+biofilm+resistance+to+antimicrobial+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of biofilm resistance to antimicrobial agents.</a> Trends Microbiol. 9 (1), 34-39 (2001).</li>
<li>Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm-specific+antibiotic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Biofilm-specific antibiotic resistance.</a> Future Microbiol. 7 (9), 1061-1072 (2012).</li>
<li>Mah, T. F., Pitts, B., Pellock, B., Walker, G. C., Stewart, P. S., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+basis+for+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+antibiotic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genetic basis for Pseudomonas aeruginosa biofilm antibiotic resistance.</a> Nature. 426 (6964), 306-310 (2003).</li>
<li>Zhang, L., Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Involvement+of+a+Novel+Efflux+System+in+Biofilm-Specific+Resistance+to+Antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">The Involvement of a Novel Efflux System in Biofilm-Specific Resistance to Antibiotics.</a> J. Bacteriol. 190 (13), 4447-4452 (2008).</li>
<li>Zhang, L., Hinz, A. J., Nadeau, J. P., Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+tssC1+Links+Type+VI+Secretion+and+Biofilm-specific+Antibiotic+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa tssC1 Links Type VI Secretion and Biofilm-specific Antibiotic Resistance.</a> J. Bacteriol. 193 (19), 5510-5513 (2011).</li>
<li>Beaudoin, T., Zhang, L., Hinz, A. J., Parr, C. J., Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Biofilm-Specific+Antibiotic+Resistance+Gene%2C+ndvB%2C+is+Important+for+Expression+of+Ethanol+Oxidation+Genes+in+Pseudomonas+aeruginosa+Biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">The Biofilm-Specific Antibiotic Resistance Gene, ndvB, is Important for Expression of Ethanol Oxidation Genes in Pseudomonas aeruginosa Biofilms.</a> J. Bacteriol. 194 (12), 3128-3136 (2012).</li>
<li>O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtiter+Dish+Biofilm+Formation+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Microtiter Dish Biofilm Formation Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2437(2011).</li>
<li>Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multidrug+tolerance+of+biofilms+and+persister+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Multidrug tolerance of biofilms and persister cells.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 322, 107-131 (2008).</li>
<li>Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-First Informational Supplement. 31, Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2011).</li>
<li>Merritt, J. H., Kadouri, D. E., O'Toole, G. A. Growing and Analyzing Static Biofilms. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMerritt%2C+JH+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22">Curr. Protoc. Microbiol</a>. 1, J. Wiley & Sons. Hoboken, NJ. 1B.1.1-1B.1.17 (2005).</li>
<li>Ramey, B. E., Parsek, M. R. Chapter 1. Growing and analyzing biofilms in fermenters. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRamey%2C+BE+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22">Curr. Protoc. Microbiol</a>. 1, J. Wiley & Sons. Hoboken, NJ. 1B.3.1-1B.3.14 (2005).</li>
</ol>

著者は、彼女が競合する財政的利益を持っていないと宣言します。

プランクトニック細胞における抗生物質耐性は、細胞の永久的な変化(例えば 突然変異)による抗生物質の最小阻害濃度(MIC)の増加と定義される。これまでに同定されたバイオフィルム特異的耐性または耐性のメカニズムは、バイオフィルム内の野生型遺伝子の発現の結果である。したがって、従来の抵抗の定義はバイオフィルムには適用されません。しかし、別の定義のセットが提示されている:抵抗メカニズムは、抗生物質がその目標にアクセスするのを防ぎ、耐性メカニズムは抗生物質10の標的をシャットダウンする。バイオフィルム特異的抗生物質耐性機構は、これらの定義の両方を包含する。「抵抗性」という用語は、このプロトコル全体で使用されてきましたが、遺伝子が耐性または耐性に寄与しているかどうかを判断するために、さらなる実験を行う必要があります。
MBC-PおよびMBC-Bアッセイは、あらゆるバイオフィルム形成細菌株および任意の殺菌性抗菌剤に適合することができる。このアッセイを他の細菌および他の抗菌剤に適応させる2つの重要な基準は、バイオフィルム形成につながる条件を決定し、目的とする...

抗生物質耐性アッセイは、当初、細菌のプランクトニック(遊泳)培養物の耐性をアッセイするために開発されました。多くの細菌感染はバイオフィルム(表面付着細胞)を含むため、バイオフィルム特異的な抗生物質耐性をアッセイする方法の開発に興味を持っていました。しかし、ほとんどの抗生物質耐性アッセイは、バイオフィルムの耐性を測定するためには不十分です。例えば、最小阻害濃度(MIC)を決定することは、プランクトニック細菌培養 物1の抗生物質耐性を決定するためのゴールドスタンダードである。このアッセイは、希釈されたプランクトニック培養物と希釈系の抗生物質を混合することを伴う。 プランクトニック細胞の目に見える成長を阻害する抗生物質の濃度は、MICです。このアッセイは成長の阻害に依存しているため、定義上、それは、プレウジョンバイオフィルムにおける細胞の抗生物質感受性を調べる必要があるバイオフィルム培養物では動作できません。ここで説明するMBC-Bアッセイは、増殖阻害を測定する代わりに、バイオフィルムに存在する細胞を殺す抗生物質の濃度を決定する。従って、このアッセイは、確立されたバイオフィルム感染症の抗生物質治療を模倣し、 生体内での細菌抗生物質耐性のより関連性の高い見解を提供することを目的とする。
バイオフィルムは一般にプランクトニック培養 2-4 よりも抗生物質耐性が高いため、バイオフィルムの抗生物質耐性をプランクトニック培養物に直接関連付ける方法を考案する必要があった。したがって、この方法のもう一つの目標は、プランクトニック細胞とバイオフィルム細胞間の抗生物質耐性のレベルを直接比較できることである。ここで説明する MBC-P および MBC-B アッセイは、細胞が同様の条件で培養されるため、これを可能にします。我々は、バイオフィルム特異的抗生物質耐性 5-8 に重要ないくつかの遺伝子を研究するために、この方法を利用している。

<table><tbody><tr><td> 1x&nbsp;M63 </td><td></td><td></td><td> 5x&nbsp;15g KH2PO4、35g K2HPO4および10g(NH4)2SO4を1Lの水に溶かしてM63ストック。このストックはオートクレーブする必要はなく、室温で保存することができます。希釈 5x&nbsp;在庫1:5、オートクレーブ、冷却、次に目的のコンポーネントを追加します。 </td></tr><tr><td> KH2PO4 </td><td>Fisher</td><td>P285-500</td><td> </td></tr><tr><td> K2HPO4 </td><td>Fisher</td><td>P288-500</td><td> </td></tr><tr><td> (NH4)2SO4 </td><td>Sigma</td><td>A5132</td><td> </td></tr><tr><td> 硫酸マグネシウム </td><td>Fisher</td><td><palign="center">M63-500</td><td> 1 mMの最終濃度に加算します。&nbsp;水とオートクレーブ中の1 Mストックとして調製します. </td></tr><tr><td> トブラマイシン </td><td>Sigma</td><td></td><td> 50 mg/m&nbsp;株式。アリコートとストア -</スパン>20&deg;C. </td></tr><tr><td> アルギニン </td><td>Sigma</td><td>A5131</td><td> 0.4%の最終濃度に加算します。&nbsp;20%の水ストックとして調製し、ろ過滅菌します。&nbsp;この代替炭素/エネルギー源は、グルコースとカサミノ酸を置き換えることができます </td></tr><tr><td> 96ウェルマイクロタイタープレート </td><td>Corning</td><td>3595</td><td> 滅菌、平底、低蒸発 </td></tr><tr><td> Tranferpette (マルチチャンネルピペット) </td><td>BrandTech</td><td>2703610</td><td> 8チャンネル、 20-200 &MU;l </td></tr><tr><td> Multiprong device </td><td>Dan-Kar</td><td>MC48</td><td> 48 プロングは、96 ウェルのマイクロタイタープレートの &frac12; に収まります </td></tr></tbody></table>

プランクトン細胞(mbc-p)およびバイオフィルム細胞(mbc-b)の抗菌剤の最小殺菌濃度の確立

Establishing the Minimal Bactericidal Concentration of an Antimicrobial Agent for Planktonic Cells (MBC-P) and Biofilm Cells (MBC-B)

このプロトコルは、 インビトロでバイオフィルムを形成することができる細菌株のプランクトニックとバイオフィルム耐性の間の直接比較を可能にする。細菌は96ウェルマイクロティタープレートの井戸に接種される。プランクトニックアッセイの場合、選択した抗菌剤の連続希釈が細菌懸濁液に添加される。バイオフィルムアッセイでは、一度接種すると、細菌は一定期間にわたってバイオフィルムを形成するために残される。未接続の細胞は、ウェルから除去され、培地が補充され、選択した抗菌剤の連続希釈が加え加える。抗菌剤に曝された後、プランクトニック細胞は成長のためにアッセイされる。バイオフィルムアッセイの場合、培地は、抗菌剤を欠いた新鮮な培地でリフレッシュされ、バイオフィルム細胞は回復するために残されます。バイオフィルム細胞の生存率は、回復期間後にアッセイされる。抗菌剤のMBC-Pは、プランクトン培養中の細胞を殺す薬物の最も低い濃度として定義される。 対照的に、株に対するMBC-Bは、24時間の抗菌剤の濃度を増加させるために、プレフォー形成バイオフィルムを曝露することによって決定される。MBC-Bは、バイオフィルム内の細胞を殺す抗菌剤の最も低い濃度として定義されます。

MBC-PおよびMBC-Bアッセイを実施し、PA14野生型の感度をPA14∆ndvBと比較した。トブラマイシンは抗生物質として使用された。ステップ 1.4.4 (図 1) とステップ 2.3.4 (図 2) に対応する結果が表示されます。PA14および∆ndvBは、三重化でMBC-PおよびMBC-Bアッセイに接種された。MBC-B プロトコルのステップ 1.0-1.4 および MBC-P プロトコルのステップ 2.0-2.3 を完了した後、生存セルを LB 寒天プレートにメッキしました。トブラマイシン(μ g/ml)の濃度は、細胞の左側に示されています。PA14 の MBC-B は 100 μg/ml、ndvB ∆の MBC-B は 12.5 <span style="font-size: 14px; line...

このプロトコルは、96ウェルマイクロタイタープレートを使用して インビトロで バイオフィルムを形成することができる細菌株のプランクトニックとバイオフィルム耐性の間の直接比較を可能にする。プランクトニックまたはバイオフィルム細菌は、選択した抗菌剤の連続希釈液に曝露される。生存率は寒天プレート上の成長によってアッセイされる。

プランクトン細胞(MBC-P)およびバイオフィルム細胞(MBC-B)の抗菌剤の最小殺菌濃度の確立

This protocol allows for a direct comparison between planktonic and biofilm resistance for a bacterial strain that can form a biofilm in vitro. Bacteria ...

この手順では、バイオフィルムを形成する可能性のある細菌株のプランクトン耐性とバイオフィルム耐性を直接比較します。まず、バイオフィルムを作製し、培地を補充し、選択した抗菌剤の段階希釈液を塗布します。次に、細胞を新鮮な培地で回復させます。次に、LBオーガーにプレーティングすることにより、細胞の生存率をアッセイします。最終的に、プランクトン細胞とバイオフィルム細胞の最小殺菌濃度を決定することで、バイオフィルムの成長に起因する耐性の増加を示します。一般に、この方法に不慣れな個人は、隣接する井戸を汚染したり、バクテリアを殺さないように多岐にわたるデバイスの突起を十分に冷却できなかったりするため、苦労します。野生型で変異株の細菌である細菌の変異株を摂氏37度の濃厚培地で16時間培養すると、飽和した一晩の培養物を、マグネシウム、硫酸塩、アルギニンを添加した最小限の培地であるM 63のような新鮮な培地に希釈します。次にEloqua。ウェルあたり100マイクロリットル。各菌株に24ウェルを割り当て、摂氏37度で24時間インキュベートします。次に、7つのウェルに希釈シリーズの抗生物質の10倍ストック溶液を調製し、氷上に保存します。マルチチャンネルピペットを使用して、プランクトン細胞を含む使用済み上清を取り除きます。次に、90マイクロリットルのM 63をすべてのウェルに加え、10マイクロリットルの適切な抗生物質ストック溶液を抗生物質なしコントロールに加えます。さて、複製とひずみごとに、10マイクロリットルの水を追加します。マイクロ力価プレートを摂氏37度で24時間インキュベートします。マルチチャンネルピペットを使用して、プランクトン細胞を含む使用済み上清を取り除きます。115マイクロリットルのM 63をすべてのウェルに加え、24時間培養を続けます。摂氏37度で。1つの半分96ごとに1ポンドのオーガープレートにラベルを付けます。多股のデバイスを滅菌するためのマイクロタイタープレートを100%エタノールに浸し、ブンゼンバーナーの直火にプロングを通します。プロングを少し冷まします。プロングの先端を使用します。マイクロタイタープレートの各ウェルからプランクトン培養物をLBオーガープレートの表面に移します。LBオーガープレートを摂氏37度に16時間置きます。次に、抗生物質培養物、野生型および変異株の細菌の最小殺菌濃度として、細菌増殖のカットオフを視覚的に決定し、摂氏37度の濃厚培地で16時間、飽和した一晩培養物を新鮮な培地に希釈し、96ウェルマイクロタイター皿の各ウェルに抗生物質耐性アッセイを行います。細菌希釈液の90マイクロリットルを追加します。次に、浮遊性細胞を抗生物質の濃度勾配にさらします。まず、トブラマイシンマイシンのような抗生物質の希釈シリーズの10倍ストック溶液から始めます。実験デザインに従って、10マイクロリットルの抗生物質茎を追加します。次に、各複製および菌株について、抗生物質を使用しない制御井戸に10マイクロリットルの水を追加します。マイクロタイタープレートを摂氏37度で24時間インキュベートし、生細胞をアッセイします。まず、96ウェルマイクロタイタープレートの半分ごとに1つのLBオーガープレートにラベルを付けます。多岐にわたるデバイスを100%エタノールで炎上させて滅菌します。一度繰り返します。次に、マルチプロングデバイスを使用して、マイクロタイタープレートの各ウェルからLBオーガープレートの表面に約3マイクロリットルのプランクトン培養物を移します。プレートを摂氏37度で16時間インキュベートします。次に、細菌の増殖のカットオフを目視で特定することにより、抗生物質の最小殺菌濃度を決定します。この実験では、2つの異なる最小BACTERICIDAL濃度アッセイを使用して、PA 14野生型と抗生物質耐性を欠く変異株の感度を比較しました。遺伝子NDVB。ここでは、抗生物質トブラマイシンの最小殺菌濃度をバイオフィルムについて測定しました。PA 14のMBCBは100マイクログラム/ミリリットルであるのに対し、変異体は1ミリリットルあたり12.5マイクログラムです。対照的に、プランクトン細胞に対するトブラマイシンの最小殺菌濃度は、PA 14野生型と変異体の両方で1ミリリットルあたり8マイクログラムでした。一度マスターすれば、NBCBは5日間に分けて、約1時間で完了することができます。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

現在の診断抗菌薬感受性試験では、栄養豊富な、好気的条件下での分離株のプランクトンの成長に依存しています。ここでは、嚢胞性線維症の肺のより代表的な好気性および微好気性条件の両方の下で緑膿菌バイオフィルムの抗菌薬感受性を検討する別の人工痰媒体を採用しています。...

に対する抗生物質の有効性をテストするための人工痰培地の使用<em&gt;緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）</em&gt;肺嚢胞性線維症へのより適切な条件で

このビデオは、細菌に対する試験用抗生物質の最小阻害濃度(MIC)を決定するためのマイクロタイタープレートベースの方法を示しています。細菌性病原体Pseudomonas...

抗生物質の最小阻害濃度を評価するためのマイクロタイタープレート法

細菌のピオメラニン産生は、酸化ストレスと病原性に対する耐性の増加をもたらします。ピオメラニン産生の阻害を決定し、その結果生じる細菌の酸化ストレスに対する感受性の増加を分析するために使用できる技術について報告し、抗生物質の最小阻害濃度(MIC)を決定します。...

細菌Pyomelanin産生を阻害し、酸化ストレスに対する感受性の増加に対応を決定するための方法

この研究は、バイオフィルム阻害剤とそのBacillus...

研究のための方法論<em&gt; B。枯草菌</em小分子バイオフィルム阻害剤を特徴付けるためのモデルとしての&gt;バイオフィルム

このプロトコルは、ハイスループットの96ウェルペッグ蓋静的バイオフィルムスクリーニングのための自己組織化ディープウェルPCRプレート装置を使用してバイオフィルム成長およびバイオマス測定を実行する方法論を提示する。...

PCRプレートディープウェルマイクロプレートデバイスを用いた細菌バイオフィルムバイオマスの生成

このプロトコルは、酪農産業におけるバイオフィルムを根絶するための有機ペルオキシ酸の有効性を評価するための静的方法と動的方法を組み合わせたアプローチについて説明しています。このアプローチは、バイオフィルムを制御するための新しい生物学的または化学的製剤の有効性を試験するためにも使用され得る。...

静的法と動的法を組み合わせたアプローチによる有機ペルオキシ酸の乳バイオフィルム根絶効果評価

ナノ粒子やナノ構造表面の抗菌活性を in vitro...

in vitroでのナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性の評価

このプロトコルは、ペリクルバイオフィルムを開発するための堅牢な方法を説明しています。この分析法は、さまざまな培養量に拡張可能であり、さまざまな実験目的に容易に採用できます。この分析法の設計により、いくつかのマイコバクテリア種のバイオフィルム形成能を定性的または定量的に評価することができます。...

抗菌薬耐性研究のモデルとしてのマイコバクテリアバイオフィルムの増殖

この方法論により、研究および臨床検査室での抗菌剤感受性試験のための嚢胞性線維症における多微生物バイオフィルムモデルの確立が可能になります。このモデルは、さまざまな出力に対して正確で信頼性の高い結果を提供します。...

嚢胞性線維症における抗菌薬試験のための多微生物コロニーバイオフィルムモデルの開発

本プロトコルは、細菌殺菌活性モデリングと組合せ相互作用アッセイを用いて、微生物制御を改善し全体的な殺菌剤使用量を減らす相乗効果を特定することを目的とした、植物化学物質が従来の殺菌剤の殺菌効果をどのように強化できるかを評価する体系的な枠組みを提供します。...

in vitro 植物由来分子が従来の殺生物剤に与える増強効果の評価

学ぶ 96ウェルマイクロプレートを用いて、バイオフィルム形成菌の浮遊細胞とバイオフィルム細胞の抗菌剤耐性を比較する方法。最小殺菌濃度（MBC）の測定により、バイオフィルムが細菌の耐性を高めるメカニズムを解明できます。

プランクトン細胞(MBC-P)およびバイオフィルム細胞(MBC-B)の抗菌剤の最小殺菌濃度の確立

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