脊髄虚血再灌流のマウスモデルにおいて胸部大動脈閉塞によって再現可能対麻痺

本実験の全般的な目的は、マウスモデルを用いて脊髄虚血の影響を研究することです。まず、大腿動脈にレーザードップラー血流計プローブを挿入します。次に、大動脈弓および左鎖骨下動脈にアクセスするために胸骨切開を行います。

次に、脊髄への動脈血流を十分に減少させるため、大動脈および鎖骨下動脈の慎重な剥離を行います。結果を得ます。Basoマウススコアに基づく術後の神経学的欠損であるchoを確認します。

側胸壁切開などの他の既存の手法に対する本手法の主な利点は、胸膜腔を侵害しないことです。この手法は、脊髄の病態生理や虚血再灌流障害に関する疑問の解明に寄与し、薬理学的介入の可能性を提供します。本手法の意義は、脊髄虚血後の対麻痺を防止する治療法への応用にまで及びます。

この手法は、胸腔内手術を困難にする対麻痺についての知見を提供できるだけでなく、低血圧や血管疾患など、急性脊髄虚血を引き起こす他の疾患プロセスにも適用可能です。一般的に、この手法に不慣れな者は、死亡、出血、または気胸を避けるために細心の注意が必要なため、大動脈弓の剥離に苦労します。そのため、文献に広く記載されている側胸壁切開アプローチにおいて、我々の動物モデルで死亡率が高くなるという困難に数回直面した後、本手法を考案しました。

縦隔の剥離操作中に術中死亡を招く恐れがあり、極めて慎重な操作が求められるため、本手法の視覚的な実演は非常に重要です。本文のプロトコルに従ってマウスを麻酔し、十分に鎮静されていることを確認した後、胸部正中線および左下肢の腹面の除毛を行います。潤滑剤を塗布した直腸プローブをマウスの直腸に挿入し、手術台に固定します。加熱台を調整し、直腸温度の目標値を36.5 °Cに設定します。

次に、大腿動脈の上に小さな切開を加え、皮膚を皮下組織から剥離します。その後、大腿動脈の上にレーザードップラープローブを挿入します。大動脈弓および鎖骨下動脈の剥離を行うために、灌流モニターの値が800灌流ユニット以上になるまでプローブの位置を調整します。

胸骨切痕の上方に2 cmの皮膚切開を加え、皮膚を皮下組織から慎重に剥離します。出血が生じた場合は、顎下腺を剥離して除けます。綿棒を用いて、無血管層に軽く圧迫を加えます。

ピンセットを用いて、下顎腺を正中線に沿って分ける。胸骨をそっと持ち上げ、はさみを用いて胸骨の正中線に沿って1 cmの正中胸骨切開を慎重に行う。胸骨の両端に5-0の牽引縫合糸を配置し、胸骨を外側に牽引して手術台に縫合糸で固定する。

次に、鈍的剥離を用いて、気管に沿った胸骨肩甲筋を遊離させます。その後、はさみで左の胸骨肩甲筋を分割し、術野の視認性を高めます。胸腺を周囲の組織から剥離して遊離させます。

大血管が視認できるまで鈍的剥離を続けます。胸腔内に進入しないよう細心の注意を払いながら、大動脈弓と左鎖骨下動脈に血管クランプを装着します。灌流ユニットの減少率が90%を超えていることを確認し、末梢への血流が適切に遮断されていることを検証します。

塞栓を4～8分間継続します。時間が経過したら、血管クランプを取り外し、止血を確認してから胸骨正中切開部と皮膚を閉鎖します。まず、マウスの左側の牽引縫合糸を外すことから始めてください。

右側の牽引縫合糸を用いて胸骨切開部を閉鎖し、5-0の連続縫合で皮膚を閉鎖します。マウスをヒーターパッド上のケージ内で回復させ、その後、餌と水がある通常ケージに戻します。呼吸困難の兆候がないか監視し、必要に応じて、規定のプロトコルに従って安楽死させてください。

最後に、動物のモニタリングには、運動能を評価するBasoマウススケールを使用します。12時間間隔で、マウスにシャム手術または4〜8分間の大動脈閉塞術を施しました。術後、動物はここに示すBasoマウススコアリングシステムによって評価されました。

このグラフは、偽手術を受けたマウスでは、術後どの時点においても観察可能な機能欠損がなかったことを示しています。中等度の虚血にさらされたマウスでは、12時間後には後肢機能がほぼ正常でしたが、その後段階的に機能が低下し、48時間までには完全な麻痺に至りました。また、長時間虚血群のマウスでは、手術後に完全な麻痺が生じ、機能の回復は見られませんでした。

このビデオを視聴することで、大動脈弓を安全に解剖し、脊髄への動脈血流を適切に減少させる方法について十分に理解することができます。