Name: パーキンソン病における感受性メカニズムのマスク解除を行う遺伝子環境相互作用モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-07T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: 学ぶ lipoxygenaseイソザイムがパーキンソン病の黒質線状体変性に与える影響について。MPTP神経毒素モデルを用いて、LOX欠損マウスのドーパミン神経保護と神経炎症メカニズムを探索する。

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この研究は、国立衛生研究所NIGMS 056062によって資金提供されました。

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この遺伝子環境相互作用研究の設計により、ニグロストリアタル経路における5-LOXアイソザイムの二重性に関する新しい情報を得ることを可能にしました。5-LOXイソザイムとその野生型のゴミを欠いたトランスジェニックでの生理食素またはMPTP治療後にHPLCを測定することで、その欠乏は毒性条件下で保護されているように見えるが、通常の条件下では酵素の欠乏は線条体ドーパミンレベルを低下させ、有害である可能性があることに注意することができた。したがって、5-LOXアイソザイムが正常な条件下で線条性ドーパミン作動性トーンに寄与することを実証することができるが、毒性の挑戦4に続く損傷に寄与することができる。
さらなる評価は、ニグロストリエータ毒性におけるLOXアイソザイムの役割に関する新たな機械学的洞察を与えるべきであるが、西洋のブロット分析(図3)と免疫構造学的研究(図2)は、神経炎症マーカーが少なくとも部分的にはMPTPにさらされた5-LOXイソザイム欠損コホートで減衰し...

遺伝子環境相互作用モデルの使用は、特発性パーキンソン病(PD)に影響を及ぼす可能性のある危険因子を模倣するアプローチを提供し、遺伝的または毒性のあるシステムの単独使用によって解明される可能性が低い機械学的洞察を識別する機会を与える1,2。ここでは、この点を説明し、神経炎症および毒性に対するリポキシゲナーゼ(LOX)イソザイム活性をよりよく理解するために、ニグストリアティール変性3の1-メチル-4-フェニル-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン(MPTP)マウスモデルの応用を説明する。LOXアイソザイムの役割は、脳卒中7およびアルツハイマー病8,9を含む末梢疾患5,6とCNS疾患において広く評価されているが、PDに関連するニグロストリエータル機能および変性におけるアイソザイムの家族の役割はよく理解されておらず、研究を保証する。MPTP神経毒は、ニグロストリアティカル経路の優遇変性を示し、PD患者10における運動障害の根本である線条体ドーパミン枯渇およびニグラードパミン作動性細胞喪失を再現する。このモデルは、非運動および運動PDの挙動および率直なαシヌクレイン陽性Lewy身体病理学の完全なカドレを再現していないが、それは確実に三元性ドーパミン損失を伴うニガラル細胞死を生み出すために利用可能な最良の特徴非侵襲モデルであるため、ニグロストリアトリ物質損傷に寄与する新しい機械学的標的を解明し、初期段階の翻訳試験に有用であった。MPTPマウスの広い使用は、急性、亜急性から慢性16-18までのパラダイムを用いて、治療レジメン18,21,22に応じて毒性の異なるメカニズムの活性化を伴う軽度から重度のニグロストリアタル損傷を生じさせる投薬の標準化を可能にした。その結果、23-25を利用した治療薬またはトランスジェニックモデルに応じて、ニグロストリアザルタル傷害の増強または減少を引き起こし得る「病変の窓」を標的とすることを可能にする。
また、トランスレーショナルおよびディスカバリー生物学研究には、損傷を評価するために使用される技術と、そのような方法が提供する証拠も不可欠です。MPTPマウスモデルについては、病変を評価するための確立された指標は、ドーパミンおよびその代謝産物を含む線条体ドーパミン作動性トーンのマーカーの測定であり、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)のウェスタンブロット分析、ドーパミン合成における速度制限酵素、および西洋ブロットおよび免疫化学を用いたグリア活性化などの変性事象の指標である。これらは古典的な神経化学的、生化学的、および組織学的手順であるが、この技術は、ニグロストリアザルトパミン作動経路内の損傷の程度に関する重要かつ再現性のある読み出しを提供し、毒性のメカニズムを示し、PDにおける変性事象を理解する上で貴重なツールであることが証明されている。

<table><tbody><tr><td>1-メチル-4-フェニル-1,2,3,6-テトラ-ヒドロピリジン塩酸塩(MPTP-HCL)</td>PD<td>モデリング用</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0896</td></tr><tr><td>4%ホルムアルデヒド(パラホルムアルデヒド)溶液、リン酸緩衝液(PFA)</td>浸<td>漬固定用</td><td>American MasterTech Scientific</td><td>BUP0157</td></tr><tr><td>過塩素酸ACS試薬、70%(PCA)</td><td>HPLC酸抽出</td><td></td><td></td></tr><tr><td>用Sigma-Aldrich 244252トリスベース</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>組織均質化用</td></tr><tr><td>エチレンジアミノテトラ酢酸二ナトリウム塩二水和物 (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>組織均質化用</td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤カクテル</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8340</td><td>組織均質化用</td></tr><tr><td>ホスファターゼ阻害剤カクテル</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5726</td> 組織<td>均質化用</td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム(NaOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5881</td><td>for Lowry protein assay</td></tr><tr><td>スクロース、分子生物学、&ge;99.5% (GC)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td>凍結保護用</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水、粉末、pH 7.4 (0.01 M PBS 用)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813</td><td>IHC</td></tr><tr><td>BCA タンパク質アッセイキット</td><td>用 Pierce/Thermo</td><td>23225</td><td>タンパク質測定用</td></tr><tr><td>Novex 12% Tris-Glycine Mini Gels 1.0 mm、12 ウェル</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>EC60052BOX</td><td>SDS-PAGE</td></tr><tr><td>NuPAGE LDS サンプルバッファー (4x)</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>NP0007</td><td>for SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Novex Sharp Prestained Protein Standard&nbsp;</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>LC5800</td><td>protein ladder</td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7126</td><td>for SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Sodium dodecyl sulfate, electrophoresis, 98.5% (SDS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L3771</td><td>for SDS-PAGE</td></tr><tr><td>メチルアルコール, 無水, 試薬&nbsp;</td><td>American MasterTech Scientific</td><td>SPM1057C</td><td>メタノール 転写用</td></tr> 塩化<tr><td>ナトリウム (NaCl)、ACS 試薬</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>生理食塩水および緩衝液</td></tr><tr><td>脱脂粉乳</td><td>カーネーション</td><td>n/a</td><td>免疫ブロッティング用</td></tr><tr><td>Ponceau S solution in 5% acetic acid&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7170</td><td>免疫ブロッティング用</td></tr><tr><td>抗チロシンヒドロキシラーゼ (TH)、ヒツジ用ポリクローナル</td><td>Chemicon/Millipore</td><td>AB1542</td> 免疫<td>蛍光用&nbsp;</td></tr><tr><td>抗チロシンヒドロキシラーゼ(TH)、イ</td><td>ムノブロッティング</td>抗βのためのウサギポリクローナル<td>Pel-Freez生物学的製剤</td><td>P40101-0</td></tr><tr><td>;アクチン、ウサギ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2066</td><td>免疫ブロッティング抗</td></tr><tr><td>グリア線維性酸性タンパク質 (GFAP)、ウサギ ポリクローナル</td><td>Chemicon/Millipore</td><td>AB5804</td><td>免疫蛍光</td></tr>反応 <tr><td>抗グリア線維性酸性タンパク質 (GFAP)、マウスモノクローナル</td><td>Covance Inc.</td><td>イムノブロッティング用</td><td>SMI-22R</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td>イムノブロッティングヤ</td></tr><tr><td>ギ抗ウサギIgG(H + L)、ペルオキシダーゼコンジュゲート用&nbsp;</td><td>免疫蛍光</td>ヤギ抗羊のための<td>Fisher Scientific</td><td>31462</td></tr><tr>、<td>免疫蛍光</td>ヤ<td>ギ抗マウスのためのペルオキシダーゼ標識</td><td>Pierce/Thermo</td><td>31480</td></tr><tr>、<td>免疫蛍光</td>のための<td>ペルオキシダーゼ結合</td><td>Pierce/Thermo</td><td>31430</td>免疫蛍光</tr>のための<tr><td>SuperSignal West Pico 化学発光基板</td><td>Pierce/Thermo</td><td>34078</td>免疫<td>ブロッティング用</td></tr><tr><td>CL-XPosureフィルム 7インチ x 9.5インチ&nbsp;</td><td>Pierce/Thermo</td><td>34089</td><td>イムノブロッティング</td></tr><tr><td>用 Restore Western Blot Stripping Buffer&nbsp;</td><td>Pierce/Thermo</td><td>21059</td><td>イムノブロッティング用</td></tr><tr><td>クエン酸一水和物、ACS試薬、&ge;99.0%&nbsp;</td><td>IHC</td>ポリビニルピロリドン (PVP) 用<td>シグマ - アルドリッチ</td><td>C1909</td></tr><tr><td>IHC</td><td>ノーマル ロバ血清</td><td>ミリポア</td><td>S30-100ML</td></tr> シ<tr><td></td><td>グマ - アルドリッチ</td><td>P5288</td><td>IHC</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA )、凍結乾燥シ</td><td>グマ - アルドリッチ</td><td>A3294</td><td>IHC</td></tr><tr><td>トリトン X-100</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>BP151-01</td><td>IHC</td></tr> <tr><td>用ロバ抗ウサギIgG、Alexa Fluor 568ラベル&nbsp;</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A10042</td><td>IHC</td></tr><tr><td>Donkey Anti-Sheep IgG (H+L), FITC&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>713-095-147</td><td>IHC</td></tr><tr><td>VECTASHIELD ハードセット マウンティング メディウム with DAPI</td><td>ベクター ラボラトリーズ</td><td>H-1500</td><td>IHC</td></tr><tr><td>ノーマル ヤギ血清</td><td>ミリポア</td><td>S26-100ML</td><td>IHC</td></tr><tr><td>ベクタステイン ABC キット (ウサギ IgG ) 用&nbsp;</td><td>ベクターラボラトリーズ</td><td>PK-4001</td><td>for IHC; 10 & micro;1 mL PBSあたり溶液AおよびBの各溶液(説明書による)</td></tr><tr><td>DAB Peroxidase Substrate Kit, 3,3'-diaminobenzidine</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td>for IHC; 5 mlの冷たくしたddH2Oあたり、緩衝液2滴、DAB2滴、およびH2O2(H2O2 使用直前に添加)</td></tr><tr><td>過酸化水素、30%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>216763</td> in <td>IHC</td></tr><tr><td>Rabbit anti-Iba1</td><td>Biocare Medicals</td><td>CP290A</td><td>for IHC</td></tr><tr><td>Cresyl Violet Solution, Regular Strength&nbsp;</td><td>FDニューロテクノロジー</td>ズ<td>PS102-01</td><td>Iba1 IHC</td></tr><tr><td>95%エタノール、試薬アルコール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8382</td><td>IHC</td></tr><tr><td>100%無水エタノール</td>の脱水 <td>Mallinckrodt</td><td>7019-10</td><td>IHC酢酸の脱水</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td>IHC</td></tr><tr><td>キシレン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>534056</td><td>清算剤の脱染IHC</td></tr><tr><td>DPX封入剤</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>06522</td><td>DAB IHC</td></tr><tr><td>O.C.T. Compound用封入剤 - 凍結切片埋め込み用メディウム&nbsp;</td><td>American MasterTech Scientific</td><td>EMOCTCS</td><td>embeddium medium for cryostat cutting 過</td></tr><tr><td>マンガン酸カリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223468</td><td>DAB溶液を除染する</td></tr><tr><td>ドーパミン塩酸塩</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8502</td><td>for HPLC</td></tr><tr><td>3,4-ジヒドロキシフェニル酢酸(DOPAC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>850217</td><td>HPLC</td></tr><tr><td>用 ホモバニリン酸(HVA)</td><td></td><td>HPLC</td>過塩素酸(PCA)用Sigma-Aldrich <td>H1252</td></tr><tr><td>- 70%</td><td>HPLC用</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>244252</td></tr><tr><td>リン酸二水素ナトリウム一水和物</td><td>HPLC用</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71504</td></tr><tr><td>クエン酸一水和物</td><td>HPLC用</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1909</td></tr><tr><td>1-オクタンスルホン酸ナトリウム塩(OSA)</td><td>HPLC用</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O8380</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>for HPLC</td></tr><tr><td>アセトニトリル</td><td>EMD</td><td>AX0145-1</td><td>HPLC</td></tr><tr><td>用 HPLC グレードの蒸留脱イオン水 (ddH2O)</td> <td>Millipore</td><td></td><td>for HPLC</td></tr><tr><td>0.22 &micro;m GSTF膜</td><td>ろ過用</td><td>ミリポア</td><td></td></tr><tr><td>Corning Netwells</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3477</td><td>ポリエステルメッシュ底部付きポリスチレンインサート、IHC</td></tr><tr><td>用超音波細胞破壊器(Soniprep 150)</td><td>MSE</td><td>MSE.41371.274</td><td></td></tr><tr><td>微量遠心分離機</td><td>Eppendorf</td><td>5414R</td><td></td></tr><tr><td>ESA MD-150 逆相カラム&nbsp;</td><td>ESA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLCポンプ(Ultimate 3000)</td><td>Dionex</td><td>ISO-3100BM</td><td></td></tr><tr><td>HPLCオートサンプラー(Ultimate 3000)</td><td>Dionex</td><td>WPS-3000TSL</td><td></td></tr><tr><td>電気化学検出器</td><td>ESA</td><td>Coulochem III</td><td></td></tr><tr><td>ガードセル</td><td>ESA</td><td>5020</td><td></td></tr><tr><td>分析セル</td><td>ESA</td><td>5011A</td><td></td></tr><tr><td>Chromeleonソフトウェア</td><td>Dionex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eclipse E400</td><td>Nikon</td><td>E400</td><td>光/蛍光顕微鏡</td></tr><tr><td>使い捨てマウスケージ</td><td>Ancare</td><td>N10HT</td><td></td></tr><tr><td>マイクロフィルタートップ</td><td>Ancare</td><td>N10MBT</td><td></td></tr><tr><td>5-LOX欠損マウス</td> ジャ<td>クソン研究所</td><td>004155</td><td></td></tr><tr><td>12/15-液体酸素欠損マウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>002778</td><td></td></tr></tbody></table>

パーキンソン病における感受性メカニズムのマスク解除を行う遺伝子環境相互作用モデル

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

リポキシゲナーゼ(LOX)活性は、アルツハイマー病などの神経変性疾患に関与しているが、パーキンソン病(PD)の病因におけるその効果はあまり理解されていない。遺伝子環境相互作用モデルは、単独で遺伝的または毒性のある疾患モデルだけでは観察されない毒性における特定の細胞経路の影響をマスク解除する有用性を有する。異なるLOXアイソザイムが選択的にPD関連神経変性に寄与しているかどうかを評価するために、トランスジェニック(すなわち 5-LOXおよび12/15-LOX欠損)マウスは、障害における細胞損傷および死を模倣する毒素で挑戦することができる。ここでは、PDに関連する神経変性に対するLOXイソザイムの明確な寄与を解明するためにニグロストリアザル病変を産生する神経毒1-メチル-4-フェニル-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン(MPTP)の使用について説明する。マウスにおけるMPTPの使用、および非ヒト霊長類は、PDにおけるニグロストリアティカル損傷を再現するために十分に確立されている。MPTP誘導病変の程度は、ドーパミンとその代謝産物のHPLC分析と、ドーパミンの合成に対する速度制限酵素であるチロシンヒドロキシラーゼ(TH)に対する線条体の半定量的なウェスタンブロット分析によって測定される。炎症性マーカーを評価するために、LOXイソザイム選択的感受性を実証し得る、グリア線維性酸性タンパク質(GFAP)およびIba-1免疫ヒスロトケミストリーは、立体ニグラを含む脳切片に対して行われ、GFAPウェスタンブロット分析は線条皮ホモジネートに対して行われる。この実験的アプローチは、ニグロストリアトリアティアルジェネレーションとPDの基礎となる遺伝子環境相互作用に関する新しい洞察を提供することができる。

この毒素暴露パラダイムは、MPTP-対生理食動物の中で、有意かつ検出可能な20%の線条体ドーパミン枯渇を生じさせることができる。MPTP の異なるロットは、わずかに多かれ少なかれ病変をもたらす可能性があることに注意することが重要です。したがって、より良い精度のために、新しい多くのニューロトキシンが利用される場合、トランスジェニックで使用する前に野生型マウスの予備実験が推奨される。軽度から中等度の病変の使用は、トランスジーンの影響を観察することを可能にする;重度の病変は、損傷が強すぎて減衰したり、有害な損傷を与えたりして「床効果」を生み出し、有害な遺伝的変化の影響を食い止める可能性があります。5-LOXイソザイム欠損マウスではMPTPの効果は大きく異なっていたが、12/15-LOXアイソザイム欠損マウスは異なっていた(図1)。さらに、これらの方法により、生理学後のマウスにおける5−LOX欠乏症によるドーパミンレベルの有意差を見分けることができた(図1)。
THおよびGFAPに対する免疫ブロット法は、それぞれ、野生型マ...

リポキシゲナーゼ (LOX) イソザイムは、神経炎症や神経変性を増減する可能性のある製品を生成できます。.遺伝子環境相互作用研究は、LOXアイソザイム特異的な効果を同定することができる。1-メチル-4-フェニル-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン(MPTP)モデルを2つのLOXアイソザイム欠損トランスジェニックラインでニグロストリアチン系の損傷を用い、ドーパミン作動性および炎症に対するLOXイソザイムの寄与を比較することができる。

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

本実験の全体的な目的は、パーキンソン病に関連する黒質線条体変性におけるリポキシゲナーゼISO酵素の役割を解明することである。これを達成するため、黒質線条体（Nigro SAL）病変を誘発する神経毒を慎重に調製する。次に、LOX欠損マウスにMPTP溶液を4日間連続で毎日注射し、最終注射から7日後に解析を行う。サンプルを回収し、生化学的または免疫組織学的解析に使用します。結果から、1215 locksは黒質線条体におけるMPTP毒性に影響を与えないことが示されました。しかし、five locksは毒性条件下で損傷に寄与しています。TS法は、パーキンソン病分野における重要な疑問への回答に役立ちます。遺伝環境相互作用がnistriの脆弱性にどのような影響を与えるかを提示してください。遺伝環境モデルを用いることで、ISO選択的機能を識別し、5つのlipesの二重性についての知見を得ることができました。適切にトレーニングを受けた担当者は、以下の手順の間、適切な個人用保護具を着用してください。まず、神経毒溶液の調製に必要なすべての計算を行います。次に、必要なすべての装置、備品、および試薬を準備します。さらに、潜在的な漏出に対処するための資材を用意してください。天秤の周囲をパッドまたはペーパータオルで覆います。粉末が漏れた際のリスクを軽減するため、10%漂白剤溶液で湿らせたティッシュと10%漂白剤溶液を予防策として近くに置いてください。準備ができたら、保存場所からソースバイアルを取り出します。ガラスバイアルに「MPTP」と記載し、濃度と日付をラベルで付けます。ドラフト内の分析天秤を用いて、10%漂白剤を浸したティッシュを入れた二次容器に入ったガラスバイアルに、50 milligramsのMPTPを量り取ります。次に、ソースバイアルを密閉し、外側を10%bleachでゆっくりと拭き取ります。バイアルに13.763 millilitersの滅菌生理食塩水を加え、密閉してからフード内で完全に混合します。二次容器に入れ、10%bleachを浸したティッシュを添えた状態で、MPTP溶液をラベル付きの注射用バイアルに慎重にろ過滅菌します。圧力を下げるため、MPTPろ過溶液が入ったバイアルのキャップをわずかに緩めます。こぼれた液体は漂白剤を浸したティッシュで拭き取り、使用済みの資材は適切にラベル付けされたバイオハザード容器に廃棄してください。動物実験室へ運搬する際は、バイアルに入ったMPTP溶液を、漂白剤を浸したティッシュと共に二次容器に入れて保持してください。MPTPのソースバイアルを二次容器に入れ、適切な保管場所に戻します。最後に、10%漂白剤を用いて、スパチュラ、分析天秤、およびフード表面を10分間除染します。動物に注射を行う前に、フィルター付き穿孔蓋を備えた使い捨てケージを準備します。MPTPと標記してください。使い捨てケージライナー、あらかじめ湿らせたフードペレット、および水分補給用のハイドロゲルを挿入します。次に、すべての動物の体重を測定し、1 kgあたり15 mgの投与に必要なMPTP溶液の量を記録します。準備が整ったら、使い捨ての吸収パッドの上にマウスを固定し、細心の注意を払ってMPTP溶液を注入します。この手順を4日間毎日繰り返し、針のキャップはせず、専用のラベル付きMPTPバイオハザード用鋭利物廃棄容器に廃棄してください。10%漂白剤溶液とティッシュを近くに用意しておきます。誤って液剤を滴下した場合は、MPTPを注射した動物をあらかじめ準備した使い捨てケージに入れ、オープンラックで飼育してください。次に、MPTP投与後の処置を行います。最後の投与から72時間後まで、ラックおよび飼育室のドアに掲示をしてください。作業面は漂白剤で除染します。毎回、10%漂白剤を同量加えて、残ったMPTP溶液を廃棄してください。また、これを生物学的危険液廃棄物として廃棄し、使用したすべてのPPEは専用の廃棄ビンに捨ててください。必要に応じて、廃棄前に10%漂白剤で噴霧してください。この手順の間は、定期的に動物の状態を確認し、餌と水を毎日補充することが重要です。最終注射の3日後に、すべての資材を廃棄し、動物を通常の飼育環境に戻してください。あらかじめ設定した実験時間において、動物を回収し、組織の採取および処理を行います。野生型および5-HTL2Cノックアウトマウスに生理食塩水またはMPTPを投与し、側坐核（NAcc）シェル部の均質液を用いてドーパミン（DA）レベルを測定しました。生理食塩水投与群では、遺伝子型がDAレベルに影響を及ぼし、トランスジェニックマウスでDAレベルが低くなっていました。しかし、MPTP投与後、5-HTL2C欠損マウスではDAの枯渇が抑制されていることが示されました。MPTP群の5 locksノックアウトマウスにおけるDAレベルは、生理食塩水群の5 locksノックアウトマウスと同程度であった。対照的に、1215 locksノックアウトマウスにおいては、処置群に関わらず遺伝子型がドーパミンレベルに影響を及ぼさなかった。黒質におけるTHおよびGFAPの免疫蛍光染色の結果、野生型MPTP群では、アスタリスクで示されるTH陽性細胞体が減少し、GFAP免疫反応性の亢進が認められた。ミクログリアのDAB染色の結果、生理食塩水処置マウスでは分枝した細胞体と長い分枝突起が認められた一方、MPTP処置マウスでは、円形の細胞体と短く太い突起を持つ活性化ミクログリアが観察された。SAL、TH、およびGFAPの免疫ブロッティングにより、MPTP投与によって生じた損傷および神経炎症のさらなる証拠が得られた。これらの効果は、five locks isy欠損マウスでは減弱していました。MPTPを用いた操作は極めて危険である可能性があるため、本手順を実施する際は、個人用保護具の着用や、中和用の10% bleach（漂白剤）をすぐに使用できる状態で準備しておくなどの予防措置を常に講じる必要があります。

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