野生生物からの蠕虫の収集と同定

本手順の全体的な目的は、野生動物からヘルミンス（寄生虫）を採取、保存し、同定することである。まず、野生動物の剖検を行う。次に、さまざまな臓器からヘルミンスを採取し、その後、後の同定のためにさまざまな手法を用いてヘルミンスを保存する。

最後に、ヘルメットを透明化、染色し、マウントして、種の同定を行います。最終的に、透明化および/または染色技術を用いて、種の同定に大いに役立つ特定のヘルメット構造を示す結果を得ることができます。なお、この手法は、哺乳類、鳥類、爬虫類、および両生類のヘルメットの同定にも適用可能です。

本手法は、魚類などの他の生物にも適用可能です。まず、動物を平らな面に置き、拡大鏡を用いて、耳、口腔、眼を含むすべての外開口部を確認し、線虫、CSE、趾、吸虫が存在するかを調べます。その後、鋭利なメスまたはナイフと解剖用ピンセットを用いて操作を行います。

腹腔の上に切開を加え、臓器を損傷しないように注意します。次に、骨切り鉗子または必要に応じて小型の手持ちのこぎりを使用して、胸腔を開きます。両方の腔内に、線虫、回虫、および大型の吸虫がないか検査します。

次に、検査のために食道の始端付近と大腸の末端にそれぞれ糸で結紮します。実体顕微鏡下で、心臓と大血管、気管と肺を個別のペトリ皿に分けます。肝臓、胆嚢および胆管、膵臓、脾臓、腎臓、および膀胱を取り出し、実体顕微鏡下で観察します。

次に、消化管全体を取り出し、各部位をガラス皿に入れます。臓器を取り除いた後、0.9%生理食塩水を充填したホースまたは洗浄ボトルを用いて体腔内を洗浄し、106 µmのメッシュふるいでろ過します。ふるいの内容物をペトリ皿に逆洗浄し、実体顕微鏡下で線虫（Fal worms）または血吸虫（blood trematodes）の有無を確認します。ハサミを用いて、各消化管部位を切開します。

粘膜を掻き取り、大型の寄生虫が存在しないか注意深く検査します。encanto cephasのpsciは腸壁に深く埋まっていることが多いため、必要に応じてピンセットや小型の剪刀を用いて、組織から慎重に掻き出してください。

各開口部を流水下に置き、内容物を106 µmのふるいに洗い出します。次に、心臓、主要血管、気管、尿嚢および胆嚢を開き、内容物を検査します。同様に、鋭利な刃とピンセットを用いて、肝臓、肺、腎臓、脾臓、膵臓などの実質臓器を切り開き、ほぐしながら内容物を洗浄して検査します。寄生虫の種類を記録します。

各タイプの個体数およびそれらが発見された器官を特定します。後に遺伝学的研究でヘルメットを利用できるよう、鉛筆で記入した小さなインデックスカードを中に入れて、バイアルまたはジャーにラベルを貼ります。まず、それらを直接エタノールに入れます。

サンプルを1日から数日間固定した後、長期保存用に70% ethanolを満たした5 mLのガラスバイアルに transferred します。吸虫類（Trematodes）を保存する場合は、生きた標本を生理食塩水の滴がついたガラス顕微鏡スライドの上に置き、カバーガラスを被せ、生理食塩水を沸騰させないように注意しながらスライドを炎の上で加熱します。その後、アルコール、ホルマリン酢酸、またはFAを含むペトリ皿にスライドを投入し、カバーガラスが自然に剥がれるまで待ちます。

死後トレマトーダをFAまたは10%緩衝ホルマリンで48時間固定した後、長期保存用の70%エタノールを満たした瓶に移します。これらの固定を行う際は、ライブ個体に沸点に近い熱水を注いでペトリ皿内で弛緩させ、その後、長期保存用の70%エタノールを満たした瓶に移します。ライブのencanto cephasを弛緩させるには、水道水を入れたペトリ皿に入れ、口器が完全に陥入するまで冷蔵庫内で1時間から数時間静置します。

長期保存のため、70% ethanolまたはFAを満たした瓶に移します。小型または脆弱な線虫は、温めた70% ethanolで殺虫し、殺虫用の5% glycerinを含む70% ethanolを満たした瓶で保存します。中型から大型の線虫についても同様に行います。

それらを冷した氷酢酸に入れ、15分後に70%エタノールと5%グリセリンを満たした瓶に移します。ヘマチンとアルコールを溶解し、さらに硫酸アルミニウムアンモニウムを熱湯に溶解させることで、ハリスヘマチン液を調製します。これら2つの溶液を混合し、沸騰させます。

次にヨウ素酸ナトリウムを加え、2〜3分間沸騰させます。溶液が冷却後、5 41 ろ紙を用いて溶液をろ過し、吸虫の卵を染めて、上澄み液を捨てます。サンプルを固定するため、Harris ヘマチンまたはセミコンカーミンに一晩浸します。器官が視認できるようになるまで70%酸性エタノールに浸します。

脱染色を停止させるため、標本を70%基本エタノールに少なくとも30分間浸します。エタノール系列で試料を脱水し、キシレンまたはサリチル酸メチルを用いて透明化させた後、顕微鏡スライドに標本を封入し、カナダバルサムを1滴加えてカバーガラスを被せます。一晩乾燥させます。小型から中型の線虫およびencanto cephasを透明化するには、顕微鏡スライド上のラクトフェノール封入液に入れ、カバーガラスを被せて15～30分間放置します。大型の線虫およびencanto Cephasについても同様に行います。

80%フェノールに最大60分間浸漬させます。光学顕微鏡下で観察し、culex atosを調べるために小さな構造が透過したかを確認します。切り出し、適量のラクトフェノール中に置きます。

顕微鏡スライドガラス上で行います。カバーガラスを用いてCulexを圧砕し、rose stellar hookの計測と計数ができるようにします。前方端を切断し、顕微鏡を用いてFossに封入します。

ラクトフェノールを数滴滴下するか、永久標本とする場合はグリセリンゼリーを用いてスライドガラスに封入します。光学顕微鏡下で口器を観察してください。大型の線虫の尾部を切断し、ラクトフェノールで封入した後、本ビデオで説明する方法を用いて、光学顕微鏡下で雄の腹側乳突と交接刺の形態を観察します。

モンタナ州ミズーラ郡において、マスクトガリネズミ（Sox scenarios）のヘルメットに関する調査が行われました。2007年から2011年の間に、ピットフォールトラップで計56匹のトガリネズミを捕獲し、死後2時間以内に検査しました。

全体の感染率は96%であり、寄生虫が認められなかったトガリネズミはわずか2匹であった。helminthsは15種同定され、そのうちestosが9種、nematodesが6種含まれていた。Esto属のstaphylo authoritiesの一種は、これまで未記載であった。

感染が確認された器官には、小腸、胃、肺、および膀胱が含まれていました。感染強度の合計は、感染した宿主1種あたり7匹から234匹の範囲であり、感染した宿主あたりの種多様性（ヘルメス種数）は1種から8種で、平均は4.1でした。この手法を習得すれば、リスのような小型哺乳類では1〜2回、アライグマのような大型哺乳類では4〜5回で実施可能です。

このビデオを視聴することで、野生動物からヘルメットを採取し、保存し、同定する方法について深く理解できるはずです。