野生生物からの蠕虫の収集と同定

この手順の全体的な目標は、野生生物からヘルメットを収集、保存、および識別することです。これは、野生動物である最初の剖検によって達成されます。次に、ヘルメットはさまざまな臓器から収集され、ヘルメットは後で識別するためにさまざまな技術を使用して保存されます。

最後に、ヘルメットを取り外し、染色し、取り付け、種を特定します。最終的には、種の同定に大いに役立つクリアリングおよび/または染色技術を通じて、特定のヘルメット構造を示す結果を得ることができます。この方法は、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類のヘルメットの識別に適用できます。

また、魚などの他の生物にも適用できます。まず、動物を平らな面に置き、虫眼鏡を使用して、耳、口腔、目を含むすべての外部開口部を調べて、線虫、CSE、つま先、吸虫の存在を確認します。鋭利な刃またはナイフと解剖鉗子を使用します。

臓器を破裂させないように注意しながら腹腔を切開します。次に、必要に応じて骨カッターまたは小さなハンドヘルドソーを使用して、胸腔を開きます。両方の空洞にファル、回虫、および大きな吸虫がないか調べます。

次に、食道の始まりの近くに糸を結び、大腸の端に別の糸を結びます。実体顕微鏡で、心臓と主要な血管、気管、肺を個々のシャーレに分離します。肝臓、胆嚢、管の膵臓、脾臓、腎臓、膀胱を摘出し、実体顕微鏡で観察します。

次に、消化器系全体を取り出し、各セクションをガラス皿に入れます。臓器を摘出した後、0.9%生理食塩水で満たされたホースまたは噴出ボトルを使用して体腔を洗浄し、106マイクロメートルのメッシュふるいでろ過します。ふるいの内容物をシャーレに逆洗し、実体顕微鏡で内容物を調べます はさみを使用して、ファルワームまたは吸血線虫の場合は、各消化管セクションを開きます。

粘膜をこすり落とし、大きな寄生虫の存在がないか注意深く調べます。エンカント・セファスのプシは、しばしば腸の壁に深く埋め込まれています。したがって、必要に応じて、鉗子や小さなハサミを使用して、組織から慎重にからかいます。

各開いた部分を流水の下に置き、内容物を106マイクロメートルのふるいに洗います。次に、心臓と主要な血管、気管と尿と胆嚢を開き、内容物を調べます同様に、鋭利な刃と鉗子を使用して、肝臓、肺、腎臓、脾臓、膵臓などの固形臓器をスライスしてからかい、内容物を洗って調べます。寄生虫の種類を記録します。

各タイプの番号とそれらが見つかった臓器を見つけました。バイアルまたは瓶にラベルを付けるには、鉛筆でラベル付けされたプレーンなインデックスカードの小片の中に入れて、後の遺伝子研究のためにヘルメットを保存します。まず、それらをエタノールに直接入れます。

サンプルを1〜数日間固定した後、70%エタノールを充填した5ミリリットルのガラスバイアルに移して長期保存します。吸虫を保存するには、生きた標本をガラス顕微鏡に置き、生理食塩水を一滴入れ、ガラスカバースリップを塗布し、生理食塩水を沸騰させずにスライドを炎の上に置きます。次に、スライドをアルコール、ホルミン酢酸、またはFAの入ったシャーレに落とし、カバーを浮かせます。

死んだ吸虫をFAまたは10%緩衝ホルミンに48時間固定してから、70%エタノールで満たされたジャーに移して長期保存します。エストスを固定するには、生きた動物をペトリ皿に注ぎ、沸騰したお湯を注いでリラックスさせ、70%エタノールで満たされた瓶に移して長期保存します。テングが完全に回避されるまで、冷蔵庫の水道水のペトリ皿に1〜数時間置いて、ライブエンカントセファスをリラックスさせてください。

それらを70%エタノールで満たされた瓶またはFAに移して長期保存します。小さいまたは壊れやすい線虫を殺し、70%エタノールを熱くし、70%エタノールと5%グリセリンで満たされた瓶に保存して殺します。中型から大型の線虫。

それらを冷たい氷酢酸に入れ、15分後、70%エタノールと5%グリセリンで満たされた瓶に移します。ヘマチンとアルコールを溶解し、過熱した水に硫酸アンモニウムアルミニウムを溶解することにより、ハリスヘマチンを調製します。両方の溶液を混合し、沸騰させます。

次に、ヨウ素酸ナトリウムを加え、2〜3分間沸騰させます。溶液が冷却されたら、5 41濾紙を使用して溶液をろ過し、Trematodes estosを明白に染色し、Harris Hematinまたはsemicon CarmineのCephas Placeを一晩中デカントしてサンプルを保管します。臓器が見えるまで70%酸性エタノールに入れます。

脱染色を止めるには、標本を70%塩基性エタノールに少なくとも30分間移します。エタノールシリーズのサンプルを脱水し、キシレンまたはサリチル酸メチルを使用して透明化し、顕微鏡スライドに標本をマウントし、カナダボッサムを一滴加え、カバースリップをします。小型から中型の線虫とエンカントセファスを顕微鏡スライド上のラクトフェノールのマウントに置き、カバースリップで15〜30分間覆って一晩乾燥させます大きな線虫とエンカントセファスの場合。

80%フェノールに最大60分間入れます。光学顕微鏡で調べて、culex atosを調べるための小さな構造のクリアを確認します。切り取り、ラクトフェノールの量の上に置きます。

顕微鏡のスライド上。カバースリップを使用してキューレックスを押しつぶし、バラのステラフックの測定とカウントを可能にします。前端を切り取り、顕微鏡でFossに取り付けます。

数滴の乳酸フェノールの下またはグリセリンゼリーにスライドさせて、恒久的にマウントします。光学顕微鏡で口の部分を観察します。大型線虫の尾を切り落とし、ラクトフェノールにマウントした後、このビデオで説明されている方法を使用して、オスの腹側パオリとスピック形態を光学顕微鏡で観察します。

マスクトガリネズミソックスのシナリオのヘルメットの調査は、モンタナ州ミズーラ郡で行われました。2007年から2011年の間。合計56匹のトガリネズミが落とし穴トラップから収集され、死後2時間以内に検査されました。

感染の全体的な有病率は96%でした。寄生虫がいなかったのは2匹のトガリネズミだけで、9種のエストスと6種の線虫を含む15種のヘルメットが確認されました。Esto 属の staphylo authorities の 1 種は、これまで記載されていませんでした。

感染していることが判明した臓器には、小腸、胃、肺、膀胱が含まれていました。感染の総強度は、感染した宿主種あたり7〜234匹のワームの範囲であり、豊富さ、または感染した宿主あたりのヘルメット種の数は1〜8の範囲であり、習得すると平均は4.1です。この手法は、リスのような小さな哺乳類では1〜2ルピー、アライグマのような大型の哺乳類では4〜5ルピーで実行できます。

このビデオを見た後、野生生物からヘルメットを収集、保存、および識別する方法について非常によく理解しているはずです。