マウスおよびリーブス」キョン鹿のためのミルク収集方法

この手順の全般的な目的は、さまざまな科学的実験に使用するため、マウスまたはリーブズムットジャックジカから乳を採取する方法を実演することです。まず、動物にオキシトシンを投与して射乳を刺激し、その後、動物を麻酔します。次に、1人の研究者が手動で乳を搾出し、もう1人の研究者がそれを回収します。

最終ステップは、麻酔から回復する動物の安全を確保することです。最終的に、1回のセッションあたり約5～30 mLのmutt jackの乳、または最大450 µLのマウスの乳を採取することができます。専用の設備を必要とする既存の手法と比較して、本手法の主な利点は、比較的安価であり、習得が容易であることです。

この手法は、病原体が乳を介して母親から子へ伝播するかどうかなど、いくつかの科学的な疑問を解決するのに役立ちます。この手法に不慣れな人は、適切に搾乳するまでに習熟が必要であるため、通常は途中で挫折しやすくなります。乳育中のマウスの乳出を促すこの処置には、当研究室の技術者であるStephanie full awayが同行し、補助を行います。

乳汁を採取する直前に、オキシトシンを1kgあたり2国際単位、腹腔内に投与します。マウスを麻酔し、麻酔が効くまで待機している間に眼球が乾燥するのを防ぐため、両目に少量の眼用潤滑剤を塗布します。滅菌アルコール綿、P200ピペットマン、滅菌ピペットチップ、および1.5 mLのエッペンドルフチューブまたは1.2 mLのクライオバイアルなどの乳汁回収用容器を用意します。乳汁の採取には2人の研究者が必要です。

一人が乳搾り担当として動物を固定し、乳を搾り出します。もう一人が乳回収担当として、回収容器を汚染しないよう注意しながら乳を回収します。乳搾り担当者は、搾乳前に滅菌アルコール綿を用いて乳房付近を優しく清掃します。

オキシトシン注入から1〜2分以内に、マウスの乳腺領域で射乳が認められます。親指と人差し指を用いて乳腺組織を上方に向かって優しくマッサージし、乳頭の根元に目に見える乳滴が形成されるまで、手動で乳を搾出します。次に、乳回収担当者がP 200ピペットマンのプランジャーを第1ストップまで押し、ピペットチップから空気を出し、乳回収の準備をします。

次に、採取者はピペットチップを乳滴の上端に配置します。チップが乳頭や皮膚に近すぎないよう注意しながら、プランジャーの圧力をゆっくりと緩めて乳をピペットチップ内に吸引し、液体が漏れないようにチップを回収チューブの側壁に押し当てます。採取者は親指でプランジャーを第1ストップを超えて押し込み、乳を容器の中に排出します。

時計回りまたは反時計回りに各乳頭を移動しながら、引き続き手動で搾乳を行います。特に他の乳頭よりも乳量が多い場合は、前の乳頭に戻ってさらに搾乳しても構いません。採乳が完了したら、マウスが麻酔から覚めるまで待ちます。

母獣がケージ内でスムーズに動き回るようになったら、射乳を促すため、元のケージに連れ戻して子獣と一緒にさせます。授乳期の Reeves's muntjac（ムンジャック）に対し、オキシトシンを1 kgあたり10 international units 筋肉内投与し、直後に麻酔をかけます。耳に触れた際に軽微な反射しか見られず、乳を搾る者がムンジャックを抵抗なく保持できる状態になれば、麻酔レベルは十分であると判断します。

次に、マットジャックの目が乾燥するのを防ぐため、少量の潤滑剤をそれぞれの目に塗布します。乳搾り器と集乳器に、エタノールに浸したガーゼと、乳を保持するための15 milliliterコニカルポリプロピレンチューブを数本準備します。オキシトシンが効き始めると、マットジャックの乳房領域に射乳が見られます。

搾乳者と集乳者の双方は、手袋を着用し、エタノール浸しガーゼで手指を消毒してください。また、動物の頭部を快適な位置に保持し、呼吸を妨げずルーメンからの反芻（逆流）を防ぎながら、乳房全体と各乳頭をエタノール浸しガーゼで消毒します。集乳者は、集乳チューブを搾乳中の乳頭に近づけますが、皮膚に触れないようにしてください。

ミルク・エクスプレッサーは、親指と人差し指を用いて乳腺組織を上方に向かって緩やかに圧迫し、乳頭にミルクを充満させた後、乳頭からミルクを優しく押し出し、ミルクコレクターが保持しているチューブへと導きます。ミルクはストリーム状に放出されるため、ミルクの損失を最小限に抑えるよう採取チューブを配置することが重要です。Mt Jackの乳房は4つのクォドラントに分かれています。

乳搾り器を用いて、ミルクが容易に流れなくなるまで各乳房部位から搾乳を続けます。ある乳頭から搾乳できない場合は、他のすべての乳頭から搾乳した後、再び最初の乳頭に戻って試行してください。搾乳完了後、bam麻酔を速やかに回復させるためにamazを皮下投与し、最終的にマウスが自力で歩行、摂食、飲水できるようになるまで観察します。この図は、授乳中のマウスから100から450 microlitersのミルクが得られることを示しています。

最大乳量は、oxytocinを1kgあたり2 international unitsを用いて、分娩後8〜12日に採取した。ここでは、reeve's mut jack deerにおける産子数に基づいた、授乳マウスからの概算乳量をプロットして示している。1回の採取セッションで回収された乳量は、使用した麻酔薬および分娩後の採取開始・終了日に応じて5〜30 millilitersの範囲であった。mut jackの母マウスの乳量採取開始日および終了日は、この表に示されている。

乳汁の採取期間は平均80日で、範囲は18日から150日でした。この手技に習熟すれば、1回のセッションで採取する動物の数に応じて、約1時間で完了できます。本手順を実施する際は、常に動物の安全を最優先に考えることが重要です。この手順の後、乳汁の処理が必要となる場合があり、それに続いてin vitro試験やバイオアッセイを行うことで、乳汁成分に関するさらなる疑問の解決に役立つ可能性があります。