Analysis of Translation Initiation During Stress Conditions by Polysome Profiling

La&#235;titia Coudert; Pauline Adjibade; Rachid Mazroui

doi:10.3791/51164

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Biology

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Analysis of Translation Initiation During Stress Conditions by Polysome Profiling

ポリソームプロファイリングによってストレス状態の間に翻訳開始の分析

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10:59 min

May 19, 2014

DOI: 10.3791/51164-v

Laëtitia Coudert*^1,2, Pauline Adjibade*^1,2, Rachid Mazroui^1,2

¹Department of Molecular Biology, Medical Biochemistry, and Pathology, Faculty of Medicine,Laval University, ²CHU de Quebec Research Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ここでは、ストレス条件に応答する真核細胞のmRNA翻訳の開始の変化を分析するための方法を記載している。このメソッドは、非翻訳リボソームからリボソームを翻訳するショ糖勾配に速度の分離に基づいています。

この手順の全体的な目標は、ポリソームプロファイリングによって哺乳類の細胞および組織の翻訳、開始に対するストレス条件の影響を測定することです。これは、最初に哺乳類のがん細胞を抗がん剤で治療し、次に細胞抽出物を調製することによって達成されます。2番目のステップは、スクロース、グラデーションを作成することです。

次に、細胞抽出物をスクロースにロードし、グラジエントし、超遠心分離してリボソーム画分を分離します。最終的には、特異的抗体を用いたウェスタンブロット分析を行い、試験したタンパク質とポリソームとの関連を評価します。代謝標識のような既存の方法のこの手法の主な利点は、翻訳の開始ステップに対するストレス条件の影響を評価できることです。

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