Name: マウスのシングル·ペレット到達タスクで学ぶ学習運動スキル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-04T17:05:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: 学ぶマウスのシングルペレット到達タスクによる運動スキル学習と記憶の評価法。前肢の協調運動精度を測定し、脳の可塑性変化を神経科学の観点から解明する実験モデルです。

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この作品は、YZの国立精神衛生研究所からの助成金（1R01MH094449-01A1）でサポートされている

この原稿に記載された実験は、カリフォルニア大学サンタクルーズ校施設内動物管理使用委員会によって定められたガイドラインおよび規則に従って行った。 1。セットアップ（、材料のリストを参照） <ol><li>食物ペレットとしてキビ種子を使用してください。 </li><li> 3垂直のスリット（「造形」エッジで一つのスリットを含むカスタムメイドの明確なプレキシガラスのトレーニング室（プレキシグラス0.5cmの厚さが、外側から測定され、15センチメートル深い20センチ、8.5センチ幅）を使用し、反対 &#39;訓練&#39;端に2スリット）。縦のスリットは、0.5センチ幅13センチ、箱の前壁に配置することでなければなりません：センターで、左側に、右側（ 図1A）で。 </li><li>整形したセッション中に使用されるシードを保持するために、傾斜トレイを使用してください。トレイは、3枚のガラススライド（ 図1B）からカスタムメイドすることができる。 </li><li> PREPA食品プラットフォームの再（8.5センチ、長い4.4セ​​ンチメートル幅0.9センチ）。この食品のプラットフォームは、トレーニングセッションの間、訓練室の前側（トレーナーに面する）に配置される。ポジショニングの種、左の1スロット、右側に他のスロットのための食品のプラットフォーム上で2ディボットのスロットがあります。ディボットは長辺〜0.3センチメートル、幅、エッジ（ 図1C）から2.4センチメートルです。左右のディボットスロットは、マウスの訓練室の左右のスリットに対応し、支配的な前肢の訓練のために使用される。これらディボットスロットを持っていることの目的は、種ごとに達する試みのために、同じ場所で一貫して配置されていることを確認することです。 </li><li>セッションが手にピンセット、体重計、ストップウォッチを持って中に。 </li></ol> 2。フード剥奪（2日間） <ol><li>絶食前のベースライン体重を得るために、各マウスを秤量する。 </li><li>体重を開始するために2日間マウスに食物制限する損失。一般的な出発点として、マウス（ 例えば 、15 250gのマウスを、我々は通常、食物を1.5gで開始）日あたり1gの体重当たり0.1gの食物を与えられている。ベースライン体重、体重減少、性別、および年齢のマウスの速度に基づいて、食物の量を調整する。体重は、成形段階中にもう少し減少し続けることができるが、このような体重減少（ すなわち、〜の元のベースラインの重量の90％）訓練（ 図2Aおよび2B）を通して維持されるべきである。マウスの体重を維持するのに必要な飼料の量は、典型的には、制限で使用される量と同じである。 </li></ol> 3。シェーピング（3-7日） <ol><li>グループ生息地の順化（1日目）：同時に研修室に2匹のマウスを入れてください。彼らの消費のためにチャンバー内の約20の種/マウスを置きます。マウスは20分間室内に滞在した後、自宅に戻ってそれらを置くことを可能ケージ。 </li><li>個々の生息地の順化（2日目）：ステップ3.1と同様に、セットアップが、個別のトレーニング室にマウスを置く。グループおよび個々の生息地の順応の目的は、研修室やキビ種子の両方に精通したマウスを得ることです。 </li><li>前肢の優位性（後の3日目と）の決定：場所下向きトレーニング室の単一のスリット側（ 図1D）。種子の食品トレーを埋める。食べ物は、マウスへの種子がアクセスできるできるようにトレーニング室の前壁にアップトレイを押します。個別にケージにマウスを置きます。これらは食品トレー上にある種子中に十分に興味を持っている場合は、内部のシードを得るためにスリットを耕すだろう。そして、彼らは、種子をピックアップし、それらを消費します。以下の基準の両方が満たされたときに「整形は「完成したと考えられている：1）マウスが20分以内に20に達する試みを行い、2）70％以上に達するには、pは1前肢でerformed。 </li></ol>注意事項： <ol><li>マウスがチャンバー内に種を取得するために、その舌を使用している場合は、少しスリットから背面トレイを移動させる。到達距離の増加は、種子を獲得するために、その舌を使用するには、マウスを思いとどまらため、その前肢が到達が容易になります。 </li><li>マウスは一週間以内にシェーピングを完了できない場合は、実験からドロップします。 </li></ol> 4。トレーニング（8日以上） <ol><li>下向き（ 図1E）に面するトレーニング室の二重スリット側に配置します。 </li><li>個別にケージにマウスを置きます。 （ つまり、右利きのマウス、マウスの右サイドのスリットを使用してください）優先足に対応するディボット食品プラットフォーム上で、個々の種を置く。 </li><li>マウス到達動作を観察し、次のカテゴリに応じてスコア： <ol><li> 成功：マウスは、好ましい足に達する把握し、R種子をetrieves、その口の中に供給する。 </li><li> ドロップ：マウスは、好ましい足に到達した種子を把握し、その口の中にそれを置く前にそれをドロップします。 </li><li> 失敗：マウスは、種子に向けた優先足に到達したが、それは、種子をミスや保持板からそれをオフにノックのどちらか。 </li></ol></li><li>一日あたりの優先四肢または（いずれか早い方）を20分間に30に達する試行マウスを訓練。 </li><li>訓練の後に戻って自分のホームケージにマウスを置き、毎日の食事の量子を提供しています。 </li></ol>注意事項： <ol><li>いくつかの場合において、マウスは、食物プラットフォーム上に配置されない種が存在しない場合にも達する。このような流域は、「イン無駄に達する」とみなされ、到達試行の合計数にカウントされません。 「イン無駄に達する &quot;を阻止するため、列車のマウスは、次のシードを配置する前に戻ってトレーニング室のもう一方の端まで歩いて。同様の戦略は、ラットで使用されている同じような行動タスク21用のS。マウスは時折、種子の存在下で、非優先の足で到達。これらの流域は、「対側に達する」とみなされており、いずれに達するの合計数にはカウントされません。 </li><li>概日リズムの変動に起因する行動の変動を制限するために、マウスの通常の起きている時間の間に、一日の同じ時刻にすべての整形およびトレーニングセッションを実行します。 </li><li>原因別のトレーナーに行動の変化を避けるために、同じ人が実験を通して同じマウスを訓練ことを確認してください。 </li><li>マウスの注目は、この行動試験のために重要である。環境摂動を最小限にするために別の静かな部屋にマウスを訓練。 </li><li>マウスは30以上で訓練することができることは、毎日（ 例えば 、50に達する）に達する。到達試行回数を増やすと、同じトレーニングセッション内の行動の改善を検討することができる。 </li></ol> 5。 DAT定量訓練後のマウスの行動を定量化するための多くの方法があります。二つの最も直接的な分析は以下のとおりです。 <ol><li>成功率=百分率として提示され、総到達の試み以上の成功に達すると、。ドロップや故障率は同じようにプロットすることができます。 </li><li>時間で割った成功した試みの​​成功=数の速度は、毎分のように成功した流域を発表した。ほとんどの場合、成功の速度は、成功率がプラトーに達した場合であっても、増加し続けている。 </li></ol>

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</ol>

著者らは、利害の衝突を宣言していません。

位相整形することの重要性： マウスが新しい環境21,22で訓練されるのために未知の環境にいるから不安の増大するのではなく、通常は困難である。そのため、整形の目的は訓練室をマウスに慣れることであり、トレーナー（ すなわち 、その不安レベルを下げる）と、タスクの要件（ つまり、食料源として、種を識別するため）。シェーピングのもう一つの目標は、将来の訓練のために個々のマウスの好ましい手足を決定することです。それが誤って成功率の全くないかほとんどない、その後の改良で、その結果、最初の学習段階での成功率を膨らませるだろう、不要な「到達練習」を提供することができるように成形中に、マウスを上に形されていないことが重要です後で訓練（ 図2E）。これらの場合、むしろ単にオーバー成形、ケージにシードを耕し、次に食べてそれを拾うよりマウスはすでに整形フェーズの間に到達技能の開発に着手。オーバーシェーピング制限する唯一の方法は、シェーピングセッション中に鋭い観察である。オーバー型のマウスは、データ分析から除外されるべきで...

メカニズム基本的な学習と記憶を理解することは、神経科学の最大の課題の一つです。以前に学習した運動能力の保持をモータメモリ1とみなされているのに対し、運動系では、練習を有する新規運動技能の獲得は、多くの場合、運動学習と呼ばれる。新しい運動技能を学ぶことは、通常は運動スキルが完成または十分に一貫しているいずれかの時点まで、時間をかけて所望のモータ性能の向上に反映されている。ほとんどの場合、取得したモータ·メモリでも実践の非存在下で、長期間持続することができる。ヒトでは、陽電子放出断層撮影（PET）および機能的磁気共鳴画像法（fMRI）を用いて、神経画像研究は2-4の学習運動技能の獲得段階の間に一次運動野（M1）活性の変化、およびM1活性の一時的な干渉によることが示されている低周波経頭蓋磁気刺激はsigniにつながるficantlyモーター行動の改善5の保持を破壊した。ラットで同様に、前肢別研修の両方のc-fosの活性の上昇と6の学習運動技能の後期の間に訓練された前肢に反対M1にシナプス/ニューロン比で例示M1に機能的および解剖学的可塑性を誘導する。さらに、同じような訓練パラダイムもラットがタスク7を獲得した後に減少し、長期増強（LTP）と強化され、長期抑圧（LTD）で、その結果、訓練された前肢に対応する対側M1のレイヤ2/3横のつながりを強化する。そのようなシナプスの修飾は、しかしながら、訓練されていない前肢または後肢8に対応するM1皮質領域では観察されない。 M1は、脳卒中によって損傷した場合あるいは、前肢特定の運動技能9の劇的な欠陥があります。モータ行動研究のほとんどは、ヒト、サルに行われてきたがS、およびラット2-8,10-17、マウスは、その強力な遺伝学と低コストで魅力的なモデルシステムになる。 単一のペレット到達タスク：ここでは、前肢特定モータースキル学習パラダイムを提示する。このパラダイムでは、マウスを固定位置、アーチェリー、ダーツ投げ、およびヒトにおける撮影バスケットボールの学習に類似した挙動に位置食物ペレット（キビ種子）を把握し、取得するために、狭いスリットを通して、前肢を拡張するために訓練されています。この到達タスクでは、マウスおよびラット18との間の同様の結果を示した以前のラット研究から変更されている。 2光子経頭蓋イメージングを用いて、我々の以前の研究は、このトレーニング中に時間をかけて樹状突起棘のダイナミクス（過半数の興奮性シナプスのためのシナプス後構造）を踏襲している。我々は、単一のトレーニングセッションは、訓練された前肢の反対運動皮質の錐体神経細胞に新たな樹状突起棘の急速な出現につながったことがわかった。 S同じ到達タスクのubsequent訓練は優先的にトレーニングが19を終了後も長く持続し、これらの学習によって誘発される棘を安定化。さらに、タスクに達するの繰り返しの間に現れた棘が到達したタスクと他の前肢固有の運動課題（ すなわちパスタ処理タスク）のタンデム実行中に形成された棘が20をクラスタ化しなかった、樹状突起に沿ってクラスタ化する傾向があった。 現在のビデオでは、我々は最初の絶食から成型まで、モータの訓練のために、この行動パラダイムの設定ステップバイステップを説明します。また、この行動パラダイムを実行する過程で、マウスの共通の行動を説明し、どのようにこれらの行動を分類し、分析する。最後に、我々はこのような学習パラダイムを実践するために必要な予防措置およびデータ分析の際に発生する可能性のある問題について説明します。

<table><tbody><tr><td>透明なアクリルボックス</td><td></td><td></td>のトレーニングチャンバー <td>寸法については、Figure 1A</td></tr><tr><td>Tilted tray for shaping</td><td></td><td></td> スライド<td>ガラスからカスタムメイド、Figure 1B</td></tr><tr><td>Foodトレーニング用</td><td></td><td></td>プラットフォームを参照 <td>寸法については、Figure 1C</strong</td></tr><tr><td>>Millet seeds&nbsp;</td><td></td><td></td><td>「野鳥フード 鳩とウズラがブレンド 野鳥フード」(すべての生き物)</td></tr><tr><td>種を置くための</td><td>鉗子</td><td></td><td></td></tr><tr><td>体重計</td><td></td><td></td><td>毎日の体重測定</td></tr><tr><td>用 ストップウォッチ</td><td></td><td></td><td>シェーピング/トレーニングセッション中の時間測定用</td></tr></tbody></table>

マウスのシングル·ペレット到達タスクで学ぶ学習運動スキル

Study Motor Skill Learning by Single-pellet Reaching Tasks in Mice

手を伸ばすとオブジェクトの取得は、前肢での正確かつ協調運動の動きを必要とする。マウスを繰り返し把握し、持続的な訓練の後、食品の特定の位置に配置報酬、（精度と速度と定義される）、その運動性能が時間の経過とともに徐々に改善され、高原を取得するために訓練されています。このような到達スキルが習得されると、その更なるメンテナンスは、一定の練習を必要としません。ここでは、マウスでの熟練した前肢の動きの獲得と維持を研究するための単一のペレットに達したタスクを紹介します。このビデオでは、まず、一般的に、この学習および記憶パラダイムで遭遇しているマウスの行動を説明し、その後、これらの行動を分類し、観察された結果を定量化する方法について説明します。マウス遺伝学と組み合わせて、このパラダイムは、解剖学的基礎、生理学的特性、ならびに学習および記憶の分子メカニズムを探索する行動のプラットフォームとして利用することができる。

学習曲線： 運動技能の習得は、多くの場合、時間をかけて持続的な練習が必要。典型的に平均学習曲線は2段階で構成されています。成功率は徐々に向上し、成功率がプラトー（ 図2C）に到達後の統合フェーズの初期取得段階その間。異なるマウスはプラトーレベルに到達する日数異なる数を取り、個々の学習曲線は、通常、平均一つとして滑らかではない、それは個々のマウスの学習曲線は変化に留意すべきである。到達スキルのマウスの改善を提示するもう一つの方法は、到達スピードの勘定を取るだけでなく、精度によって、全体的な運動能力を反映して、成功の速度である。マウスがそのプラトー成功率（ 図2D）に達した後、一般に、成功の速度が向上し続ける。 個人差に加えて、パフォーマンスのSは、一部のマウスでは、タスク（ 図2E）を学ぶことができない。これらの「nonlearners」は、通常、最初の試みは、種子のために達するためになりますが、未知の理由のために反復的なトレーニング...

永続的な練習は協調運動の精度を向上させます。ここでは、マウスでの前肢のスキルの学習と記憶を評価するために設計されたシングルのペレットに達したタスクを、ご紹介します。

Reaching for and retrieving objects require precise and coordinated motor movements in the forelimb. When mice are repeatedly trained to grasp and ...

この手順の全体的な目的は、マウスに4M特異的な運動スキルを習得させることです。これにより、運動学習および記憶を評価するための優れた行動モデルが得られます。マウスにおける最初のステップは、マウスをトレーニングチャンバーとフードペレットに慣れさせることです。次に、シェーピング用のスリットの手の届く範囲にフードペレットを配置し、シェーピング期間の後に、回収に使用される好みの肢を決定します。マウスを単一ペレット到達課題でトレーニングし、好みの前肢による正解到達回数を記録します。最終的に、このプロトコールは、運動学習および記憶形成における様々なレベルでの脳の変化を研究するための行動パラダイムを提供します。この手法は、運動学習がマウス脳における構造的可塑性および分子レベルの変化とどのように相関しているか、また、さまざまな神経疾患が微細運動スキルをどのように妨げるかといった、神経科学分野における重要な問いに答えるのに役立ちます。最良の結果を得るために、騒音や気が散るもののない静かな場所でこの作業を行ってください。シェイピングおよびトレーニングには、3つの垂直スリットを備えた特注の透明プレキシグラス製トレーニングチャンバーを使用します。3枚のガラススライドを用いて傾斜トレーを作成した。成形セッション中にアワの種子を固定するため、成形エッジ側に1つのスリットを、反対側のトレーニングエッジ側に2つのスリットを設けている。トレーニングセッションではフードプラットフォームを使用する。プラットフォームの左右にあるくぼみが、アワの種子を固定する。これらのくぼみは、マウス訓練チャンバーの左側および右側のスリットに対応しており、肢の優位性の訓練に使用されます。また、処置中に用意しておくと便利な備品として、ピンセット、電子天秤、ストップウォッチが挙げられます。シェイピング処置を開始する2日前から動物に食事制限を行い、1日目の体重がベースラインの約90%に維持されるようにします。2匹のマウスを同時にトレーニングチャンバーに入れ、慣らします。チャンバー内にマウス1匹あたり約20粒の種子を配置し、20分間探索させます。翌日、動物を個別にチャンバーに入れ、それぞれに約20粒の種子を与えます。シェイピングエッジは、肢の優位性を判定するために使用します。チャンバーのシングルスリット側を下に向けて配置してください。次に、ミレット種子を満たしたフードトレイをトレーニングチャンバーの前壁に押し当てます。準備ができたら、マウス1匹をチャンバーに入れます。動物がトレーニングスリットを通じて種子を回収できるようにし、回収に要した時間を記録します。2つの基準が満たされた時点で、シェイピング期間は終了したとみなされます。まず、マウスに20分間で20回のリーチ試行を行わせます。次に、これらのリーチの70%以上が片方の前肢で行われていることを確認します。もしマウスが舌を使って種子をチャンバー内に取り込もうとする場合は、前肢でのリーチを促すためにトレイをわずかに後ろに移動させてください。マウスが1週間以内にシェイピングを完了できない場合は、その個体を実験から除外してください。トレーニングセッションを開始するには、トレーニングチャンバーをダブルスリットが下を向くように配置します。準備ができたら、マウスを1匹ずつケージに入れます。シェイピング期間中に決定した好みの前足に対応するくぼみに、種子を1粒ずつフードプラットフォームに置いてください。種子を配置した後、マウスのリーチング動作を観察し、結果をスコアリングします。マウスが好みの前肢でリーチし、種子を回収して食べた場合に「成功」と判定します。マウスが好みの前肢でリーチして種子を掴んだものの、口に入れる前に落とした場合は「ドロップ」と判定します。マウスが好みの前肢で種子に手を伸ばしたが、種子を逃したか、または保持プレートから種子を落とした場合は、「失敗」としてスコアされます。マウスは、フードプラットフォーム上に種子が配置されていないときでも、手を伸ばすことがあります。これらは「空振り」と見なされ、カウントには含めません。種子を次に配置する前に、マウスがトレーニングチャンバーの反対端まで戻るよう仕向け、無駄なリーチ試行の総数を抑制します。マウスが非好みの前肢でリーチした場合、これらのリーチは対側リーチとみなされ、総リーチ数にはカウントしません。好みの肢で30回のリーチ試行を行うか、または20分が経過するまで、どちらか早い方で毎日マウスのトレーニングを行います。日々のトレーニングセッション後、マウスをホームケージに戻します。実験期間を通じて、マウスの体重を綿密に監視する必要があります。ここでは、食物制限によるシェイピングおよびトレーニング期間中の、個々のマウスの体重減少を示しています。これらの結果は、トレーニング期間を通じて、平均成功率および成功までの平均速度が向上することを示しています。ここでは、オーバーシェイピング（overs shaped）されたマウスと非学習マウスの成功率をプロットしています。このグラフは、4日間の再学習期間における、事前トレーニングを受けた成体マウスとナイーブな成体マウスの運動パフォーマンスを比較したものです。この手順を実施する際は、動物実験の条件を標準化することが重要です。これは、環境的な変動を最小限に抑え、同一の訓練者が同一のマウスを扱い、実験期間を通じて一日のうち常に同じ時間帯に訓練を行うことで達成できます。

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マウスのシングル·ペレット到達タスクで学ぶ学習運動スキル

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