Brain Slice Biotinylation: An <em>Ex Vivo</em> Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

Luke R. Gabriel; Sijia Wu; Haley E. Melikian

doi:10.3791/51240

JoVE Journal
Neuroscience

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Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

脳スライスビオチン：生体外の取り組み

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06:18 min

April 3, 2014

DOI: 10.3791/51240-v

Luke R. Gabriel¹, Sijia Wu¹, Haley E. Melikian²

¹Program in Neuroscience, Graduate School of Biomedical Sciences,University of Massachusetts Medical School, ²Brudnick Neuropsychiatric Research Institute, Department of Psychiatry,University of Massachusetts Medical School

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

神経細胞の膜輸送を動的に原形質膜タンパク質の可用性と大幅に影響を与える神経伝達を制御します。今日まで、成体ニューロンにおけるニューロンのエンドサイトーシス輸送を測定するために挑戦してきた。ここでは、急性の脳切片における表面タンパク質発現のex vivoでの急速な変化を測定するための非常に効果的な、定量的な方法を記載している。

この手順の全体的な目標は、ニューロン表面タンパク質の急激な変化を定量化することです。ex vivo脳スライス調製物では、これは最初に生存可能な急性脳スライスを調製することによって達成される。次に、スライスを目的の薬物で処理します。

次に、細胞表面タンパク質を膜インペリアントーネーション試薬を使用して標識します。最後に、表面のビオチン化タンパク質を連鎖球菌アフィニティークロマトグラフィーおよびアフィニティークロマトグラフィーを用いて単離します。最終的に、イムノプロットは、薬物治療後のタンパク質表面発現の変化を定量化するために使用されます。

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