Consensus Brain-derived Protein, Extraction Protocol for the Study of Human and Murine Brain Proteome Using Both 2D-DIGE and Mini 2DE Immunoblotting

Francisco-Jose Fernandez-Gomez; Fanny Jumeau; Maxime Derisbourg; Sylvie Burnouf; H&#233;l&#232;ne Tran; Sabiha Eddarkaoui; H&#233;l&#232;ne Obriot; Virginie Dutoit-Lefevre; Vincent Deramecourt; Val&#233;rie Mitchell; Didier Lefranc; Malika Hamdane; David Blum; Luc Bu&#233;e; Val&#233;rie Bu&#233;e-Scherrer; Nicolas Sergeant

doi:10.3791/51339

コンセンサス脳由来のタンパク質、2D-DIGEとミニ2DEイムノ両方を使用して、ヒトおよびマウスの脳プロテ...

JoVE Journal
Neuroscience

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Consensus Brain-derived Protein, Extraction Protocol for the Study of Human and Murine Brain Proteome Using Both 2D-DIGE and Mini 2DE Immunoblotting

コンセンサス脳由来のタンパク質、2D-DIGEとミニ2DEイムノ両方を使用して、ヒトおよびマウスの脳プロテオーム研究のための抽出プロトコール

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10:51 min

April 10, 2014

DOI: 10.3791/51339-v

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

人間とマウスの脳組織のために尿素/チオ尿素/ SDS緩衝液を使用した一般的なタンパク質抽出プロトコルを可能にする2D-DIGEとミニ2DEのイムノブロット法によるそれに続くキャラクタライゼーションによるタンパク質のINDENTIFICATION。この方法は、人間の生検および実験モデルから、より再現性と信頼性の高い結果を得るために1を可能にします。

次の実験の全体的な目標は、プロテオミクス分析のためにヒトとマウスの脳組織からタンパク質を抽出することです。これは、一般的な溶解バッファーを使用して、2次元電気泳動アプローチに適合した同じタンパク質抽出物を得ることによって達成されます。次に、2次元蛍光差分ゲル電気泳動を使用して、質量分析の同定のためにタンパク質を分離します。

これに続いて、イムノブロッティングを用いた小型2Dゲル電気泳動を行い、翻訳後修飾を同定します。その結果、全体的なタンパク質発現を示すことができます。宿主の翻訳は、等電点と分子量の違いに基づいて、すべての結紮および触媒生成物を変化させます。

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