Name: 異マウスハートTransplantion用に変更する方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-23T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: 学ぶマウス異所性心臓移植の顕微外科的手法。ドナー心臓採取と血管吻合を含む技術を解説し、移植拒否反応の評価方法も紹介。心血管研究や移植免疫学の基礎モデルとして活用できます。

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この作品は、オーストラリアのMicrosearch財団、およびMyeeコドリントン医学研究財団、オーストラリアプロジェクト無償1029205国立保健医療研究評議会（NHMRC）によってサポートされていました。

実験の開始前に、計画された実験のための関連機関の動物管理倫理委員会の承認を得る。あなたの機関の要件に従って、マウスを維持する。以下のプロトコルは、シドニー大学とロイヤルプリンスアルフレッド病院の委員会によって承認されている。 手術を開始する前に、すべての器具は徹底的に洗浄し、80％エタノールに浸すことにより滅菌されるべきである。いくつかの機関は、しかし、これは長期的に細かい顕微楽器を損傷する可能性があり、オートクレーブ処理を規定している。可能な場合に使用できる滅菌の使い捨て器具。 1。麻酔<ol><li>密閉容器内のイソフルランでマウスを麻酔し、素早く麻酔ノーズコーンを接続、操作盤の上に仰臥位に配置します。何レフがないことを確認するために後肢足をつまんで麻酔のテスト妥当。 </li><li>外科用メスで皮膚を剃ると80％エタノールで滅菌する。また、70％イソプロピルアルコール中2％クロルヘキシジンは、皮膚消毒のために使用することができる。麻酔導入時にイソフルラン濃度は3％ですが、メンテナンスのための百分の1から1.5まで絞り。定期的な呼吸や心拍​​数を維持するために、この濃度の微調整を行います。加熱パッド上に動物の温度を維持する。 </li></ol> 2ドナー操作<ol><li>胸壁フラップを形成するために、剣状突起のレベルで横のカットに続いて腋窩に肋骨端から胸郭の両側を通して胸を切断することにより、心臓や血管を露出するために開胸術を行います。頭の横にこのフラップを持ち上げて、オペレーティングボードにピン。心臓や血管を露出させ、心膜をはがします。 </li><li> IVCを通して心臓に冷たい、ヘパリン化生理食塩水の近位片手で、その他の注入1ミリリットルとピンセットで下大静脈を持ち上げ、その未然防止にIVCの小さな動脈クランプを置くバック針穴を通して灌流液のT流れ。 </li><li>ガーゼや綿棒を使って、上行大動脈と肺動脈を露出させ、下方の心を撤回。大動脈と肺動脈の束にチャンネル（横洞）事後を通してmicroscissorsの一方のブレードをパスし、吻合のための十分な長さを確保するために限り遠位に可能な限り一緒に大動脈と肺動脈を切った。 </li><li>ネクタイやIVC、右上大静脈（SVC）に分割は、6-0絹糸を使用して、SVCと肺静脈を左に。肺静脈と一緒に左のSVCを囲み、それを結ぶために心臓にシングルスレッドの後方に配置して、別々に、IVCと右のSVCを接続します。移植まで4℃で冷滅菌生理食塩水中に保管した後、タイへの遠位血管を切断することにより、ドナー部位から心臓を収穫します。これは放血によるドナーの死をもたらす。 </li></ol> 3。受信者の操作<ol><li>麻酔をかける（セクション1）上記のように受信者。慎重にリトラクターを形成するために曲げられ剣状突起とペーパークリップを使用して後退させる恥骨から正中切開により開腹を行い、その後、刺激を避けるために腹部を剃る。暖かい滅菌生理食塩水に浸したガーゼで腸をラップし、腹部の右上に撤回。 </li><li>インフラ腎大動脈と下大静脈を露出させ、焼灼装置を用いて、腰椎の血管から、それらを分割することにより腸骨分岐に左腎動脈と静脈から大動脈と下大静脈のバンドルされたセグメントを解放する。焼灼が正しい温度にあると血管端を分割して密封するのに十分な時間に使用することに注意してください。 </li><li>大動脈遠位及び近位にIVCセグメントに小さな非外傷性血管クランプを適用します。最初の30のG針で穴を穿刺することによって大動脈の前壁の切開をすることができる。その後、ドナーの大動脈の大きさに合わせてmicroscissors垂直に切開を切った。任意のBLを削除するには、ヘパリン化生理食塩水で大動脈内腔をフラッシュしますOODの塊。 </li><li>冷生理食塩水に浸したガーゼで覆われた受信者のサイトへのドナー心臓を持参し、腹部の右側に配置します。ドナーの大動脈が受容大動脈と受信者のIVCの隣に位置して、ドナーの肺動脈に切開の隣に位置していることを確認します。 </li><li>動物が180°回転した段階れる遠位の角に達するまで、第1の左側に、近位の角や縫合から始まる10-0ナイロン縫合糸を実行している使用して、受信者の大動脈にドナーの大動脈端側を吻合。穏やかに大動脈の右側を露出し、遠位端から近位端まで大動脈壁の右側を通って縫合継続する腹部の左側にドナー心臓を動かす。大動脈吻合を閉じる前に、静かに任意の血栓や空気を除去するために、ヘパリン化生理食塩水でルーメンをフラッシュします。 </li><li>受信者IVCドナー肺動脈（PA）の端側を吻合。切開バージョンを作るtically動脈吻合に従い、サイトでのIVCの前壁にmicroscissorsと。 IVCの内腔内に左側壁の遠位端から出発10-0ナイロン縫合糸を実行して、レシピエントにドナーIVC PAを吻合。近位端部に到達した後、吻合を完了するために遠位端に前方右側壁に沿って上昇縫合糸を続ける。吻合を閉じる前に、静かに任意の血栓や空気を除去するための内腔をフラッシュします。 </li><li>血管クランプを解放する前に、場所吻合サイトの周りゲルフォームの断片を、止血が達成されるまで綿棒で穏やかな圧力を適用します。血管再生の際には、近位のクランプが続き、第一の遠位のクランプを解除する。 </li><li>血行再建後は、その回復を支援するために、外部から移植片に37℃で温かい生理食塩水を適用します。移植片は、通常はすぐに細動を開始し、数分以内に洞調律に自然に戻ります。温かい0.6ミリリットルを注入レシピエントの水和を維持するために生理食塩水を皮下。手術が完了する前に鎮痛のためのブプレノルフィンの皮下に注入する</li><li>両方の層のための1 5-0吸収性ランニング縫合糸で腹部の創傷を閉じます。内層を完了することによって起動し、皮膚に沿って継続する。 </li></ol> 4。回収および移植片の監視<ol><li>感染症の予防のためのアンピシリンを注入し、回復のために、37℃で加熱パッド上で受信者を置く。ほとんどの動物は急速に回復し、通常は飲んで、多くの場合、3時間以内に食べている。マウスは苦痛の徴候を示していた場合は、原因を特定するために密接に調べます。明らかな原因があれば、ブプレノルフィンで処理し、密接に監視します。症状が重いか、8時間以上を持続する場合は、獣医師に相談して安楽死を考えてみましょう。必要な場合は、症状が解決するまで、ブプレノルフィンの12時間ごとに注射を継続して与える。マウスは8時間後に苦痛の徴候を示している場合は、12を続けて与える彼らが解決するまで、ブプレノルフィンの毎時注射。症状は以上48時間継続し、必要に応じて安楽死させる場合は、獣医師に相談してください。 </li><li>直接腹部触診により移植心拍を監視し、+ + + +のような健康的な原因の高度な拒絶に弱拍のための+への移植片とのために、ビートの強さを記録する - 移植片の拒絶反応を完了することにより、非拍動など。実験期間中、週3回、その後、最初の10日間、毎日、マウスを監視します。 </li></ol>

<ol><li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-10+but+not+transforming+growth+factor-beta+is+essential+for+generation+and+suppressor+function+of+regulatory+cells+induced+by+intratracheal+delivery+of+alloantigen%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interleukin-10 but not transforming growth factor-beta is essential for generation and suppressor function of regulatory cells induced by intratracheal delivery of alloantigen.</a> Transplantation. 79, 568-576 (2005).</li>
<li>Chen, R. H., Bushell, A., Fuggle, S. V., Wood, K. J., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+granzyme+A+and+perforin+in+mouse+heart+transplants+immunosuppressed+with+donor-specific+transfusion+and+anti-CD4+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Expression of granzyme A and perforin in mouse heart transplants immunosuppressed with donor-specific transfusion and anti-CD4 monoclonal antibody.</a> Transplantation. 61, 625-629 (1996).</li>
<li>Poulin, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-9+promotes+eosinophilic+rejection+of+mouse+heart+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interleukin-9 promotes eosinophilic rejection of mouse heart allografts.</a> Transplantation. 76, 572-577 (2003).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thorac.+Cardiovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 57, 225-229 (1969).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+heart+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of heart in mice.</a> Transplantation. 16, 343-350 (1973).</li>
<li>Larsen, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-gp39+interactions+play+a+critical+role+during+allograft+rejection.+Suppression+of+allograft+rejection+by+blockade+of+the+CD40-gp39+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">CD40-gp39 interactions play a critical role during allograft rejection. Suppression of allograft rejection by blockade of the CD40-gp39 pathway.</a> Transplantation. 61, 4-9 (1996).</li>
<li>Saitovitch, D., Bushell, A., Mabbs, D. W., Morris, P. J., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+induction+of+transplantation+tolerance+with+a+nondepleting+anti-Cd4+monoclonal+antibody+and+donor-specific+transfusion+before+transplantation.+A+critical+period+of+time+is+required+for+development+of+immunological+unresponsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Kinetics of induction of transplantation tolerance with a nondepleting anti-Cd4 monoclonal antibody and donor-specific transfusion before transplantation. A critical period of time is required for development of immunological unresponsiveness.</a> Transplantation. 61, 1642-1647 (1996).</li>
<li>Callaghan, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+allograft+survival+by+inhibitory+FcgammaRIIb+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of allograft survival by inhibitory FcgammaRIIb signaling.</a> J. Immunol. 189, 5694-5702 (2012).</li>
<li>Qian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+donor+MHC+Class+I+or+Class+II+antigen+deficiency+on+first-+and+second-set+rejection+of+mouse+heart+or+liver+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Impact of donor MHC Class I or Class II antigen deficiency on first- and second-set rejection of mouse heart or liver allografts.</a> Immunology. 88, 124-129 (1996).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+acceptance+of+mouse+kidney+allografts+is+associated+with+increased+Foxp3+expression+and+differences+in+the+B+and+T+cell+compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Spontaneous acceptance of mouse kidney allografts is associated with increased Foxp3 expression and differences in the B and T cell compartments.</a> Transpl. Immunol. 24, 149-156 (2011).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Heterotopic Heart Transplantation in Mice.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li>
<li>Mottram, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrocardiographic+monitoring+of+cardiac+transplants+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Electrocardiographic monitoring of cardiac transplants in mice.</a> Cardiovasc. Res. 22, 315-321 (1988).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

マウスの心臓移植がマスターにかなりの外科技術を必要と挑戦的な顕微法である。最も困難な局面は、血管の小さい直径である。また、受信者動作時間と出血を制限する必要がある。マウス心臓移植のための技術は、第一のコリーらによって記載された。 1973年に、その後モットラムら 12による。私たちの修正は、以下の点が含まれています。まず、すぐに灌流後の大動脈と肺動脈バンドルの開胸や離断以下の寒さのヘパリン化生理食塩水でドナー心臓の即時灌流は、収穫時に温かい虚血を防ぐことができます。第二に、代わりにドナーの前に受信者を準備する、すぐにドナー収穫が終了した後、受信者の準備を開始し、生存率の改善が結果的にレシピエントにおける腹部の露出時間が短縮されます。最後に、小さな非外傷性血管の使用は、Bにクランプ血流をロックし、代わりに、受信者の大動脈/ IVCバンドルのネクタイ、通常の船舶への損傷が少なく、その結果と後肢麻痺の発生率を減らすことができます。 また、以下の点が成功のために重要である。ドナーとレシピエントの最適なサイズは約23〜26グラム、最適...

臓器移植の動物モデルは、臨床移植患者の治療を改善するための貴重な情報を提供することができる。マウスモデルは、遺伝子改変マウスや他の動物モデル1-3には使用できませんマウスに特異的な試薬の広い範囲に臓器移植拒絶または受諾の免疫機構を研究するために特に有用である。移植のマウスモデルでの課題は、満足のいく成果を達成するために、かなりの技術的なスキルを必要とし、ドナーとレシピエントのサイズが小さいです。 技術が最初に、その後、コリーら 5によるマウス心臓移植のために適合したラット4で心の異所移植のために記述されていた。この手法は、移植された心臓またはtの生存を危うくする可能性があり、どちらも、前にドナー操作に受信者とドナー心臓の無灌流の準備に関与彼は、受信者。本来移植拒絶反応および耐性6-8のメカニズムを調べるために記載した方法が広く用いられている。その他は、マウス9,10における心臓移植のために小野とリンジーの元のラットの心臓移植の手順を適応している。さらに最近では、技術はコリーら 11の方法に関連する問題のいくつかを克服したマウスの心臓移植のために出版された。直ちに開胸後のインサイチュ灌流冷ヘパリン化生理食塩水および受信者の動作時間を最小限に抑えるために従来の受信者動作にドナー動作を行う。プロトコルは、ここで説明挙げモットラムら 12に記載の方法に基づいて、我々の修飾を組み込んでいる。加えて、我々は代わりに6-0絹のネクタイの小さな非外傷性血管クランプを使用しています。血管クランプはより多くのスペースを取ることの欠点を持っていますが、彼らはあまりにもタイトな緩みすべきではないネクタイ、より制御が容易であるそしてクランプよりも除去が少なく簡単です。初期学習代替ステージが、我々の方法は、血管吻合のための単一の実行中の縫合糸を使用して縫合糸の均一性を確保するために、近位および遠位の角に滞在縫合糸を使用し、その吻合部分の開通することです。

<table><tbody><tr><td>手術用顕微鏡&nbsp;</td><td>ライカ、ヘールブルグ、スイス</td><td>M651</td><td>10-25倍</td></tr><tr><td>麻酔器&nbsp;</td><td>Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia</td><td>Vett3</td><td>イソフルランと酸素の混合物を空気中に送達することができます&nbsp;</td></tr><tr><td>操作ボード&nbsp;</td><td>金物店またはオフィスサプライヤー</td><td></td><td>ピンを取ることができる高密度のコルクまたは合成</td></tr><tr><td>ヘパリン化生理食塩水(5 U / ml、4 &�;C)</td><td>ファイザー、米国</td><td>FW25</td><td>1 ml シリンジ、氷上に 23 G 針</td></tr><tr><td>通常の生理食塩水 (37 °C;C)</td><td>AstraZeneca Pty Ltd, Australia</td><td>4538</td><td>In 1 ml syringe with 23 G needle on warm pad</td></tr><tr><td>縫合糸 10- ナイロン, 5-0 Vicryl</td><td>Ethicon, Inc. NJ, USA</td><td>2870G/J421H</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine (0.05 mg/kg in 0.1 ml saline)</td><td>Reckitt Benckiser, Sydney, Australia</td><td></td><td>In 1 ml syringe with 23 G needle on ice</td></tr><tr><td>Ampcillin (5 mg/kg in 0.1 ml saline )</td><td>Aspen, シドニー、オーストラリア</td><td></td> 氷<td>上の23G針付き1mlシリンジジェル</td></tr><tr><td>フォーム</td><td>Pharmacia&Upjohn Co. USA</td><td>801289304</td><td>Cut into small pieces</td></tr><tr><td>高温焼灼装置</td><td>Medtronic, USA</td><td>8444000</td><td></td></tr><tr><td>Heating Pad/Right Temp</td><td>Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsurgery instruments:</strong</td><td>>Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.,&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー</td><td>中国・上海</td><td>WT2020</td><td></td></tr><tr><td>マイクロハサミ</td><td>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;"&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;「</td><td>WT1020</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ鉗子(ストレートチップ)」</td><td>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;"&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;「</td><td>WA3010</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ鉗子(湾曲した先端)」</td><td>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;"&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;「</td><td>WA3020</td><td></td></tr><tr><td>マイクロモスキートクランプ(1ペア)</td><td>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;"&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;「</td><td>W40350</td><td></td></tr><tr><td>微小血管非外傷性クランプ(1ペア)</td><td>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;"&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;「</td><td>W40130/W40150</td><td></td></tr></tbody></table>」

異マウスハートtransplantion用に変更する方法

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

マウスはしばしば、利用可能なトランスジェニックマウスおよび試薬広範囲の移植免疫学の研究において、心臓移植のドナーとレシピエントとして使用されている。難しさに起因動物のサイズが小さく、心臓移植に関与する顕微かなりの技術的な課題に提示される。特に、初期の移植後の技術的な故障率の高さは、受信者の死や、後肢麻痺または非心臓の鼓動のような術後の合併症に起因する可能性がある。ここでは、異マウス心臓移植のための完全な技術は、レシピエントマウスにドナー心臓とその後の注入を収穫含む、実証されている。ドナー心臓は、上行大動脈と肺動脈の寒さのヘパリン化生理食塩水や離断とその場での灌流直後に収穫される。受信者動作は、続いて腹部大動脈および下大静脈（IVC）の調製を含むシングルランニング10-0 microsuture者と受信者のIVCとドナーの肺動脈の類似の吻合を使用して、受信者の大動脈とドナーの大動脈の端側吻合。操作以下の動物0.6mlの生理食塩水を皮下注射し、37℃の加熱パッド上で回復させる。 227マウス心臓移植の結果は86.8％の48時間での成功率で要約されている。 15（6.6％）が48時間以内に死亡した48時間以内で13.2％の失敗、5（2.2％）、虚血性傷害および/または血栓症を移植片に起因する非鼓動心を持っていた後肢麻痺、10（4.4％）を経験した。

初期トレーニング期間の後、我々の群におけるマウス異心臓移植の227例を分析した。最初の24時間以内で成功率は90.3％であり、48時間後に、それは86.8％であった。 48時間以内で30（13.2％）の障害、5（2.2％）後肢麻痺を経験し、安楽死させなければならなかった、10（4.4％）15ながら、虚血傷害および/または血栓症を移植片に起因する非鼓動心を持っていた（6.6％）48時間以内に死亡した。いくつかの実験的な移植片生存がひずみ、さまざまな組み合わせで表1に示す。非同一系統間の移植は拒否している間、同じドナーとレシピエント系統間の心臓移植は、長期的に受け入れられた。 移植された心臓の外観を図1に示す。心臓が心臓の外観と組み合わせて鼓動を停止したときに心臓移植失敗の原因は、一般に、移植後の時間によって決定される。必要であれば、原因ビートの停止の心臓部の組織学的分析によって確認されるべきである。たとえば、DBA / 2ドナー心臓移植のC57BL / 6系統の受信者に、心臓が未感作レシピエントにおける拒絶反応は、通...

マウスの心臓の異所性移植のための顕微手術のための技術が実証されています。これには、ドナー採取とレシピエント血管の吻合のための簡略化された方法が含まれています。

異マウスハートTransplantion用に変更する方法

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

本手順の目的は、ドナーマウスからレシピエントマウスへ心臓を移植することです。まず、ドナーの胸腔から心臓を摘出し、冷生理食塩水で保存します。次に、その心臓をレシピエントの腹腔内に移植し、移植後の心拍をモニタリングします。最後に、視覚的検査と病理学的解析によって移植拒絶反応を確認します。最終的に、非血縁のマウス系統間で移植された心臓は拒絶される一方、同一系統間で移植された心臓は受容されるという結果が示されます。ドナー動物およびレシピエント動物のサイズが非常に小さいため、微小外科の手順におけるこの測定の長期的なビデオデモンストレーションは、習得が困難な重要なステップとなります。複雑な外科的手続きを伴い、レシピエント側の手術における精度と速度の向上が不可欠であるため、すべての器具が80%エタノール浴で十分に洗浄および滅菌されていることを常に確認してください。使い捨ての滅菌済み器具の使用を強く推奨します。ドナーマウスをイソフルランチャンバー内で麻酔にかけ、手術台の上に仰臥位に固定します。その後、速やかにノーズコーンを接続し、麻酔薬を投与します。後肢のつまみテストを行い、麻酔の深度を確認してください。逃避反応が見られないことを確認した後、外科用メスを用いて皮膚の除毛を開始します。次に、手術の間を通じて、2%Chlorhexidine含有70%イソプロピルアルコールを浸したワイプを用いて、皮膚を3回交互に拭き、滅菌します。動物の呼吸と心拍を視覚的にモニタリングしてください。それに合わせて、イソフルランの投与量を調整します。まず、胸腔切開を行い、心臓と血管を露出させるため、肋骨腔の両側から胸部を開きます。肋骨の縁から腋窩に向かって切り込みを入れ、胸骨に沿って横方向に切断します。これにより、胸壁のフラップを作成します。フラップを頭側近くの手術台にピンで固定します。次に、心臓周囲の心膜を除去します。下大静脈（IVC）をピンセットで持ち上げ、心臓に近い側のIVCに冷やしたヘパリン生理食塩水を1 mL注入します。次に、ガーゼと綿棒を用いて、下大静脈（IVC）に小型動脈クランプを装着し、針穴から溶液が逆流するのを防ぎます。心臓を下に移動させ、大動脈と肺動脈を露出させます。横静脈洞は、大動脈と肺動脈の束の後方にある管状の空間です。次に、吻合に利用できる血管の長さを最大限に確保するため、大動脈と肺動脈をできるだけ遠位で切断します。続いて、下大静脈、右側上大静脈、左側上大静脈、および肺静脈を切断します。それぞれを6.0シルク糸で結紮してください。まず、下大静脈（IVC）と右側上大静脈（SVC）を結紮します。次に、左側上大静脈（SVC）と肺静脈を結紮します。これで、結紮部位より遠位のすべての血管を切断し、心臓を摘出します。移植まで、心臓を4°Cの冷たく滅菌された生理食塩水で保存します。ドナーと同様の手順で動物を手術の準備させた後、まず開腹術を行います。恥骨から胸骨まで正中線を切開します。曲げたゼムクリップをリトラクターとして使用します。腹部を開き、腸管を温かい生理食塩水に浸したガーゼで包み、腹部の右上方に牽引します。次に、腸骨動脈分岐部から左腎動脈および左腎静脈の間の腎下大動脈と下大静脈（IVC）を露出させます。束ねられた大動脈と下大静脈（IVC）のセグメントを遊離させます。次に、調整可能な電気焼灼器を用いて、腰血管から大動脈と下大静脈を分離します。遊離した大動脈および下大静脈セグメントの近位端と遠位端に、小型の非外傷性クランプを装着します。30ゲージの針を用いて、ドナーの大動脈のサイズに合わせた穴を垂直に切り抜いた箇所から、大動脈の前壁に穴を開けます。この機会に、ヘパリン含有生理食塩水で洗浄し、大動脈腔内の血栓を除去します。次に、冷たい生理食塩水中でドナー心臓を導入します。ドナー心臓をレシピエントの大動脈の切開部位の隣に配置します。ドナー肺動脈を10-0ランニングナイロン縫合糸を用いてレシピエントの下大静脈（IVC）の隣に配置します。大動脈を端側吻合します。近位側のコーナーから開始し、左側に沿って遠位側のコーナーまで縫合します。次に、動物を180度回転させます。その後、心臓をずらし、大動脈壁の右側を遠位側から近位側に向かって縫合し続けます。吻合部を閉じる前に、ヘパリン生理食塩水で管腔を穏やかに洗浄し、血栓と気泡を除去します。その後、縫合を完了させます。次に、肺動脈を吻合させる部位の下大静脈（IVC）前壁に、垂直に切開を加えます。次に、10-0の走行縫合糸を用いて吻合を行います。IVC近位端の管腔内、左壁の遠位端から血管の縫合を開始します。その後、右前壁に沿って遠位端まで縫合します。これを繰り返します。吻合を完了する前に、腔内を十分に洗浄します。次に、吻合部の周囲にジェルフォームを配置します。綿棒で軽く圧迫し、止血を行います。レシピエントの血流を再開させます。まず遠位クランプを外し、次に近位クランプを外します。レシピエントの手術においては、手術の正確性と速度を最適化することが極めて重要です。したがって、クロスクランプ時間は理想的には30分未満とします。回復を促すため、グラフト部位に37 °Cの温 saline を適用してください。心室細動は直ちに発生しますが、数分以内に自然に洞調律に復帰します。手術部位を閉鎖する前に、ブプレノルフィンを筋肉内に注射します。すべての組織層を5-0吸収性縫合糸による連続縫合で閉鎖し、手術を終了します。手術創を閉鎖した後、受容動物にアンピシリンを投与し、さらに0.6 millilitersの生理食塩水を皮下注射します。水分補給を促すため、意識が回復するまで、37 °Cに設定したヒートパッドの上に動物を置きます。ほとんどの動物は、手術後3時間以内に飲水および摂食を開始します。8時間後もマウスに苦痛の兆候が見られる場合は、症状が消失するまで12時間ごとにブプレノルフィンを投与してください。術後10日間は、マウスの苦痛が48時間以上続く場合は獣医師に連絡してください。腹部触診により、移植片の心拍を直接的にモニターします。毎日、心拍の強さを、健全な移植片の場合は4+、進行した拒絶反応による弱い心拍の場合は1+として記録してください。10日後に移植片が完全に拒絶され、拍動しなくなった移植片は、陰性として記録します。227例の異所性心移植を行い、24時間後の成功率は90.3%、48時間後の成功率は86.8%でした。その後、移植心の拍動を週3回モニタリングし続けます。失敗例には、後肢麻痺、移植片による心拍停止、虚血性損傷および/または血栓症が含まれ、移植片生存例をカタログ化しました。心臓移植の失敗原因は、病理学的検査によって確定されました。矢印で示した移植心臓の解析により、心臓組織の血栓症および心梗塞が、C 57 Black sixのドナーおよびレシピエントの系統組み合わせにおけるこの移植心の不全の原因であることが判明しました。心臓の拒絶反応はなく、移植心臓は100日以上にわたって生存していました。本例では、心臓が生命維持機能を担わない状態であったため、それに伴う筋肉萎縮により、心臓のサイズがわずかに縮小していました。対照的に、ドナーにDBA/2、レシピエントにC57BL/6を用いた拒絶反応が起こる系統の組み合わせでは、移植された心臓は7日までに拍動を停止し、100日までに拒絶反応の徴候を示しました。同じ心臓を採取したところ、完全に線維化し、萎縮していました。この手法は適切に実施すれば9,000万以下で完了できますが、フッ素ガスを扱う際は極めて危険であることに留意してください。麻酔ガス回収装置の使用が強く推奨されます。

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Medicine

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異マウスハートTransplantion用に変更する方法

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