Name: 生体材料の血管新生を評価するために、完全な皮膚欠損モデルインビボ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: 学ぶマウス完全皮膚欠損モデルを用いた組織工学材料の血管新生評価法。透過光装置とデジタル画像解析により、バイオマテリアル内の血管ネットワークを可視化・定量化する効率的な手法です。

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インテグラ皮膚再生テンプレートは、親切にインテグラライフサイエンス社によって提供された。作業を支援する資金源には：（。の人数15090007）この作品は、部分的にCIRM-BMBF早期トランスレーショナルII賞、ゲノム調節のためFONDAPセンターJTEとの両方によって賄われた。

足場の調製<ol><li> 12ミリメートル生検パンチを使用して、足場のサンプルを生成します。 </li><li>足場内に生物活性分子または細胞を導入するために、穏やかに滅菌ガーゼでそれらを絞ることによって足場をドレイン。次いで、目的の生物活性分子または細胞を含む溶液の160μLを加えることによって足場を再水和する。そのようなMTTアッセイなどの代謝アッセイを通して細胞と生物活性化の成功をダブルチェックしてください。 </li><li>必要に応じて、ステップ1.2で説明したように、再び再水和を介して、フィブリン - トロンビン溶液またはヒドロゲル中に、例えば、それらを提供することにより、足場の内部でテストすべき化合物または細胞を固定。 注記：化合物または細胞が機械的に材料に付着していない場合、このステップでは、便利であることができる。一つは、また、化合物の放出動態を制御することができます.. </li><li>カット時によって、全ての実験および対照群ではそれぞれの足場の下に置かれるチタン化メッシュを、準備しますgのうち円形の小片、直径約14ミリメートル。 注：チタン化メッシュが創傷床から再生された組織を区切るために必要な物理的境界として機能します。 </li></ol> 2。動物<ol><li>提示されたモデルの実装に先立ち、対応する動物保護法を参照し、地元当局からの許可を得る。本研究では、すべての実験は、現在のドイツの動物福祉の行為に応じて、マウスを用いて行ったし、オーバーバイエルン（RegierungフォンOberbayern）特別区政府によって承認されました。 </li><li>動物や歪みを慎重に選択します。モデルはマウスで確立されたが、それは、ラット、ウサギまたはブタのような他の一般的な動物に変換することができる。 </li><li>あなたは毛皮動物で作業している場合には、足場の移植前の動物の背中を剃る。 注：この作品は20グラムと25グラム、しかし異なる年齢とbの間の体重の生後6〜8週のマウスを使用していますODY重みを使用することもできる。 </li></ol> 3麻酔<ol><li>無菌条件下で動作を行う。動物の正常な体温を維持するために、加温マットを使用する。 </li><li>以前は吸入麻酔動物は0.05〜0.1ミリグラム/ kg体重、皮下8時間毎の用量でBuprenorphinを受ける。 </li><li>吸入麻酔（イソフルラン）の下で動物を置きまたは同等の標準的な手順を適用します。優しく動物のつま先を絞ることによって、または皮膚ピンチのいずれかを介して麻酔を確認してください。 </li><li> exsiccosisを防止するために、0.5ミリリットルの動作の開始時に生理的食塩水を皮下注射する。 </li></ol>スキンの4切除<ol><li>腹臥位で動物を置き、先端の細いパーマネントペン（ 図1A）、マウスの背中の正中線をマーク。 </li><li>切除範囲を定義します。 ふぃぎゅに示す領域内の欠陥を置きます1Cを再び。欠陥があまりにも尾側に配置された場合、動物はドレッシングや足場を除去する傾向であることに注意してください。 </li><li>の10mm生検パンチ（ 図1B）を使用してバイラテラル欠陥の周りを作成する。パンチを慎重に皮膚に押し付けされるべきであり、皮膚を通って完全に切断するのに使用してはなりませんが、切除領域（ 図1C＆1E）を描写する。 </li><li>静かにピンセットでマークされた肌を持ち上げ、微細手術用ハサミ（ 図1F）を使用してマークされた円に沿って切開する。出血の場合には、慎重に、滅菌ガーゼで圧迫する。切除のステップバイステップの説明は、 図1に示されている。 注：欠陥が肌の弾力性に起因する欠陥の拡大を補償するために、足場を生成するための1より小さくパンチを使用して作成されます。 </li></ol> 5。足場移植<ol><li>ティタのためのスペースを作るためにデバイスをメッシュ2-4ミリ（ 図2A）のための創傷境界で、皮膚とその下の組織の分離を拡張します。 </li><li>創傷床の上に直接欠損部にメッシュをチタン化し、傷のエッジ（ 図2AおよびB）の下に置きます。 </li><li>メッシュの上に直接足場を置きます。 </li><li>足場（ 図2C）にわたって少しの縁を残して、4〜6つの結び目を、隣接する巻回エッジに足場を縫合する。 注：生分解性縫合糸の使用は避けてください。 </li><li>創傷領域（ 図2D）の監視を可能にしながら足場を保護するために、欠陥の上にドレッシング透明傷口を縫合。 </li></ol> 6。術後ケア<ol><li>ドレッシングや足場の相互操作を回避するために、ケージごとに1つのマウスを保管してください。 </li><li>運動活動、体重、苦痛の徴候、許容範囲を観察することによって、日常的に動物の一般的な状態を評価するドレッシングと自動傷に。また、出血、感染症の局所および全身兆候およびドレッシングの位置のための創傷領域を監視します。 </li><li>動物の苦痛を最小限にするために、0.05〜0.1ミリグラム/ kg体重または同等の鎮痛薬の用量で毎日Buprenorphinを注入する。 </li><li>マウスは創傷被覆材を除去または損害賠償場合は、麻酔下でそれを交換するか、再接続します。 </li></ol>足場の7。安楽死や植<ol><li>希望の時点で、ペントバルビタール（150mgの/ kg）を過剰投与により動物を生け贄に捧げる。 </li><li>足場および可能性（ 図3A）、バック、マウスの皮膚の多くを含むべきである油性マジック、と皮膚切除のサイトをマークします。 </li><li>ハサミやメスでマークされた線に沿って皮膚を切開。下にある組織から鈍準備（FIを通じて、足場およびチタン化メッシュを含む全体の肌を、デタッチグレ3B）。 </li><li>ペトリ皿に伸ばし移植組織を置きます（ 図3CおよびD） </li></ol>血管網の8。可視化と定量化<ol><li>徹照： <ol><li>白色光（100ワット、標準の電球）の強力なソースの上にシャーレを搭載することにより、透視デバイスをセットアップします。 </li><li>デジタル画像を得るために、イルミネーターの上にデジタルカメラを固定します。 </li><li>逆さまに透視デバイス上のペトリ皿上のサンプルを置きます。 </li><li>マクロモードでの完全な足場の写真を撮るだけでなく、正常な皮膚の等しいサイズの領域。さらにデジタル解析用のTIFF形式で画像を保存してください。 </li><li>さらに生化学的または組織学的分析のために組織を保存します。 </li></ol></li><li>デジタルセグメンテーションおよび定量： <ol><li> FRを求めることができるVesSeg-Toolソフトウェアを、ダウンロードしてインストールします：における電荷のee <a href="http://www.isip.uni-luebeck.de/index.php?id=150&amp;L=2%255">http://www.isip.uni-luebeck.de/index.php?id=150&amp;L=2%255</a> 。 </li><li> VesSeg-Toolソフトウェアで画像を開きます。 </li><li>デジタル解析（画像→選択）のための足場で覆われた画像の領域を選択します。 </li><li>オプション「ヒステリシスしきい値」（計算血管強化→トップハット変換→画像→血管強調フィルタ→ヒステリシス閾値処理）を使用して血管のコントラストを増やします。 </li><li>血管マップ（画像→血管強調フィルタ→ヒステリシス閾値化→しきい値の境界線）のセグメント化を進めます。でも、リモートで血管様であるすべてのピクセルなので、第一の閾値（「船舶保険」）を選択して、容器とラベルされます。第二の閾値（「背景カバレッジを」）を選択したので、特に血管様であるピクセルのみが容器としてラベル付けされます。 </li><li>非捕捉血管を追加するために、通常はそのような毛や縫合糸など細長い、血管様構造体である一般的な偽陽性構造を排除するために手動で自動分割案を確認してください。 </li><li>血管の長さと血管（バイナリ画像統計→画像→画像の統計量）でカバー全体の面積を計算します。 注：血管の長さを計算するために、結果として得られる血管マップ内の血管が1画素20の幅でラインに間引く。 </li></ol></li><li>天然組織に100％の値を割り当てる、足場と同じパラメータの下でネイティブ皮膚領域を分析し、その値に足場を関連付ける。白画素の割合が、正常組織では60％と足場30％である場合、例えば、それは足場の50％の血管新生を表す。注：白い船カバレッジが足場の周りの正方形の面積に割り当てられている。白画素カバレッジconsiの数を調整円の面積は、正方形（4×R 2）よりも有意に小さい（πさ×R 2）であることをダリング。 </li></ol>

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関心文の対立： すべての著者：なし財務開示： 著者らはいずれも、この原稿に記載されている製品、デバイス、または薬物のいずれかでの経済的利害関係を持っていません。

生体材料内の血管新生の過程を研究するための新しい信頼性の高い方法の開発が求められて組織工学構築物中の血液灌流を改善するのに成功したアプローチを確立する必要がある。 ex vivoで可視の足場血管新生を製造するための一般的な方法は、高解像度のツールを提供する顕微鏡の使用を含む。ほとんどの場合、しかし、この方法は、小さな組織領域の分析に制限され、高価で時間がかかる傾向がある。また、多くの場合、血液灌流血管が非機能的なもの22と区別できない精巧な標識および染色の方法を含んでいる。血管の機能性を評価するために使用されている方法は、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴イメージング及び陽電子電子トモグラフィである。これらの方法は、非常に高価な装置および低分解能23の欠点を有する。血管新生を可視化するための別の一般的に使用される戦略である組織24の化学的腐食に続いて血管キャストを使用すること。この方法は、血管網の代表的な三次元構造を得ることを可能にするが、結果は、人工灌流および組織のレベルに応じてそのようなタンパク質またはRNA分析などのさらなる生化学的研究のために使用する...

ここ数十年では、組織工学は、体自身の細胞1を組織欠損に代わる新たな治療オプションを開いた。組織再生の生理学的プロセスをサポートするために、足場を創傷床からの細胞が成長し、欠陥2,3を復元することができるシナリオを提供し、生分解性構造として設計されている。 不十分な血管新生は、バイオ人工足場4の臨床的ブレークスルーをバック保持している主な障害であると考えられている。細胞の内方成長で、栄養と酸素が増加し、材料の血管新生の需要が不可欠となる。不十分な血管新生または遅延は、したがって、組織工学製品5の中心壊死につながることができます。また、血管が免疫コンピテント細胞を提供し、再生領域における代謝残留物を除去する。高い感染率と低い再生は唯一である足場6,7の血管新生を増加させることによって回避することを目的としている組織工学において観察不十分な血液灌流の結果の一部。 生体材料自体と足場の微細構造の重要な役割に血管新生のフォーカスを改善することを目指していくつかの戦略。 8,9を復元することにより（再）、 再生に修理から治癒過程をシフトに最も近い生理学的特性を有する組織を生成する際に新たなアプローチを開発するための集中的な研究努力がある。その再生能力に関しては研究し、評価した生体材料は、コラーゲン、フィブリン、キトサンおよびアルギン酸10,11が含まれていた。これらの生体材料は、組織の脱細胞化、自己集合、ラピッドプロトタイピングやエレクトロ12のような異なる戦略を用いて新たな足場を構築するための骨格として使用され、組み合わせることができる。 ENHするためにボディの自身の再生能力をANCE、足場は、生物活性化することができます。組換え血管新生増殖の組み込みは、足場の血管新生を改善することが示されている14のような因子のために13または遺伝子をコードするベクター因子。幹細胞の使用は、広く間葉ストローマ細胞および内皮前駆細胞が、最も注目を集めている15,16血管新生を改善するための有望な戦略であることが示されている。他のアプローチは、移植前17にプレハブ血管網が含まれている構造物を構築しようとします。足場の設計とその生物活性化に集中的な取り組みにもかかわらず、戦略は、臨床的に有意なレベルでの血管新生を改善していないと、大規模な火傷での皮膚代替物を除いて、臨床ルーチンへの生体工学材料の翻訳はためらいがちに18を行われている。 理由の一つなぜ血管新生人工組織構造物を依然として未解決の問題であり、in vivoでのアプローチにおける新技術の成功を評価することが困難である。 インビトロ実験は、足場の血管新生の可能性の重要な洞察を提供し、適切な動物モデルは、このような材料の生体適合性などの重要なパラメータを研究するために必要とされる、治療の安全性および有効性と、特に重要な、組織の血管新生ができるが構築する。したがって、in vivoでの血管ネットワークを視覚化し、定量するための信頼性の高いツールが不可欠である。 本研究では、外植足場内部の血管網の可視化および定量化を可能にする、シンプルで信頼性の高い方法を提示する。この方法は、組織の透視やデジタルセグメンテーションに基づいています。この方法は非侵襲的であるため、ターゲット材料のさらなる分子および組織学的分析を可能にする。

<table><tbody><tr><td>Ethilon P-3 13 mm 3/8 circle 5-0</td><td>Ethicon, Norderstedt, Germany</td><td>698G</td><td>Ethilon polyamid-6 precision point-reverse cutting suture</td></tr><tr><td>Biopsy punches (10 mm)</td><td>Xiomedics, Acuderm inc., Fort Lauderdale, FL, USA</td><td>P1050</td><td></td></tr><tr><td>Biopsy punches (12 mm)</td><td>Xiomedics, Acuderm inc., Fort Lauderdale, FL, USA</td><td>P1250</td><td></td></tr><tr><td>デジタルカメラ&nbsp;</td><td>リコー、ハノーバー、ドイツ</td><td>Cx1</td><td></td></tr><tr><td>Gazin Mullkompresse&nbsp;</td><td>Lohmann und Rauscher, Neuwied, Germany</td><td>13622</td><td>滅菌ガーゼ (10 cm x 10 cm)</td></tr><tr><td>二層コラーゲンベースの足場 (8' x 10')</td><td>Integra Life Science Corporation, Plainsboro, NJ, USA</td><td>88101</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン、吸入麻酔用液体ガス&nbsp;</td><td>Baxter, Unterschleissheim, Germany</td><td>100196040</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital, 16 g / 100 ml</td><td>Fa. Merial, Hallbergmoos</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nuri Nu/Nu Nu Mic マウス, CrLNU-Foxn1nu</td><td>Charles River, Sulzfeld, Germany</td><td>株コード 088</td><td>Athymic ヌードマウス、6 から 8 週齢、体重 20 から 25 g&nbsp;</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン(0.3 mg / ml)</td><td>Essex Pharma GmbH、ミュンヘン、ドイツ</td><td></td><td></td></tr>、<tr><td>チタンメッシュ(15 cm x 15 cm)、エクストラライト</td><td>PFM Medical AG、K&ouml;ln, Germany</td><td>6000029</td><td></td></tr><tr><td>Tissucol Duo S Immuno 2 ml</td><td>Baxter Germany GmbH, Unterschlei&szlig;ドイツ、ハイム</td><td>B1332020110614</td><td>フィブリン-トロンビン溶液&nbsp;</td></tr><tr><td>透明粘着剤ドレープ(30.5 cm x 26 cm)</td><td>KCI Medical Products, Wimborne Dorset, UK</td><td>M6275009/10</td><td></td></tr></tbody></table>

生体材料の血管新生を評価するために、完全な皮膚欠損モデル<em&gt;インビボ</em

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

不十分な血管新生は、組織工学構築物の臨床的成功を制限する主な要因の一つであると考えられている。血管新生を改善することを目指す新たな戦略を評価するために、信頼できる方法は、可視バイオ人工足場への新しい血管の内殖を行い、結果を定量する必要がある。過去数年にわたり、私たちのグループは、透視によって血管の直接可視化を可能にし、デジタルセグメンテーションを通じて定量化する可能性を提供する、完全な皮膚欠損モデルを導入しています。このモデルでは、人は外科的にマウスの背中に完全な皮膚欠損を作成し、テスト材料に置き換えます。目的の分子または細胞は、それらの潜在的効果を研究するために、そのような材料に組み込むことができる。自分の選択した観測時間の後、材料は、評価のために外植される。両側性の創傷は、目の内部の比較を行う可能性を提供するでの学習に必要な動物の数を減少させるだけでなく、個人間で成果物を最小限に抑えます。他のアプローチと比較して、私たちの方法は、簡単で信頼性が高く、費用対効果の分析を提供しています。私たちは、別の生体材料、バイオ活性化のアプローチの血管新生をテストする際に、高解像度のスクリーニングを行うためのルーチンツールとしてこのモデルを実装している。

信頼性のある国間の完全な皮膚欠陥、皮膚は、研究中の生体材料（ 図2）で置き換えることができるマウス（ 図1）で作成することができる。ここでは、大きな合併症は、感染や異物反応の巨視的兆候もないが、手術手順の間または後に観察されない。マウスはそれを削除する際にまれに、足場は失われます。創傷収縮は、（ 図3）が観察されなかった。組織透視は、天然の組織と移植された足場（ 図4）の両方を含め全組織サンプルにおいて、幅が最大で30μmの血管構造の明確な可視化を可能にした。デジタルセグメンテーションの後、船は簡単に移植後希望の時間に定量することができた。例えば、2週間、移植後、62.28±8.6％の血管新生レベルが観察された（平均値の平均値±標準誤差であり、n = 8）21。全体として、約25分＆＃160;動物あたり（2足場）を移植のために必要とされる、組織の収穫と描いて一つのサンプルのデジタル解析のために10分間、5分。最後の点として、この方法は、さらなる分析のために外植された組織の品質に影響...

血管新生は、正常組織工学におけるアプローチの鍵となります。したがって、信頼性の高い技術は、組織構築物における血管網の発達を評価するために必要とされる。ここでは、可視化し、 生体内で血管新生を定量化するためのシンプルで費用対効果の高い方法を提示する。

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

本手順の全体的な目的は、組織工学的に作製した構築物における血管を可視化することです。これは、マウスの背中に標準的な全層皮膚欠損を作成することで達成されます。次に、組織工学材料のサンプルをこの皮膚欠損部に移植します。その後、観察時間の終了時に、材料を移植して透過照明装置に設置します。最後に、標準的なデジタルカメラを用いて血管ネットワークの高解像度写真を撮影します。最終的に、Vessel egg toolソフトウェアを用いたデジタルセグメンテーションと定量化により、血管ネットワークの解析を行います。顕微鏡観察、コンピュータ断層撮影、または磁気共鳴画像法などの既存の手法に対する本手法の主な利点は、新生機能血管に焦点を当て、バイオマテリアル内における血管プロセスを時間的・原因的に効率よく可視化および定量化できることです。本手法は、真皮代替材料の血管新生に関する知見を提供します。また、他のモデル生物への適用や、他の臓器における血管新生の研究にも利用可能です。まず、12 mmの生検パンチを使用してスキャフォールド（例えば牛由来のコラーゲンベース真皮代替材料など）のサンプルを作成し、各スキャフォールドの下に配置するための直径14 mmの円形テフロンメッシュを切り出します。マウスを麻酔し、足指へのピンチテストで麻酔深度を確認した後、規定のプロトコルに従って背中の被毛を除去します。動物を腹臥位に固定し、細字の油性ペンを用いてマウスの背中の正中線をマークします。動物によるスキャフォールドの除去を防ぐため、尾側へ離れすぎない位置に切除範囲を設定します。10 mmの生検パンチを使用し、パンチを皮膚に慎重に押し当てて、左右対称の円形欠損を作成します。ピンセットで切除範囲を明確にし、マークした皮膚をそっと持ち上げ、外科用鋏を用いてマークした円に沿って切開します。出血が生じた場合は、滅菌ガーゼを用いて患部を慎重に圧迫し、Titanicメッシュを挿入するためのスペースを確保します。創縁における皮膚と下層組織の剥離を、さらに2～4 mm延長します。メッシュを欠損部の中の創底に直接配置し、創縁の下に挿入します。次に、スキャフォールドをメッシュの上に直接配置します。4〜6箇所の単結節縫合を用いてスキャフォールドを縫合し、隣接する創縁がスキャフォールドからわずかにはみ出すように固定します。その後、創傷部位のモニタリングを可能にしつつスキャフォールドを保護するため、欠損部の上に透明な創傷被覆材を縫い付けます。運動活性、体重、疼痛の徴候、ドレッシング材への耐性、および自傷行為をモニタリングし、動物の全身状態を毎日評価します。また、創傷部位に出血がないか、局所的および全身的な感染の徴候がないか、およびドレッシング材の位置を確認します。その後、所定の時点で動物を安楽死させます。テキストプロトコルに従い、油性マジックを使用して、スキャフォールドを含む切除部位に印を付けます。鋏またはメスを用いて、印を付けた線に沿って鈍的な切除で皮膚を切開し、スキャフォールドとメッシュを含む皮膚全体を下層組織から剥離させ、組織を裏返してシャーレの中に広げて置きます。サンプルを可視化するために、透過照明装置の上に配置します。マクロモードで、スキャフォールド全体および同サイズの正常皮膚領域の写真を撮影し、その後のデジタル解析のためにTIFF形式で保存します。ves EQ toolソフトウェアをダウンロードした後、画像を開き、バックスペースキーを押して解析対象となる関心領域（ROI）を選択します。その後、「invert」を押してください。血管ネットワークを白で可視化するには、image vessel enhancement filter hysteresis thresholding top hat transformationを選択し、以前のすべてのステップで血管強調（vessel enhancement）を計算します。スクロールして画像の拡大・縮小を行ってください。最初の閾値（threshold）または血管被覆率（vessel coverage）を選択して血管マップをセグメント化し、わずかでも血管のように見えるすべてのピクセルが血管としてラベル付けされるようにします。「Calculate（計算）」を押します。選択範囲をプレビューするには、2番目のしきい値または背景カバレッジ（background coverage）を選択し、特に血管のような画素のみが血管としてラベル付けされるように調整します。血管の長さおよび血管が占める総面積を算出するには、「Image（画像）」、「Image Statistics（画像統計）」、および「Binary Image Statistics（二値画像統計）」をクリックします。血管の長さは、血管ネットワークをあらかじめ1ピクセル幅に細線化することで最適に推定できます。このため、計算を行う前に「image morphological filters」から「skeletonizing」を選択してください。血管面積と血管長さの比率から、関心領域における血管サイズの値を算出できます。必要に応じて、関心のある血管のみを選択し、アーティファクトを除去します。選択モードの下をクリックし、バックスペースキーを押して、選択した血管を新しい画像にコピーします。最後に、スキャフォールドと同じパラメータで天然皮膚領域を分析し、天然組織に100%の値を割り当てて、その値に対するスキャフォールドの相対値を算出します。例えば、白画素の割合が正常組織で30％、スキャフォールド内で15％である場合、これはスキャフォールドの全面積の50％が血管化していることを示します。なお、これらの値は画像全体の面積に対応していることに注意してください。したがって、ここに示すように、選択した領域の面積に補正する必要があります。組織の移植から2週間後、透過照明を用いることで、生体組織と移植したスキャフォールドの両方を含む全組織サンプルにおいて、幅最大30 µmまでの血管構造を明確に可視化することができました。摘出組織の血管新生レベルをデジタルセグメンテーションを用いて解析した結果、生体皮膚と比較してスキャフォールド内で62.28 ± 8.6%の血管新生が観察されました。この手順を行う際は、再現性のある全層皮膚欠損を作成し、生体材料を創傷部に確実に固定することが重要です。この手順に従って拡大させた組織は、組織学的解析やRNAおよびタンパク質発現などのさらなる解析に使用できます。

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Research

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Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

我々はマウス胚の四肢の皮膚に複雑な血管網の形成を分析するために複数のラベルで共焦点顕微鏡を走査型ホールマウントの免疫組織化学とレーザーをご紹介。...

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このプロトコルの目標は、自然な肌に似た3次元の全厚の皮膚等価物を構築することです。特別に構築された自動創傷装置により、無菌状態を維持しながら、正確で再現性のある創傷を生成することができます。...

三次元の全層皮膚等価物と自動傷つけ処理の発生

今日まで、厚い組織の欠陥は通常、自家組織フラップまたは人工組織を適用することによって再構築されています。このプロトコルでは、自家皮弁の代わりとして機能するために、自家椎弓根を持つ血管新生組織皮弁をエンジニアリングするための新しい方法を提示します。...

操作された血管柄マッスルフラップ

これは、組織工学チャンバー内の顕微動動静脈ループまたはフロースルー椎弓根構成を使用して、in...

中に組み込み血管新生による組織工学<em&gt;インビボ</em&gt;ティッシュ・エンジニアリング商工会議所

我々は、単離され、十分に特徴付けられた環境で、in vivoで血管新生を分析するためのモデルとして動静脈（AV）ループの生成のための顕微的なアプローチを説明します。このモデルだけでなく、血管新生の研究のために有用であるだけでなく、最適なエンジニアリングを軸方向に血管および移植組織に適しています。...

血管新生および血管組織工学を研究するための小さな動物モデルにおける動静脈（AV）ループ

このビデオは、ラットの静脈介在手術後の筋内膜過形成の発症を研究するモデルを示しています。...

静脈介在モデル：バイパスグラフト開存を研究するための適切なモデル

ここでは、血管形成生体内可視化するプロトコルを提案と多光子顕微鏡による 3 D 足場でリアルタイム。重要な性マウス頭蓋骨骨欠損モデルにおける血管新生遺伝子組み換え足場を調べた。コントロールの治療群よりもより新しい血管を認めた.

頭蓋骨の重要な骨欠損修復の多光子顕微鏡In Vivo遺伝子組み換え 3 D-PLGA/nHAp 足場による血管新生を可視化

ここでは、2つのマウス創傷治癒モデルが記載されており、1つは細胞およびサイトカイン創傷治癒応答を評価するように設計され、もう1つは創傷閉鎖率を定量化するように設計されている。これらの方法は、糖尿病などの複雑な疾患モデルと共に使用して、創傷治癒不良の様々な側面のメカニズムを決定することができる。...

後部皮下ポリビニルアルコールスポンジの移植と切除テール皮膚創傷モデルを用いた急性創傷治癒の評価

静脈奇形のマウス異種移植片モデルを生成するための詳細なプロトコルを提示する。このモデルは、超活性化TIE2および/またはPIK3CA遺伝子変異を含む患者由来内皮細胞の皮下注射に基づいている。異種移植病変はVM患者組織の組織病理学的特徴を密接に再現する。...

静脈奇形に対する患者由来異種移植片モデル

このプロトコルの目的は、長期的な培養のためのアクセス可能で簡単な技術を使用して、血管化されたヒトの皮膚同等物の生成および体積分析を記述することです。可能な限り、ステップの根拠は、研究者が研究ニーズに基づいてカスタマイズする能力を可能にするために記述されています。...

自己組み立て型血管化ヒト皮膚等価物の生成

このプロトコルは、実験研究を目的とした、深部下腹上動脈脚に基づくヒト穿孔皮弁モデルの外科的収穫技術を説明しています。...

血管化複合同種移植および遊離フラップの保存戦略を調査するための実験的ヒトDIEPフラップモデル

学ぶマウス完全皮膚欠損モデルを用いた組織工学材料の血管新生評価法。透過光装置とデジタル画像解析により、バイオマテリアル内の血管ネットワークを可視化・定量化する効率的な手法です。

生体材料の血管新生を評価するために、完全な皮膚欠損モデル

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