腎摘出後のマウスにおける自発転移性腎細胞癌（MRCC）をモデル化する

この手順の全体的な目標は、臨床的に関連する自然発生的な転移性腎細胞がんを生じさせることです。これは、最初に移植用のレカルーク細胞を準備することによって達成されます。2番目のステップは、同所性腎腫瘍細胞移植を行うことです。

次に、腫瘍が成長した後、腎摘出術を行うことにより原発腫瘍を切除します。最後のステップは、腎摘出術後の自然転移の進行を監視し、さまざまな場所での疾患の分布を評価することです。最終的に、このプロトコルは、自然転移性腎細胞がん疾患のモニタリングを可能にし、実験的治療薬の有効性の評価を標準化するためのガイドラインを提供します。

異所性、多くの場合表在性または皮下腫瘍細胞移植法などの既存の方法に対するこの技術の主な利点は、腫瘍細胞が体の残りの部分に広がる能力を含む、患者に現れる腎細胞癌またはRCCを再現することです。この技術の意味は、患者の死亡の主な原因である全身性転移性疾患であるため、腎細胞癌の治療にまで及びます。マウスモデルは通常、腎摘出術後に発生することがある自然発生的な転移性疾患を治療しません。

ただし、この方法は自然発生的な転移性RCC疾患についての洞察を提供することができます。また、原発性腫瘍の切除が一般的であり、死亡の主な原因がポート外科的転移性疾患の再発である他の種類のがんにも適用できます。これには、とりわけ乳房や黒色腫のモデルが含まれます。

一般に、この方法に不慣れな個人は、まず、腎臓を見つけ、腫瘍細胞が移植時に局在したままで漏れないようにするのが難しいため、苦労します。そして第二に、neの有効性が効率的に実行され、術後の回復が可能になります。同所性移植に先立って、マウスルシフェラーゼタグ付きレカ細胞またはレカルーク細胞を、トリプシン、化および5%FBS含有培地遠心分離機での蘇生懸濁液に続く75%coの流暢度への単層としてタグ付けし、その後、PBSでの洗浄で3回繰り返す細胞は、その後、無血清培地中の細胞を5マイクロリットルあたり4番目のレンコルークの5倍10の濃度に再懸濁します。

ッ素2〜3%のウミネズミに麻酔をかけた後、乾燥を防ぐために眼に獣医軟膏を塗布した後、足をつまんで十分な麻酔がかかっていることを確認し、マウスを右側横臥にして置き、左側の四肢と後肢の間を剃ります。次に、アルコールとヨウ素を背側の腰部に沿って塗布します。手術用ハサミを使用して、最後の肋骨と股関節の間に縦方向に1センチメートルの皮膚切開を行います。

次に、鈍い解剖はさみを使用して、皮膚の下の結合組織を緩めます。次に、手術用ハサミを使って腹壁を縦方向に0.5センチ切開します。次に、湾曲した鉗子を使用して、開いた傷の周りをそっと押し下げます。

これにより、腎臓が外部に形成され、注射前に臓器を穏やかに固定することができます。ハミルトンシリンジに、表在性被膜下移植のために調製した細胞混合物の5マイクロリットルをロードします。針を縦方向の腎臓と平行に保持し、斜めの端を上にして、針を腎臓嚢の下、実質の上

針が所定の位置に配置されたら、小さな白い泡が形成されるまですべての細胞を注入します。針をカプセルからゆっくりと取り外し、すぐに滅菌綿の先端アプリケーターを使用して、内部被膜下移植のための注射部位をブロックします。.目的の移植部位とは反対側の腎臓の側から開始します。

斜めの端を上にして内側にした状態で針を持ちます。針が見えるまで腎臓の内部に挿入しますが、反対側の被膜下腔に穴を開けないでください。白い泡が形成されるまで細胞を注入し、注入部位を綿棒で拭いて漏れを防ぎます。

腎臓を体腔にそっと戻します。吸収性の5.0 Vicryl縫合糸を使用して腹壁を閉じます。完了したら、皮膚層を一緒に保持し、回復する前に2〜3個の創傷クリップを配置します。

500マイクロリットルの0.9%塩化ナトリウムと100マイクロリットルのブプレノルフィンを皮下投与します。移植後26〜30日で、動物に麻酔をかけ、以前と同様に腎臓を露出させます。次に、鉗子を使用して、腎臓の抱きしめ端から接続脂肪組織をそっと取り除き、頭蓋端から副腎を取り除きます。

鉗子を使用して腎臓を優しくつかみ、吸収性の5.0 Vicryl縫合糸を尿管、腎動脈、腎静脈の周りにスライドさせます。次に、止血剤で糸を固定した後、ゆっくりとダブルノットを結びます。はさみを使って結び目の上を切り、腎臓を取り除きます。

腎臓が取り除かれたら、潮、動脈、必要に応じて焼灼による出血がないか慎重に確認します。5.0 Vicrylを使用して腹部壁を縫合した後、傷口クリップを使用して皮膚を閉じます。苦痛、出血、または可動性の制限の兆候がないか、動物を毎日監視してください。

動物を安楽死させた後、手術用ハサミを使用して、尿道の上から胸腔を上って下顎まで切開します。鈍い端のはさみを使用して、腹壁の筋肉から皮膚を分離します。次に、腕と脚に沿って皮を切り、ゆっくりと皮を剥いていきます。

皮膚筋膜と腹壁に結節がないかよく調べます。次に、表在性リンパ節を調べます。腹壁を切開し、左右の側面に沿って横隔膜まで切り込みます。

水平カット1回付き。腹壁の前部を取り外して内臓を露出させます。内臓の乱されていない外観を調べて、非常に注目に値する腫瘍を探します。

また、食物や出血の証拠がないか、胃や腸の内容物にも注意してください。腫瘍の有無について各臓器を視覚的に採点し、22のサイトのチェックリストから作業し、特定のグループの動物のスコアを集計して、疾患の分布を比較します。次に、肝臓を慎重に取り出し、PBSで洗います。

次に、肉眼的腫瘍または異常がないか調べ、以前と同様に採点します。次に、脾臓、腎臓、膵臓の切除と採点に進みます。次に、腰椎仙骨リンパ節、腎臓リンパ節、腸間膜リンパ節を含む腹部リンパ節を検査します。

横隔膜を査定して転移性の広がりの証拠がないか確認した後、横隔膜を取り外し、胸腔に横方向の切開を2回行い、前頭部を切除して肺と心臓を露出させ、食道をそっと持ち上げて心臓の上の気管を切断します。肺と心臓を切除した後、結節がないか組織を評価します。次に、鉗子を使って心臓を圧迫します。

跳ねる一貫性の欠如は、腫瘍の存在を示している可能性があります。最後に、外科用ハサミを使用して頭蓋骨を直線的に切ります。脳全体が露出するまで、頭蓋骨の小片をそっと取り除きます。

視覚的なスコアリングシステムを使用して、5つの異なる動物グループにおける疾患、分布、および疾患の重症度を評価しました。これらのグループは、疾患の程度と重症度が異なることを示しました。犠牲の直後の生物発光イメージングからなる追加の測定を使用して、ミクロおよびマクロの転移性病変を定量的に評価しました。

移植、腎摘出術、剖検の両方を習得すると、適切に行われれば、動物ごとに5〜10分で行うことができます。転移性腫瘍細胞の種類によって治療反応が異なるかどうかを調べること。転移性腎細胞癌の細胞。

患者は現在、その発症後の局所および転移性疾患の成長を評価するために、動物に直接移植するために使用されています。この技術は、RCCの分野の研究者が臨床的に関連する疾患の進行と治療への反応を探求する道を開きました。特に、これらの反応が原発性の限局性疾患または自然発生的な転移性増殖によって異なるかどうか。

複数の手術を受けている小さな動物を扱うには、施設の動物プロトコルガイドラインと無菌状態を厳守する必要があることを忘れないでください。動物の快適さと回復は、この手順で適切に実行するための重要な変数です。