Name: ネズミ異心臓移植技術 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-08T23:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: 学ぶネズミ異心臓移植の手術手順と血管吻合技術。ドナー心臓採取から受容者への動静脈吻合、縫合張力管理まで詳細に解説し、日々の触診によるグラフト健康状態評価法も習得できる。

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著者は、私たちの研究室で彼の前の仕事のために博士ビアジオピエトラに感謝したいと思います。

全ての動物は、動物実験委員会の承認の下でコロラド大学のバーバラデイビスセンター動物施設での病原体を含まない条件下で飼育し、NIHガイドラインに従って世話された。 手順開始後麻酔の深さは、最初に足指のピンチによって、および呼吸速度の遵守によって判断される。 1。ドナー心臓の収穫<ol><li>ペントバルビタール（60 mg / kgのIP）を注入することにより、ドナーマウスを麻酔。 </li><li> 4ウェイの制約により、マウスを固定し、毛皮をクリップ。アルコールで皮膚を拭きます。 </li><li>肌を離れて解剖した後、横隔膜のすぐ下横切開を行うことによって、腹腔を開きます。 </li><li>沿岸挿入にダイヤフラム後部をカットし、前方および上方に心をさらす前胸壁を持ち上げます。 </li><li>胸の左右に後側方胸腔をカット全層を拡張します。 </li><li>隔離する下大静脈（IVC）と右心房への挿入に隣接し、IVCの周りの緩い5-0絹縫合糸を配置。 </li><li> IVCに4℃のヘパリン化生理食塩水（200 U / CC）の1.0 CCを注入し、5-0絹縫合し、分裂と血管を結紮する。 </li><li>同様の方法で右上大静脈（RSVC）を単離と5-0絹縫合および除算と連結する。 </li><li>静かに動物の右側に向かって心をロールと左上大静脈（lSVC）を単離、5-0絹縫合糸で結紮し、左肺動脈を露出する分割。 </li><li>胸腺が離れて主肺動脈（PA）と左右のPAの枝から鈍い解剖している間に濡れたガーゼの下に心を確保し、大動脈弓の昇順。 </li><li>周囲の組織の大動脈弓自由を解剖鈍らせる。マイクロはさみは右上腕橈側動脈に大動脈近位に分割するために使用される、すなわち心と分裂の間には枝があってはならない大動脈のポイント。 </li><li>大動脈弓のこのセクションでは、注入プロセスのための動脈カフを形成する。 </li><li> PAのトランクとPAの左右の枝を露出させ下方大動脈カフを反映している。 </li><li>離れて、可能な限り心臓から周囲の組織から、左右のPAの枝を解剖鈍らせる。これは、周囲の組織からのPAトランクを容易に解剖することができます。 </li><li> 、などの遠位に可能な限り、その分岐部のすぐ近くのPAトランクを分割します。肺動脈のこのセクションでは、注入プロセスのための静脈カフを形成する。 </li><li>ハートとネクタイのベースの周りに5-0絹縫合糸を配置します。心臓は、次いで塩基で遊離切断し、4℃の生理食塩水中に置かれる。総収穫期は約です。 10〜15分。 </li></ol> 2。ハートインプラント技術<ol><li> （必要に応じて60 mg / kgのIP初回投与、25 mg / kgのIP補足用量）ペントバルビタールとレシピエントマウスを麻酔。 </li><li>毛皮をクリップ4ウェイの制約により、マウスを固定化し、滅菌方法でポビドンヨードやドレープで皮膚を取</li><li> 2センチメートル正中垂直腹部切開を行い、腹腔を入力してください。 </li><li>上方腸を撤回し、胸に上の外部化。ケース全体に無菌湿ったガーゼ（滅菌生理食塩水）に包まれて保管してください。 </li><li>吻合部位に劣るし、腎血管下の腹部大動脈と下大静脈（IVC）を分離し、大動脈の周りに4-0綿のネクタイを配置し、IVC優れた。 </li><li>フィールド内の任意の腰椎血管を特定し、10-0ナイロン縫合糸で結紮。 </li><li>綿の絆を結び、最初劣るが、優れた。このようにして、いくつかの血液は、大動脈切開を容易に製造する大動脈内に保持される。 </li><li>大動脈の内腔を入力するように30gの針で大動脈切開を形成している。約2mmの長さに細かいマイクロハサミで切開を拡張します。この切開は長いに沿って直線的に作られている容器のitudinal軸。 </li><li>以下の方法で受信者の大動脈にドナーの大動脈の側吻合に終止符を作る。ドナーの大動脈内および受信者の大動脈とネクタイの切開の下角に10-0ナイロン縫合糸滞在ステッチを配置します。ドナーの大動脈と腹部大動脈とネクタイの切開の優れたコーナーに最初に反対の第二10-0ナイロンを配置します。 </li><li>大動脈の側壁に優れたから下位まで実行されている縫合線を作成し、以前に置か滞在ステッチに対して接続します。あなたはステッチとして一緒intimas（内容器面）必ず持参してください。次に、実行中のファッションやネクタイに内側を縫合。それぞれの側の最初と最後のステッチは、可能な限り滞在ステッチの近くに配置してください。その後、5ステッチの合計を作る、これら二つの間3等間隔のステッチを持っていることを目指しています。 </li><li>以下の方法で受信者にIVCドナー肺動脈の側吻合に終止符を作る。 PunctURE 30gの針でIVCと約ための切開を延長する。細かいミクロはさみで2ミリメートル。この切開部は、容器の長手方向軸に沿って直線状に形成されている。 </li><li> 10-0ナイロンでIVCを切開の劣るコーナーにドナー肺動脈を結ぶ。ドナー動脈とIVCとネクタイの切開の優れたコーナーに最初に反対の第二10-0ナイロンを配置します。 </li><li>肺動脈とIVCとタイの間で実行されている縫合線を作る。それぞれの側の最初と最後のステッチは、可能な限り滞在ステッチの近くに配置してください。その後、7編目の合計を作る、これら二つの間5等間隔のステッチを持っていることを目指しています。 </li><li>静脈流を再確立遠位4-0綿のネクタイを離します。 </li><li>静脈吻合部の止血が観察された後、近位4-0綿ネクタイを徐々に緩め、動脈吻合は、止血のために観察される。両方の吻合が安全であると考えているときは、Cを削除マウスのオットン絆。 </li><li>腹部に腸を返します。腹壁を実行している様式で5-0シルク縫合糸を用いて2層に閉じられる。 </li><li>クロージングの際に輸液蘇生などの腹部に、滅菌、温かい生理食塩水1.0ミリリットルボーラスを投与して、生理食塩水0.8ミリリットルを手術後に皮下注射する。これ以外の支援策は、手術中に必要とされない。加温ブランケットに動物を回復する。総インプラントの時間は約です。初心者のための90〜120分、経験のある45〜60分。ブプレノルフィン鎮痛、0.05 mg / kgで、サウスカロライナ、手順の最初に0.1〜0.2ミリリットルと72時間後にOPごとに6月12日時間を管理する。 </li></ol> 3グラフト査定<ol><li>腹を触診により毎日の移植片機能を評価する。 </li><li>それは腹腔内注射を与えるべきであるかのように、マウスを押したままにします。 </li><li>優しく腹壁に対する人差し指の先端を押して、鼓動strを確かめる移植片のengthと規則性。 </li><li> （非拍動が移植片を拒絶した）0に触診品質4（通常の振幅と周波数）からスコアを与える。 </li></ol>重要事項： すべての楽器は、滅菌され、滅菌手袋は作業中は身に着けられているし、無菌のフィールドが維持されている。ドナーとレシピエントの手術は、手術用顕微鏡を用いて行われる。吻合が「クリーン」であることを確認してください。即ち、ステッチを配置するときに背面壁が捕捉されないということである。これは重要なくびれが麻痺肢の後肢に失敗した移植片にし、極端な場合には、その意志を超える可能性が高い結果が流れるようになります。また、全層が血管外膜と縫合針の内膜が達成されるなど、渡すことが極めて重要です。エッジのEvertionもシールや吻合の治癒を助ける内膜への内膜の接触があることを保証します。別の極めて重要な事実または吻合縫合線の張力も最適であることを保証されている。緩すぎると不可逆的な漏れがあるでしょう、きつすぎると流れるように狭窄が発生します。動脈側の場合は混雑の心はなり静脈側にあれば、これは、移植片の不十分な灌流になります。

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343 (1973).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3%2C000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123 (2001).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Surg%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> J Invest Surg. 26 (4), 223 (2013).</li>
<li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+suture+technique+in+a+mouse+heart+transplant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Modified suture technique in a mouse heart transplant model.</a> Asian J Surg. 34 (2), 86 (2011).</li>
<li>Mao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+knotless+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">A novel and knotless technique for heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> J Heart Lung Transplant. 28 (10), 1102 (2009).</li>
<li>Csencsits, K. L., Bishop, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+alloreactive+CD4%2B+and+CD8%2B+T+cells%3A+there%27s+more+to+it+than+MHC+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Contrasting alloreactive CD4+ and CD8+ T cells: there's more to it than MHC restriction.</a> Am J Transplant. 3 (2), 107 (2003).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nat Protoc. 2 (3), 471 (2007).</li>
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<li>Grazia, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+cardiac+allograft+rejection+by+directly+cytotoxic+CD4+T+cells%3A+parallel+requirements+for+Fas+and+perforin%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Acute cardiac allograft rejection by directly cytotoxic CD4 T cells: parallel requirements for Fas and perforin.</a> Transplantation. 89 (1), 33 (2010).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), (2007).</li>
<li>Plenter, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Society+for+Surgical+Research.+45th+Annual+Congress%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> European Society for Surgical Research. 45th Annual Congress. , (2010).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

この手術法は、習得することは容易ではないが、一度マスターして、強力な研究ツールである。研究者/外科医は技術の一貫性により、細部へのこだわりによって報われる。学習段階の間に忍耐が鍵となります。新見3によって発行され、ビデオベースの学習ツールを用いてそれが最初に成功した手順を達成するための試みが11〜90％の成功率を達成するために78試行の平均をとる。動画は、手術11,12の重要な教育ツールとなっている。 トラブルシューティング吻合から出血は発生し、これが原因縫合糸で正しい緊張の欠如、または少なすぎ、縫合糸のいずれかに思われることがあります。このようなゲルフォームなどの凝固誘導剤は、リークを低減するために有用になることができますが、我々は、外科医が得意技に頼ることをお勧めします。混雑した非拍動している心臓は、特に静脈側にあまりにもタイトな吻合に最も一般的である。非beatiNG、非灌流移植片は、一般的に冠状動脈の1に移動した気泡が原因で発生します。これは、血管への気泡の侵入を避けるために湿らせたツーぬれ場を維持することが重要である。 技術の限界研究者は、完全に機能する心臓への影響を調査したい場合、この手法は適していない。それは、現在までに実行することは不可能証明された同所移植技術を必要とするでしょう。 既存の方法に関して意義 1は、マウスで完全に血管新生し、固形臓器移植への影響を研究することを希望した場合、心臓モデルは、おそらくマスターするのが最も簡単です。肺、腎臓および肝臓移植のマウスモデルが存在するが、多くを学ぶことが困難と完璧ですか。 プロトコル内での重要なステップそれは非常に重要であることを全層P血管外膜と縫合針の内膜を含むロバが達成される。エッジのEvertionもシールや吻合の治癒を助ける内膜への内膜の接触があることを保証します。別の極めて重要な要因は、吻合縫合線の張力も最適であることを保証することである。緩すぎると不可逆的な漏れがあるでしょう、きつすぎると流れるように狭窄が発生します。動脈側の場合は混雑の心はなり静脈側にあれば、これは、移植片の不十分な灌流になります。 なかでも、繰り返し、手順や細部への継続的な注意の一貫性は素晴らしい結果とfundableと発行可能なデータが得られます。

時代には、マウスにおいて、腎臓、肺、肝臓および膵臓の移植を行うことが可能である場合、1973 1-4歴基本臓器移植および免疫学の研究の基礎は、マウスにおける異所性心臓移植モデルのままである。現在に至るまでいくつかの論文は、この手順の改善/改良5,6を詳細に発表されている。 固形臓器、主に血管新生移植のモデルとして、この手順では、誰にも劣らない。一度マスターして、この手順では、同種の拒絶反応7、慢性血管障害8および虚血再灌流障害9のメカニズムの開発に研究に適しています。 正常にこの手順を学習するためのキーは、他の手術、インストラクターや細部への研修生と注意側の忍耐のようなものです。プロセスの開始時に新しい外科医は、そのTを見つけるちょっと各移植に多くの時間を過ごすことになります。経験が得られるように、外科倍、したがって虚血は、大幅に削減されます。すべてのステップの詳細に注意を払って、遅かれ早かれ、成功につながる。 インストラクターは渡すために最善を行うことができ、かつ、これらの手術の間に遭遇する可能性のあるピットの滝のすべてを予測する一方で、「創造的な」訓練生は、おそらく、自分のいくつかを見つける！ 手順は以下の通りの基本です。大動脈弓昇順ドナーは、受信者の腹部下大静脈（IVC）に吻合、端側である受信者腹部大動脈およびドナー肺動脈に吻合、端側である。血液は冠動脈へのドナーの大動脈を通して逆行で受信者の大動脈から流れます。血液は、それが冠静脈洞を介して右心房に排出する冠状系を介して流入した後、右心室に送り込まれ、受信者IVCに肺動脈を介して。このようにして、冠動脈のシステムは、動脈血を供給され、洞調律は、再灌流の1〜2分以内に移植片に戻ります。心臓の左室が下にロードされた本質的圧力であるため、左心室自由壁は、時間の経過とともに萎縮します。

<table><tbody><tr><td>Instrument</td><td>Roboz #</td><td>Fine Science Tools #</td><td>Arosurgical #</td></tr><tr><td>Straight micro-discutting sersip #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>湾曲したmicro-discuting 鉗子 #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>湾曲した鋸歯状鉗子</td><td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>バンナスマイクロ解剖ハサミ、ショート</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>マイクロ解剖ハサミ、ストレート、シャープ、ロング</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr><td>マイクロスプリングハンドルニードルホルダー</td><td></td><td></td><td>11.549.15</td></tr><tr><td>ストレート蚊鉗子</td><td></td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ解剖ハサミ、ストレート、鈍い</td><td>RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ解剖ハサミ、湾曲、鈍い</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>マイクロリトラクター</td><td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>計器トレイ、10インチ x 6 &frac12;&rdquo;x &frac34;"</td><td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>シルク縫合糸、5/0、22.5 m スプール</td><td></td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>10/0 ナイロン</td><td></td><td></td><td>T4A10Q07</td></tr><tr><td>5/0 シルク</td><td></td><td></td><td>E19A05N</td></tr><tr><td>グローブ</td><td></td><td>バイオゲル from Medex Supply</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td></td><td>Precept, #64-9012-9</td><td></td></tr><tr><td>Syringes</td><td></td><td>B-D 1 cc インスリン、#329424</td><td></td></tr><tr><td>コットンアプリケーター</td><td></td><td>フィッシャーブランド、#23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>ポビドン-ヨウ素綿棒</td><td></td><td>PDI、#B40600</td><td></td></tr><tr><td>4/0 コットンタイ</td><td></td><td></td><td>器具付きオートクレーブ滅菌済み 国産コットン</td></tr></tbody></table>

ネズミ異心臓移植技術

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

この技術は最初のコリー、ウィンとラッセルによって報告されて以来、現在では40年以上です。それは中に習熟し、この技術を利用する他のラボのために数年かかったが、それは現在では広く世界中の多くの研究室で使用されます。独自の技術への重要な改良点は、開発され、新見によって2001年に報告された。ここで説明する私たちの中心部にある3外科医（Plenter、グラツィア、ピエトラ）の手に10年以上にわたって進化してきた技術である。これらの技術は、現在、外科医と研究者の若い世代に渡されている。 詳細我々は他の人がこの非常に有用なモデルを使用することができる場合があり、このような方法で、ここに関係するように努力する - 主に新見の経験に基づいて、使用される手順は、細部に進化してきた。新見のように、我々は学習へのビデオの援助が初心者のための貴重な資源であることを発見した。

<html>この手術法の利用は、単純な移植片生/除去の研究、または非常に複雑な実験プロトコルのどちらかの道を開きます。以下に簡単に図に記載の研究では、（もしあれば）のFasおよび/またはCD4 T細胞媒介心臓拒絶反応の機序として、パーフォリン、関与を定義しようとした。これは、今日利用可能なマウス系統の異常な配列によって可能になりました。結果は、CD4エフェクターT細胞による心臓同種移植片の拒絶反応は、移植片の直接Fas発現とT細胞のパーフォリン発現の代替的な寄与を必要とすることを実証する。我々の知る限り、これは、CD4 T細胞による細胞溶解活性は、 インビボでの一次急性同種移植片拒絶のための絶対的な役割を果たすことができるという最初の実証である。 1.JPG &quot;/&gt; 。図1パーフォリンおよびFasが （Fasリガンド欠損）CD4 T細胞が、B6 ラグを再構築するために利用された偏性およびCD4 T細胞媒介心臓拒絶 B6、B6 PFPKO（パーフォリンノックアウト）とB6のGLD の平行した経路を表現 - / -心臓同種移植片LPR C3H野生型またはFasを欠損C3Hの受信者。 CD4 T細胞からのドナー心臓または除去または単独のパーフォリンから一人でのFas（コントロール重量C3H + B6 CD4 T細胞対♦、P = NS）の除去（制御重量C3H + B6 CD4 T対■、P = NS細胞）が拒絶反応を排除しませんでした。興味深いことに、エフェクターCD4 T細胞からのFasLの除去は（●はp &lt;有意重量C3H + B6 CD4 T細胞対0.02、p &lt;重量C3H + B6 PFPKO CD4 T細胞、およびp対0.01 &lt;0.01対を遅延拒絶反応を行った。のC3H のlpr + B6 CD4 T細胞）。しかし、ほとんどの同種移植はまだ（5の4）拒否されました。重要なことに、両方のドナーのFasおよびCD4 T細胞のパーフォリンの同時除去完全に抑止拒絶（○はp &lt;0.002対対照重量C3H + B6 CD4 T細胞、C3H重量+ B6 PFPKO CD4 T細胞、およびC3Hのlprを B6 CD4 + T細胞）。この廃止は大幅に、より堅牢なCD4 T細胞のFasLの個々の除去以外だった（○、P &lt;0.003対コントロール重量C3H + B6のGLD CD4 T細胞）。グラツィアら 10から。許可を得て転載。

原稿は、マウスで異所性心移植を実行するために必要な手順について説明します。

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

この手順の全体的な目的は、マウスの異所性心移植を行い、その健康状態を評価することです。まず、ドナーの心臓を慎重に摘出します。次に、レシピエント内にドナー組織を移植するための十分なスペースを確保するため、移植部位を外科的に作成します。次に、動脈および静脈の吻合により、ドナー心臓を移植します。最終ステップとして、レシピエントを閉鎖する前に、血管縫合部の止血を確認します。最終的に、日々の触診によってグラフトの状態をモニタリングし、ドナーグラフトの生存に及ぼすさまざまな要因の影響を評価することができます。吻合の手順を習得するのは困難であるため、本手法を視覚的に示すことは極めて重要です。漏出や血流の制限を防ぐため、縫合糸の張力は適切に調整しなければなりません。ドナー心臓を採取するには、まず麻酔をかけたドナー動物を4方向固定具で固定します。被毛を刈った後、皮膚をアルコールで拭き取ります。皮膚を剥離した後、横隔膜の直下に横切開を加えます。腹腔を開くため、肋骨付着部の後方で横隔膜を切断します。胸腔を正中切開し、胸郭の両側後外側を切り開いて下大静脈（IVC）を単離し、右心房への流入部付近のIVCに5-0シルク糸で緩い結紮をかけます。IVCに4 °Cのヘパリン添加生理食塩水を1 cc注入し、5-0シルク糸で血管を結紮して切断します。同様に右上大静脈を結紮し縫合した後、心臓を動物の右側にゆっくりと転がし、左上大静脈を分離して結紮し、左肺動脈を露出させます。次に、濡れたガーゼの下で心臓を固定し、胸腺を主肺動脈、左右の肺動脈分枝、および上行大動脈弓から鈍的に剥離します。大動脈弓を周囲の組織から剥離し、その後、マイクロ scissors を使用して、心臓と大動脈の切断点との間に分枝がなくなるまで、右頭腕動脈の近位側で大動脈を切断します。大動脈弓のこの部分は、インプラント工程のための動脈カフとなります。次に、大動脈カフを下方に反転させ、肺動脈幹および肺動脈の左右枝を露出させます。その後、左右の肺動脈枝を、心臓からできるだけ離れた位置で、周囲の組織から鈍的に剥離します。肺動脈幹の分岐部の直近で、可能な限り遠位側を分断し、移植工程のための静脈カフを作成します。次に、心基部に5-0シルク縫合糸を縛ります。基部で切断し、摘出した組織を4 °Cの生理食塩水に移します。ドナー心臓を移植するための総採取時間は約10分から15分です。レシピエント動物を麻酔して固定した後、皮膚をポビドンヨードで拭き、その合間にアルコールまたは滅菌水で洗い流します。この操作を3回繰り返し、その後、手術部位を滅菌的にドレーピングします。次に、腹部正中線に2 cmの垂直切開を加え、処置を開始します。腹腔内に進入し、腸管を上方に牽引して胸部へ外にだし、滅菌生理食塩水で湿らせた滅菌ガーゼで包みます。続いて、腎血管より下方の腹部大動脈と下大静脈を単離し、吻合部位の上方および下方に、4-0コットンの結紮線を配置します。視野内にある腰動脈を特定し、10 Tナイロン糸で結紮します。下側の綿糸を縛り、次に上側の綿糸を縫合して結紮することで、大動脈内に血液を一部保持させ、大動脈の自己切断を容易にします。結び目を固定した後、30ゲージの針を用いて大動脈の管腔内に刺入します。次に、微細マイクロ鋏を用いて、血管の長軸に沿って直線的に約2 mmの長さまで切開線を延長します。続いて、10番のナイロン縫合糸を用い、ドナー大動脈とレシピエント大動脈の切開線下角にステイステッチをかけ、ドナー大動脈からレシピエント大動脈への端側吻合を行います。結紮した後、ドナー側大動脈の1つ目の結紮糸とは反対側、切開部の上角および腹大動脈に、2つ目の10 Tナイロン糸を配置し、この結紮糸も結紮します。2つ目の結紮糸が配置されたら、大動脈の外側壁において上端から下端に向かって連続縫合を行い、内膜を合わせて、先に配置した固定縫合糸に対して結紮します。次に、内側を連続縫合し、各側の最初と最後のステッチを固定縫合糸にできるだけ近づけて結紮します。これら2つのステッチの間に、等間隔に3つのステッチを入れ、合計5つのステッチにします。次に、ドナー肺動脈とレシピエント下大静脈（IVC）の端側吻合を行うため、まず30ゲージの針でIVCを穿刺し、その後、微細マイクロ鋏を用いて血管の長軸方向に沿って約2 mm直線的に切開線を広げます。続いて、ドナー肺動脈を10ノットのナイロン糸でIVCの切開線の下角に結紮します。ドナー動脈と腹部下大静脈（IVC）の切開部位の上角に、1つ目の結紮糸と反対側に2つ目の10 ohナイロン糸を配置し、結紮します。次に、肺動脈とIVCの間に連続縫合線を設け、結紮します。この際、両側の最初と最後のステッチは、支持縫合にできるだけ近い位置に配置してください。これら2つのステッチの間に5つのステッチを等間隔に配置し、計7針となるようにします。次に、遠位側の4-0 OTTコットンタイを外して静脈血流を再開させます。静脈吻合部の止血が確認されたら、近位側の4-0 OTTコットンタイを徐々に緩め、動脈吻合部の止血状態を確認します。両方の吻合部が確実であると判断されたら、マウスからコットンタイを取り除き、腸管を腹腔内に戻し、5-0シルクを用いて腹壁を2層にわたって縫合します。連続的に、閉腹時の輸液蘇生として、1 mLの滅菌温 saline（生理食塩水）を腹腔内にボーラス投与し、さらに0.8 mLの生理食塩水を皮下に注射します。最後に、日々の経腹触診により移植片の機能を評価するため、腹腔内投与と同様にマウスを固定します。その後、人差し指の先で腹壁を軽く押し、移植片の拍動の強さと規則性を確認します。触診の質について、正常な振幅および頻度を4点とし、拍動のない拒絶された移植片を0点としてスコアを付けます。この手術手技は、単純な移植片の生存研究と複雑な実験プロトコルの両方を容易にします。例えば、この代表的な実験では、CD4陽性T細胞介在性心臓拒絶反応のメカニズムとしてのfasおよび/またはperforinの関与が調査されました。これらの結果は、CD4陽性エフェクターT細胞による心臓同種移植片の直接拒絶には、移植片のFas発現とT細胞のperforin発現による代替的な寄与が必要であることを示しており、CD4陽性T細胞による細胞溶解活性が生体内で一次急性同種移植拒絶において不可欠な役割を果たし得ることを初めて明らかにしました。このビデオを視聴することで、健康に拍動する心臓移植片を実現するための、吻合部における縫合糸の配置方法について十分に理解できるはずです。

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Research

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Medicine

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