Name: ブナスケール昆虫への抵抗のためのアメリカのブナを（画面ための技術クリプトコッカスfagisugaリンド。） (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 47 s
Description: 学ぶ、アメリカブナのブナスケール昆虫抵抗性スクリーニング法。卵を採集・精製し、フォームパッドで樹皮に固定して1年後に成虫数を計測することで、抵抗性と感受性の個体を定量的に識別します。

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作者は感謝して、米国森林局森林健康保護の評価の監視と発展を支えてきた特殊な技術開発プログラム、強く、ブナカイガラムシの影響を受けやすい木を識別するために、ここで説明されたプロトコルの変更やアプリケーションからの資金調達を認める。また、当社のアメリカブナ抵抗スクリーニングプログラムの彼らの継続的なパートナーシップとサポートのため、オハイオ州カートランド、ホールデン樹木園に感謝しています。

1植物材料：熟フィールド木、鉢植え苗、または鉢植え移植片<ol><li>フィールドテストでは、可能な抵抗のためのテストのためのスケールの侵入や病気の兆候を示さない、成熟した健康的なアメリカのブナの木を選択します。目に見えて影響を受けやすい木はまた、対照（ 図1）として使用されるように識別される必要があろう。 </li><li>鉢植えの苗や移植片をテストするための、収集·コッホ＆キャリー、2004またはキャリーら 、2013に記載されたグラフト穂に記載されているようにbeechnuts発芽。 </li><li> 47グラムの微量栄養素​​、477グラム徐放性肥料15N-3.9P-9.9K、700グラムの粗パーライトと2.8立方あたり75グラムの硫酸アルミニウムを改正ポッティング土壌ミックスの苗や移植片を育てる。フィートバッグ。生育期の後半で必要に応じて、200 ppmの窒素において、可溶性17N-1.3P-14.1K毎週植物を肥やす。 </li><li>生育期間中は、日陰​​の家の中で植物を保つ。植物は前にそれらを移動する秋に休眠外に行くことを許可する制御された温度貯蔵施設（〜4℃）に11月から4月を通して。 </li></ol>ブナスケール卵の2。コレクション<ol><li> BBDが出没するスタンドでは、八月中旬まで月中旬から通常豊富な卵の存在を確認するために手虫眼鏡で（簡単に「白い」外観、 図1Aで識別される）に大きくはびこっ木を検査します。 </li><li>プラスチック密封可能な1ガロンの収集袋（ 図1B）に、ゆっくりと大人のカイガラムシ、卵やその他の破片の白いワックス状の塊を磨くために絵筆を使用しています。少なくとも12メートル離れて三つの異なる木の最小値から収集します。 </li><li>必要に応じて、4℃で2週間まで密封された収集袋に卵を保管乾燥から卵を防ぐために、バッグの内側に湿らせたポリエチレンフォームのテープの小片（2.5cm角）。 </li><li>大人（0.60ミリメートル）とdebriからスケールの卵（0.15×0.25ミリメートル）を分離するS、2 &#39;塩ビ管の短い部分と250ミクロンのナイロンメッシュの正方形の一枚（ 図2）をサポートするカップリングを使用してふるいを構築する。 </li><li>ふるい上に収集袋から大人、ワックス、卵、破片の混合物を空にして静かに以下のガラスシャーレにメッシュを通過するように卵を奨励するために、小さなペイントブラシを使用しています。彼らはそれが困難に卵を移動すること、より多くの静電気を保持するため、プラスチック製ペトリ皿は避けるべきである。卵の前と後の篩い分けを図3に示す。 </li><li>精製された卵は、少なくとも1週間、4℃でペトリ皿に格納することができる。乾燥から卵を防ぐために、蓋に泡の湿った部分をテープで固定し、パラフィルムで密封する。 </li></ol> 3。卵生存率アッセイ<ol><li>卵の生存率を評価するために、ガラスを60mmペトリ皿（ 図4Aの底部の周囲にワセリンの薄いリングを適用するために10ccのシリンジを使用し</strongの&gt;）。 </li><li> 、リングの中心に、約100の卵を移すシャーレにふたを置いて、パラフィルムで密封する。卵は事前のアッセイ開始まで4℃で保存した場合に密封されたペトリ皿で​​2週間、3週間、室温で邪魔されずに残ることができます。 </li><li>孵化し幼虫は、石油ゼリー中のスタックになり、簡単にカウントすることができ、空の卵は簡単に自分の色や光沢（ 図4B）で孵化していない卵から区別されます。空の卵を加え、残りのフル卵の合計によって幼虫の数を割ることによって実行可能性を計算する。良好な生存率は75％〜90％の孵化した卵の範囲であるべきである。 </li></ol>分野における大規模な熟ぶなの4。スケール抵抗上映<ol><li>定量試験のため、解剖顕微鏡を使用して、小さなへらを使って500の卵を数える優しくポリエチレンフォームのpredampened、オープンセル10×15×1.3センチメートルの長方形の中心を横断して振りかける。へ泡を減衰させる、できるだけ多くの水を絞り出す、それを濡らす。定性試験では、500卵カウントアウトすることができ、小さなガラスバイアルに、約500卵の追加のバッチを測定するために使用することができる描か「充填」の行に配置された。 </li><li>樹皮に対向する卵の側にテストツリー上にフォームパッドを配置します。ロープ、ひも、より糸、プラスチックコーティングされたハードワイヤーで所定の位置にパッドを保持する。プラスチックや金属系材料ではなく、より容易に野生動物により除去された天然繊維材料よりも使用する必要があります。 </li><li>アセテート系シリコーン接着剤に沿って蒸気透過性防水ハウスラップの上部とプレカットの側面プリント23 x 30 cm片と泡試験パッド上に置きます。防水シールを作成するために木にハウスラップの端を押してください。しばらく接着剤セット（ 図5）所定の位置に保持するために、木とハウスラップの周りにナイロンひもやプラスチックコーティングされたハードワイヤーを配置します。 </li><li> 2の最小値を置き好ましくは木の幹の両側の各テストツリー上のテスト·パッド、。各サイトで、対照として（明白な自然のスケールの侵入で）少なくとも2の影響を受けやすい木にテストパッドを配置。対照木にテストパッドを配置する前に、会社を使用して、任意の天然に存在するカイガラムシや卵を取り除くには、ブラシを毛先。 注：卵フォームパッドが蔓延レベルが低い地域では特に役立ちますスケールの卵を、飼育する目的のために木にも配置することができます。 </li></ol>鉢植えの苗や移植片の5。スケール抵抗上映<ol><li>テストのために、それらの上に配置された少なくとも2つの別々のテストパッドを持っているのに十分な高、1センチメートル（5センチメートル土壌線の上キャリパー）の最小径と鉢植えの木を選択します。必要なときにテストパッド用のスペースを確保するために、小さな側枝を剪定。 </li><li> 150卵を数え、プレカットの上にそれらを散乱させる解剖顕微鏡を使用し、2.5×7.6 X 1.3センチメートル気泡ポリエチを湿らレンのフォームパッド。 </li><li>プラスチック被覆ワイヤーを使用して、樹皮に対する卵の側に苗ためにフォームパッドを貼付。ちょうど泡の上に苗の周りのハウスラップの小さな正方形をラップした（ 図6Aを参照）アセテート系シリコーンでそれを封印。 </li><li>コントロールとして苗家族や移植片の影響を受けやすい知ら含まれています。 </li></ol> 6。データ収集注：約52から57週の試験木にフォームパッドと卵を置いた後、データを収集することができる。なお、これは大人が再生する能力を決定することができるように、卵を産み始めた後まで行われないことが重要である。いくつかの耐性の木にそれは成人の数が少ないが、全く再生が発生していないとの確立を参照することも珍しくありません。 <ol><li>慎重にフォームパッドを取り外し、手レンズや拡大鏡（10倍）を使用して、樹皮上に確立大人のカイガラムシの数を数える。 </li><li>フォームパッドが除去されると、それはuのではないいくつかの大人と泡と木の外に引っ張られる最も卵のクラスタ用ncommonます（ 図7を参照）。解剖顕微鏡を使用して、フォームパッドに付着し残っている卵のクラスタと大人を数える。 </li></ol>

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</ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

このアッセイの成功のために必要な重要なステップは、卵と試験された各サイトで、鉢植えの材料との影響を受けやすいコントロールの使用上の実行可能性テストを実行することを含む。これは、木または実生ごとに複数のテスト用パッドを使用することも重要である。我々は、フィールド内の鉢植えの植物に、より制御された試験の両方において、頻繁なエラーの源は、パッド不良であることができることを見出した。例えば、フィールドにおいても、過剰な水分を防ぐために、ハウスラップと試験パッドをカバーする我々の修正を加えて、ステムを流れ落ちる水は、木の一方の側に有利に働くことができ、試験パッドの損失をもたらす。 正確な結果を得るためには、パッドの下のツリー面とフォームパッド自体の両方を獲得することが重要である。成虫および卵クラスターに加えて、フォームI幼虫と呼ばれるスケールのライフサイクルにおける唯一の移動相は、また観察することができる。最終的にはこれらのモバイルニンフフォームIIニンフになってきて、木の樹皮に彼らの摂食スタイを挿入します。大きな大人がより球状の形状を...

ブナ樹皮病（BBD）が1890年代後半3ノバスコシア州のカナダの州では、侵襲的なブナカイガラムシの導入以来、北米でクリプトコッカスfagisugaをアメリカのブナに有害な影響を与えました。ブナカイガラムシが真菌（NeonectriaのditissimaまたはNeonectriaのfaginata）のNeonectria種の 1による感染のために玄関を提供する小さな亀裂を作成樹皮にその送りスタイを挿入すると、この昆虫病錯体が開始されます。真菌菌糸が成長するにつれ、組織の大部分は、最終的には完全に木を環状剥皮、死ぬかもしれない。病気による被害は強風4でスナップにそれが発生しやすいこと、木を弱める。疾患の最初の波の死亡率レベルは50％5と高いことが報告されている。潰瘍は、木材製品としてツリーの値を小さく形成するように、生存している木はしばしばひどく変形される。0;このような木は、確立スタンド6の経済的、生態学的価値を減らすことから、他のより望ましい種を防ぐ「ブナの藪」の形成につながるルート発芽する傾向を持っている。ブナ樹皮病はアメリカのブナの絶滅につながる可能性はありませんが、それは野生生物の7,8のために食料や生息地の減少につながる物と健康をスタンド変える。 何年も前からBBDの影響を受け、スタンドでは、疾患の症状がないままの木が​​報告されている。人工接種試験は、これらの木がカイガラムシ2に耐性であることが示されている。スケールの侵入がないと、Neonectria感染の機会がほとんどないが、真菌の影響を最小限に抑えることがある。前のスケールの侵入がない場合のNeonectriaの感染によるアメリカのブナにおける大規模な死亡率は決してありません報告されたので、BBDへの抵抗におけるブナのスケール昆虫結果に対する抵抗されて。 BBDの管理に関する最近の研究では、識別、繁殖、飼育、およびブナカイガラムシに対する抵抗性とアメリカのブナの木の保持に焦点を当てている。遺伝学的研究は、カイガラムシに対する耐性が遺伝性であり、耐木の慎重な選択および繁殖は、単一世代9の有意な改善をもたらすことができることを示している。この知見は、復元作付け10,11のための遺伝的に多様なBBD耐性種子の供給源を提供するために、耐性のアメリカのブナの地域採種園を確立するために、米国の州および国家森林管理者の努力に燃料を供給しています。研究はまた影響を受けやすい樹木や耐性樹木の維持を除去することにより、スタンドの遺伝学の育林操作はスタンド改良9,12をもたらすことができることを示した。 &lt;/ pの&gt; 木の改善活動を通して、または造林処方を行うを通じてBBDの管理はのために選択し、ブナのスケール性と感受性の木々の間を区別する能力を必要とします。ここで紹介する方法は、まず、人工的にブナのスケールの卵1を苗に接種するためにデイブヒューストンによって導入方法から適応されている。この方法は、耐性に関連する量的形質遺伝子座（QTL）を同定するために、または遺伝的研究に耐性と感受性の鉢植え苗木又はグラフト化ラミートを区別するためのスクリーニングツールとして使用することができる。あるいは、採種園の開発、またはフィールドでの保持のために耐性ツリーを識別するためにフィールド内の成木をスクリーニングするために使用することができる。感受性の樹木を同定し、疾患の影響を最小限にするために除去することができる。

<table><tbody><tr><td>ナイロンメッシュシート、250ミクロン</td><td><a href="http://www.amazonsupply.com/dp/B000FMWH1S/ref=sp_dp_g2c_asin" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> 小部品</a></td><td>CMN-0250-D</td><td>メッシュ目開き：250ミクロン角、開口率：34%、線径：180ミクロン、幅：24&amp;rdquo;、長さ：12&amp;rdquo;, パッケージ数量：1</td></tr><tr><td>Tyvek ホームラップ</td><td><a href="http://www.lowes.com/pd_14582-2020-D13499991_0__" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> DuPont</a></td><td>D1349991</td><td>9フィート x 150フィートのロール。半分にカットして提供することを依頼可能です。</td></tr><tr><td>ポリエチレンフォーム &amp;frac12;&amp;rdquo; 厚い&amp;nbsp;</td><td><a href="http://www.colsfoam.com/apcfp/products.htm" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Columbus Foam Products</a></td><td></td><td>2フィート x 50フィート ロール</td></tr><tr><td>MetroMix 510</td><td><a href="http://sungro.com/products_displayProduct.php?product_id=118&amp;amp;brand_id=17" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sun Gro Horticulture</a></td><td></td><td>2.8立方フィートのバーク、ピートモス、バーミキュライト、バーク灰、スターター用栄養剤（石膏含有）、緩効性窒素および&amp;nbsp;苦灰石灰岩</td></tr><tr><td>Osmocote Plus 15-9-12</td><td><a href="http://everris.us.com/product/15-9-12" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Everris</a></td><td>E903206</td><td>標準的な3〜4か月のリリースサイクル</td></tr><tr><td>サイトセーバー 10倍</td><td><a href="http://www.amleo.com/Bausch---Lomb-Illuminating-Codington-Magnifier-10x/p/CM10/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Bausch &amp;amp; Lomb</a></td><td>813434</td><td>10倍拡大照明付きコディントンレンズ</td></tr><tr><td>Nikon Mini フィールド実体顕微鏡</td><td><a href="http://www.opticsplanet.com/nikon-fieldmicroscope.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Nikon</a></td><td>7314</td><td>20倍率</td></tr><tr><td>シリコーン II クリア</td><td><a href="http://www.midlandhardware.com/159538.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> 遺伝子工学</a></td><td>159538</td><td>2.9 oz クリアウィンドウ &amp;amp; ドア用コーキング材</td></tr></tbody></table>

ブナスケール昆虫への抵抗のためのアメリカのブナを（画面ための技術<em&gt;クリプトコッカスfagisuga</em&gt;リンド。）

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect (Cryptococcus fagisuga Lind.)

大幅に弱体化して変形している遺族の木を残しブナ樹皮病（BBD）初期の死亡率の高レベルの結果、。この疾患は、真菌のNeonectria種のいずれによる感染のエントリポイントを作成侵襲ブナカイガラムシ、 クリプトコッカスfagisugaの活動を供給することによって開始される。スケールの侵入がなければ、真菌感染症のために少し機会がある。人工的に重くBBD影響スタンドで健全な木をはびこるようにスケールの卵を使用すると、これらの木は病気の複雑な1のスケール昆虫の部分に耐性であったことを明らかにした。ここでは、フィールド内の小さな鉢植えの苗と移植片におけるスケール耐性樹木をスクリーニングするために使用することができヒューストン2による人工侵入技術をベースに我々が開発したプロトコルを提示する。スケール耐性樹木の同定はツリーをBBDの管理の重要な要素である改善プログラムや育林操作。

図6は、感受性の異なる程度を示す抵抗性苗（C）および2の影響を受けやすい苗（D、E）を示しています。人工侵入テストを設定した後の影響を受けやすく、成熟した木は57週間どのように見えるかの例を図5（b）に示します。発泡体が離れて木から剥離するときにツリーとフォームパッドの両方からデータを収集することが必須である理由である図7に示すように、カイガラムシとその卵のクラスタは発泡体に付着したままにするためには、珍しいことではない。 図8は、2つの異なるスタンド、ペンシルベニア州アレゲニー国有林（ANF）に1つ、ルディングトン州立公園（LSP）の他、ミシガン州で人工的に出没する木に100の卵あたり確立成虫の平均数を示している。両方のスタンドは、BBD、各スタンドでは、健康的な木のクラスタに寄生させたsが識別され（LSP耐性及び耐性ANF）およびクローンDNA分析（データは示さず）に基づい...

ブナ樹皮病は、樹皮における真菌のエントリポイントを作成ブナスケール昆虫の活動を供給することによって開始される。カイガラムシに耐性のある木々はまた、疾患抵抗性である。ここで我々はブナの規模耐性について、個々のブナの木をスクリーニングするために開発したプロトコルを提示する。

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The ...

この手順の全体的な目的は、アメリカブナの個体について、ビーチバーク病（beach bark disease）に対して耐性があるものと感受性があるものを区別することです。まず、アメリカブナから成虫のブナカイガラムシとその卵を直接採取します。次に、成虫やその他の不純物を除去することで、均一な卵のバッチを得ます。次に、卵を数えてフォームパッド上に並べ、試験木の樹皮に固定します。同時に、卵の生存率を確認するための試験を実施します。約1年後、試験用パッドを回収し、成虫の数と卵塊の数を計測します。最終的に、このブナカイガラムシをブナに人工的に寄生させる手法は、ブナ樹皮病に対して耐性を持つ個体と感受性を持つ個体を特定するために用いられます。Dave Houstonが以前に開発した人工寄生法と比較した本手法の利点は、対照群の樹木と卵の生存率検定を導入している点にあり、遺伝学的研究に十分な定量性と再現性を備えていることです。この方法は、どの樹木が本疾患に耐性を持ち、伐採時に残すべきかを判断することで、ブナ樹皮病の管理上の意思決定に寄与します。また、ブナカイガラムシが激しく寄生しているアメリカブナの個体の中から、種子園に組み込むのに最適な候補を選定する際にも役立ちます。昆虫は、白い粉を吹いたような外観で容易に識別できます。ハンドルーペを使用して、通常7月中旬から8月中旬にかけて大量に発生する卵の存在を確認してください。寄生している樹木の幹に、プラスチック製の密封可能な1ガロンの収集袋をテープで固定し、絵筆を使って、成虫のカイガラムシの白い蝋状の塊、卵、およびその他の破片を袋の中に優しく掃き落としてください。少なくとも12メートル以上離れた3本以上の異なる樹木から卵を採取します。2.5センチメートルの正方形に切ったポリエチレンフォームを湿らせ、卵の乾燥を防ぐために袋の内側にテープで固定します。その後、袋を密封します。卵の輸送時に保護クッションとなるよう、バッグの中に息を吹き込みます。卵は密封した採取バッグに入れ、4°Cで最大2週間まで保存可能です。鱗片状の卵を成体や不純物から分離させるため、挟み込む形で篩（ふるい）を作成します。2インチのPVCパイプの短い断片とカップリングの間に、250 µmのナイロンメッシュを正方形に切り出したものを挟み込みます。ふるいの下にガラス製ペトリ皿を置き、採取袋から成虫、蝋卵、およびデブリの混合物をふるいの上に移します。次に、小さな絵筆を用いて、卵を優しくなぞるようにしてメッシュから下のガラス製ペトリ皿へと通過させます。卵の乾燥を防ぐため、湿らせたフォームの断片を蓋にテープで固定し、密閉します。精製された卵は、ペトリ皿に入れて4 °Cで少なくとも1週間保存することが可能です。生存可能なカイガラムシを得るには、まず産卵期の成虫を識別し、シッピング工程を用いて卵から分離させる必要があります。最後に、生存率確認用卵を用いて、これらの卵の生存率を確認できるようにする必要があります。卵の生存率を評価するために、10 ccシリンジを使用して、60 mmガラスペトリ皿の底面の円周に沿って、ワセリンで細いリング状の縁を作ります。スパチュラで約100個の卵をすくい取り、リングの中心に転移させます。次に、ペトリ皿に蓋をして、パラフィルムで密封します。密封したペトリ皿を室温で、卵を4 °Cで保存していた場合は3週間、それ以外の場合は2週間、そのまま静置します。2〜3週間後、解剖顕微鏡を用いて、孵化した若虫の数を数えます。若虫は多くの場合、ワセリンに付着しています。次に、不透明で黄色い未孵化卵の数と、色がより淡く半透明の孵化済みの卵の数を数えます。孵化した幼虫の数を、空の卵の数と未孵化卵の数の合計で割ることで、生存率を算出します。良好な生存率は、孵化率が75から90%の間であることです。ビーチスケール（beach scale）に対する耐性の範囲野外試験。定性的な試験のみで十分な場合は、ポータブル解剖顕微鏡を用いて500個の卵を数え上げることで、定量的な昆虫試験を行うことができます。500個の卵を、約500個ずつの追加バッチを測定するために使用できる充填線付きの小型バイアルに入れてください。次に、オープンセルポリエチレンフォームの長方形の断片を湿らせ、可能な限り水分を絞り出します。小さな金属製ラボラトリースパチュラを使用し、500個の卵を湿らせたフォームの中央に静かに散布します。これで、人工接種に使用するための卵の準備が完了しました。カイガラムシの寄生や虫害、病気の兆候がない、成熟した健全なアメリカビーチの樹木を選定します。試験樹にナイロンロープを巻き付け、フォームパッドの卵格面を樹皮に接するように配置します。パッドの上にロープを滑り込ませて固定します。木の反対側に、2枚目のパッドをロープの下に滑り込ませます。各樹木には最低2枚のパッドを配置してください。ロープ、紐、または麻紐は野生動物に回収されやすいため、プラスチック製または金属製の素材を使用してください。事前カット済み。23 by 30 cmの蒸気透過性かつ防水性のハウスラップを用意し、上端と側面にアセテート系シリコーン接着剤を塗布します。次に、ハウスラップをフォームテストパッドの上に配置し、端を樹木に押し付けて防水シールを作成します。接着剤が硬化するまでラップを固定するため、ナイロン紐またはプラスチック被覆のハードウェアワイヤーを樹木とハウスラップの周囲に巻き付けます。対照群として使用するために、目に見えて感受性の高い樹木を選択してください。硬い毛のブラシを使用して、テストパッドを設置する領域から天然に発生しているカイガラムシや卵を除去します。次に、各試験区の少なくとも2本の感受性樹にテストパッドを設置します。まず、強化培養土ミックスを用いて苗木または接ぎ木を育成させます。鉢植えの苗または接ぎ木の試験は、生育期の後半に遮光温室で行います。生育期間中は必要に応じて毎週植物に施肥し、遮光温室内で管理してください。秋には屋外で休眠させ、その後4 °Cの貯蔵庫に移します。1〜2年後、11月から4月の間に、主幹が十分に成長し、地表から5 cm上の位置で calipers で測定した直径が1 cm以上であり、少なくとも2つの独立したテストパッドを設置できる高さになった時点で、試験準備が整ったことになります。テストパッドを設置するためのスペースを確保するため、必要に応じて小さな側枝を剪定してください。解剖顕微鏡を用いて卵を150個数え、あらかじめカットして湿らせた開細胞ポリエチレンフォームパッドの上に散布します。プラスチックコーティングされたワイヤーを使用して、卵側を樹皮に接するように、フォームパッドを苗木に固定します。フォームのすぐ上の苗木部分に、ハウスラップの小さな正方形を巻き付け、酢酸ベースのシリコンで密封します。対照区として、卵を含むフォームパッドを、感受性が判明している苗木の家系または接ぎ木に取り付けます。約1年後。樹木に設置したフォームパッドを、苗木または成木から慎重に取り除きます。次に、ハンドレンズまたは10倍の拡大鏡を用いて、樹皮に定着した成虫のカイガラムシの数をカウントします。フォームパッドを取り出す際、一部の成虫およびほとんどの卵塊がフォームと共に樹から剥がれることがよくあります。解剖顕微鏡下で、フォームパッドに付着している卵塊と成虫の数を数えてください。ここでは、抵抗性苗が示されています。黒線はフォームパッドの範囲を示しています。樹皮への食害は見られません。ここに示されている2つの感受性苗は、それぞれ異なる程度の感受性を示しています。人工接種から57週間後の感受性のある成熟した樹木がここに示されています。樹木は、アレゲニー国立森林公園（ペンシルベニア州）およびルートン州立公園（ミシガン州）において、ブナカイガラムシの卵を人工接種しました。このグラフは、耐性樹と感受性コントロール樹を比較したものです。各群で試験した樹木の数は括弧内に記載されています。提供した卵100個あたりの成虫数は、群内のすべての樹木で平均化しました。感受性樹木に定着した成虫数には大きなばらつきがありますが、感受性樹木と抵抗性樹木の間には明確な差が認められます。この手法を行う際は、ハウスラップが樹木にしっかりと密着して封じられていることを確認することが重要です。これにより、フォームパッドへの過剰な水分の蓄積を防ぎ、アッセイの失敗を回避できます。このビデオを視聴することで、カイガラムシの卵を採取・精製し、ブナの木がカイガラムシに対して耐性を持つか、あるいは感受性があるかを判定するための試験を構築できるようになるはずです。このカイガラムシは、実際にビーチバーク病を引き起こす菌類と共に、原因複合体の一部を構成しています。

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