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DOI: 10.3791/51526-v
Steven J. Deimling1, Rami R. Halabi2,3, Stephanie A. Grover4, Jean H. Wang2,5, Thomas A. Drysdale2,4,5
1Developmental and Stem Cell Biology,Hospital for Sick Children, 2Children's Health Research Institute,University of Western Ontario, 3Department of Physiology and Pharmacology,University of Western Ontario, 4Neurosciences and Mental Health,Hospital for Sick Children, 5Department of Paediatrics,University of Western Ontario
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
The Xenopus laevis embryo is a valuable model for studying early development due to its large size and ease of manipulation. This article provides a simplified protocol for whole mount in situ hybridization to identify specific organs within the embryo.
Xenopus laevisの胚は、その大きなサイズと操作の容易さから、初期発生の研究において非常に有用であり続けています。 このモデルシステムにおける特定の臓器の同定に使用できる、全マウントin situハイブリダイゼーションプロトコルの簡略化されたプロトコルが提供されています。
次の実験の全体的な目標は、特定の遺伝子が無傷の胚のどこに発現しているかを示すことです。これは、第2のステップとして、胚内の所定の位置に局在するRNAを固定することによって達成されます。目的の遺伝子に特異的なアンチセンスRNAプローブを胚内の標的RNAにハイブリダイズします。
このプローブにはエピトープ(通常はジゴゲニン)が含まれており、その後検出できます。次に、アルカリホスファターゼに結合した抗体をRNAプローブ上のエピトープにハイブリダイズし、続いて比色染色を使用します。RNAが胚内のどこに局在しているかを視覚化するために、胚の解剖学的構造の色反応と知識に基づいて、目的の遺伝子が発現する場所を正確に示す結果が得られます。
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