Name: プロテオームとトランスクリプトーム解析のための蜘蛛から毒の抽出と毒液腺Microdissections (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 25 s
Description: 学ぶ蜘蛛からの毒液抽出と毒腺マイクロディセクションの手法。電気刺激による毒液採取と質量分析を用いたプロテオーム・トランスクリプトーム解析の基礎を確立し、神経科学と生物学研究に貢献します。

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チャック·クリステンセン、グレタBinford、アレックス·K·ランカスター、コンラートZinsmaier、そしてメイズイマド：私は、このプロトコルの開発における彼らの支援のために以下の個人に感謝します。質量分析およびプロテオミクスデータは、NIH / NCI助成金CA023074はAZCCへとアリゾナ大学のBIO5研究所が、SWEHSCにNIEHSグラントES06694でサポートされているアリゾナ州プロテオミクス·コンソーシアムに買収された。この仕事のための資金は、ジェシカE.服装への助成金1F32GM83661-01と1R15GM097714-01から国立衛生研究所（ゼネラル·国立医学研究所）から提供された。

電気刺激装置の作製<ol><li>コンセントと外部信号入力​​に外部フット·ペダルを接続する電気刺激装置の電源コードを接続します。 注意：電気配線が適切に絶縁されなければならず、電流を供給露出した金属が触れてはいけません。保護のためにラテックスまたはニトリル手袋を着用してください。電源コードを取り付け、ワイヤーを取り付ける際に電気刺激電源スイッチがOFFの位置にあるべきである。 </li><li> （極性スイッチが通常モードにあるとき）、電気刺激の赤い出力端子に正極を接続し、黒の出力端子に負極を接続する。注：各電極線は、ワニ口クリップで終端する必要があります。 </li><li>次の推奨初期設定に刺激を設定します。電圧= 7 V、毎秒周波数= 1パルス、ディレイ= 0ミリ秒、持続時間= 200ミリ、ツインパルスは=定期的な切り替え、モードスイッチ=オフ。 </li><li> voltmeするワニ口クリップを取り付けることにより、電極のテスト出力TER正と負のテストリード。刺激の電源スイッチをオンにして、フットペダルと電流を供給。 </li></ol>固定化鉗子及びその他の材料の作製<ol><li>液体プラスチックコーティングにフェザー級鉗子の1の突起を浸し、コーティングを乾燥させるために4時間待つ。しっかりと結び目でエンドを結ぶことにより、綿の縫製糸の単層、およびセキュアな糸で、対向する突起の先端部の15ミリメートルを包む。 注：スレッドは、プラスチックコーティング、現在遅延させるために絶縁を提供するが、導電性を促進適用食塩水を吸収するために使用される。 </li><li>鋭いハサミで鈍い皮下注射針の先端をカットし、サンドペーパーで口を滑らかに。チューブを介して真空廃棄物トラップ（ 例えば 、真空フィルターフラスコ）に針を取り付けます。 注：ニードルは、水を離れて吸引し、逆流、および刺激電極によって作成された回路を完成するのに役立つであろう。針開口μstが目詰まりすることなく、真空ソリューションにまだ十分に大きな、クモに害を与えない程度に小さいこと（ 例えば 、25のGゲージ×1 1/2物質一覧を参照してください）。 </li><li>底の上部とスレッドコーティングされた突起上の鉗子のプラスチックコーティングされた突起を持つビューの解剖顕微鏡の視野の下で、磁気ベースまたは固定スタンド装置に固定ビニールで覆われた二股のクランプを使ってしっかりと閉じた位置に水平に位置フェザー級鉗子。 注：二股クランプはクランプホルダによる磁気ベースに静止位置に維持されている（材料リストを参照してください）​​。ゴムバンドは、しっかりと一度導入クモの周りに閉じた位置にフェザー級鉗子を保つために追加の圧力を加えるために、次のクランプホルダーに、フェザー級鉗子の突起の周りに固定してもよい。 </li><li>スレッドの上流に鉗子「ボトムのプロングに正極ワニ口クリップを取り付け、金属製の真空針を鈍ら負ワニ口クリップを取り付けます。 </li&gt; <li>スレッドとワニ口クリップの間に鉗子のプロングに正のリードを配置し、鈍真空針に負のリードを配置することによって、電圧計を使用したテスト回路の電流。十分な電流が検出されたことを確認し、十分な電流が検出された場合に、リードを除去するためのプレスフットペダル。 </li><li>毒のコレクションのためのいくつかのマイクロキャピラリーチューブを準備します。ブンゼンバーナーの炎の上に水平に鉗子開催エンドを置く、手袋をはめた手で、そして滅菌金属鉗子でもう一方の端に一端で、単一のマイクロキャピラリーチューブを開催しています。静止位置にもう一方の端を保持しながら、細長い先端部を作成するために離れて炎からの金属鉗子でマイクロキャピラリーを引っ張る。 注：マイクロキャピラリーが簡単に破断することができますように、保護メガネを着用してください。 </li><li>シャーレに取り付けパテストリップ上に準備されたマイクロキャピラリーを休ま。マイクロキャピラリーは、解剖顕微鏡下で終了し、滅菌した金属鉗子で引っ張っ端にある小さな、ベベル開口部を作成調べます。 </li><li>ラ滅菌0.5ミリリットルチューブのベル可変数。滅菌チューブ（ 例えば 、オートクレーブの脱イオン水5μl）を滅菌脱イオン水を加える。氷の上を閉じ、チューブと場所チューブ。 </li><li>ビーカーに生理食塩液を調製し、オートクレーブ処理水と第二のビーカーを埋める。 </li></ol>鉗子でスパイダー3.固定化<ol><li>長い金属鉗子を用いてCO 2チャンバー内に（材料リストを参照してください）バイアルを収集し、閉じたプラスチックからのCO 2のタンクと転送クモをオンにします。 注：黒い未亡人のスパイダーは、危険な毒を持っています。常にこのプロトコル中に手袋を着用してください。 </li><li> 5〜10分間、または麻酔し、もはや静かに長い鉗子で突いたときに移動するまで、チャンバ内のクモを保つ。食塩水で鉗子にスレッドを湿らせるトラ​​ンスファーピペットを使用してください。 注：黒い未亡人のためのCO 2麻酔パラメータのガイドラインについては、スペイン広場とムーア19を参照してください。 </li><li> CO 2から麻酔をかけたクモを取得鈍い解剖鉗子や手袋をはめた手を使用して、その前方の足でそれを拾うことによってチャンバー。鉗子装置はフェザー級に麻酔をかけクモを移動します。独立したクローズドフェザー級鉗子の突起と突起の間に蜘蛛の頭胸部を配置し、突起がクモを確実にするために、シャット閉じることができるように所定の位置にしっかりと保持されているが押しつぶされていません。正極は一番下の突起に付着したままで、クモがスレッドコーティングされたプロング上に載っている、（クモ解剖するためのガイドのためのFoelix 20を参照）を下方甲背側に配置され、甲羅の腹側がプラスチックコーティングに直面していることを確認してください。クモを取り扱う際は迅速に作業。 </li><li>蜘蛛の鋏角と牙がはっきりと見えるようになるまでの顕微鏡倍率、フォーカス、および光源を解剖調整します。 </li></ol> 4.ヴェノムコレクション<ol><li>シリンジnをひっくり返した第二鈍を用いて水溶液で真空及びスプレースパイダー鋏角をオンにするeedle。不純物を除去するために真空針で水を離れて吸引する。 </li><li>クモ演壇に付着した負極を備えた真空針をタッチし、フットペダル一回以上のパルスを提供します。必要であれば真空は離れて逆流。 注：クモの演壇は鋏角とendites（詳細なクモの解剖学のためのFoelix 20を参照）との間に背側表面に鋏角する口の後部の内側にある。注：各パルスでは、クモの足契約および毒液が牙から現れる明確な液滴として表示されます。 </li><li>毒を集める（溶液がキャピラリーに吸い込まれる）水または緩衝液で0.5ミリリットルチューブにマイクロキャピラリー先端と転送キャピラリー先端で滴。 注：血リンパ汚染や死につながる可能性が毛細血管でクモを穿刺避ける。また、紡糸口金からシルクや接着剤で毛細血管の汚染を避ける。 </li><li>チューブ（収集先端と反対側の端部で）マイクロキャピラリーへのアダプタおよびdで転送シリンジを取り付けバックチューブにispense毒ソリューション。チューブを氷上に置く。 注：近くの鋭利物容器に廃棄物の毛細血管廃棄してください。 </li><li>クモに近いそのキャップと一緒に、オープンなプラスチックの収集バイアルを置きます。慎重に鈍鉗子かつ迅速近いキャップでバイアルを集めるにクモをスライド、もう一方の手で片手で保持鈍い解剖用ピンセットでクモの脚と慎重に開いているフェザー級鉗子プロングを把握する。終了したら、-80℃の冷凍庫内の次のクモや店舗毒-含むチューブに進みます。 注：バックバイアルに鉗子からクモを移動するときは注意して運動を続ける。収集バイアルとキャップは、その迅速な転送のためのスパイダーに近くなっていることを確認しますと手袋を着用してください。 </li></ol> 5.毒腺解剖<ol><li>毒採取後2対三日間、CO 2チャンバー内でクモを麻酔（ステップ3.1を参照）。解剖顕微鏡の隣に液体窒素キャリアと場所を記入してください。 注：WH液体窒素での作業途中で、目の保護と極低温の手袋を使用しています。 </li><li>クリーンな解剖エリアとRNaseとDNAの混入を排除ソリューションで解剖鉗子。バッファー（ 例えば 、1X生理食塩水クエン酸ナトリウム（SSC）バッファ）解剖と解剖顕微鏡下に置かれた小さなペトリ皿を埋める。 </li><li>皿のペトリかつ迅速腹部から頭胸部を分離するために鉗子を使用するようにCO 2室からクモを転送します。 </li><li>ピンセットで解剖顕微鏡下で頭胸部を持ち、視野内に鋏角を配置。鋏角の横方向の側面を甲羅に入社キューティクルをカットする鉗子の第二対の鋭い端を使用してください。横方向に鉗子の第二の対を使用して、鋏角を持ち、静か毒腺が引き出されるまで、前後に引っ張る。 </li><li>鋏角とは別の腺cyrosafe 0.5ミリリットルチューブに転送（または残す必要に応じて、鋏角に取り付けられている）。クロを置く液体窒素中で編管。 注：各解剖はこれ以上15分以上を取る必要があります。 </li><li>仕上げまで追加のクモで解剖を繰り返します。 -80℃の冷凍庫内に液体窒素から移送管。 </li></ol>

<ol><li>Fry, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+toxicogenomic+multiverse%3A+convergent+recruitment+of+proteins+into+animal+venoms%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genom.+Hum.+G%22%5BJournal%5D)">The toxicogenomic multiverse: convergent recruitment of proteins into animal venoms.</a> Annu. Rev. Genom. Hum. G. 10, 483-511 (2009).</li>
<li>Escoubas, P., Quinton, L., Nicholson, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venomics%3A+unravelling+the+complexity+of+animal+venoms+with+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mass.+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Venomics: unravelling the complexity of animal venoms with mass spectrometry.</a> J. Mass. Spectrom. 43 (3), 279-295 (2008).</li>
<li>Twede, V. D., Miljanich, G., Olivera, B. M., Bulaj, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+and+cardioprotective+conopeptides%3A+An+emerging+class+of+drug+leads%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Drug+Disc%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective and cardioprotective conopeptides: An emerging class of drug leads.</a> Curr. Opin. Drug Disc. 12 (2), 231-239 (2009).</li>
<li>Casewell, N. R., Wüster, W., Vonk, F. J., Harrison, R. A., Fry, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+cocktails%3A+the+evolutionary+novelty+of+venoms%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Ecol.+Evol%22%5BJournal%5D)">Complex cocktails: the evolutionary novelty of venoms.</a> Trends Ecol. Evol. 28 (4), 219-229 (2013).</li>
<li>Vetter, R. S., Isbister, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medical+aspects+of+spider+bites%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Medical aspects of spider bites.</a> Annu. Rev. Entomol. 53, 409-429 (2008).</li>
<li>Adams, M. E., Myers, R. A., Imperial, J. S., Olivera, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxityping+rat+brain+calcium+channels+with+omega-toxins+from+spider+and+cone+snail+venoms%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Toxityping rat brain calcium channels with omega-toxins from spider and cone snail venoms.</a> Biochemistry. 32 (47), 12566-12570 (1993).</li>
<li>Silva, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latrophilin+1+and+its+endogenous+ligand+Lasso%2FTeneurin-2+form+a+high-affinity+transsynaptic+receptor+pair+with+signaling+capabilities%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Latrophilin 1 and its endogenous ligand Lasso/Teneurin-2 form a high-affinity transsynaptic receptor pair with signaling capabilities.</a> PNAS. 108 (29), 12113-12118 (2011).</li>
<li>Williams, J. A., Day, M., Heavner, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ziconotide%3A+an+update+and+review%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Ziconotide: an update and review.</a> Expert Opin. Pharmacother. 9 (9), 1575-1583 (2008).</li>
<li>Veiseh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+paint%3A+a+chlorotoxin%3ACy5.5+bioconjugate+for+intraoperative+visualization+of+cancer+foci%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor paint: a chlorotoxin:Cy5.5 bioconjugate for intraoperative visualization of cancer foci.</a> Cancer Res. 67 (14), 6882-6888 (2007).</li>
<li>Binford, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+evolution%2C+functional+variation%2C+and+proposed+nomenclature+of+the+gene+family+that+includes+sphingomyelinase+D+in+sicariid+spider+venoms%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Evol%22%5BJournal%5D)">Molecular evolution, functional variation, and proposed nomenclature of the gene family that includes sphingomyelinase D in sicariid spider venoms.</a> Mol. Biol. Evol. 26 (3), 547-566 (2009).</li>
<li>Garb, J. E., Hayashi, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+evolution+of+%CE%B1-latrotoxin%2C+the+exceptionally+potent+vertebrate+neurotoxin+in+black+widow+spider+venom%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Evol%22%5BJournal%5D)">Molecular evolution of α-latrotoxin, the exceptionally potent vertebrate neurotoxin in black widow spider venom.</a> Mol. Biol. Evol. 30 (5), 999-1014 (2013).</li>
<li>Platnick, N. I. The World Spider Catalog., Version 14.0., DOI: 10.5531/db.iz.0001. , Available online at:
 
 <a target="_blank" href="http://research.amnh.org/entomology/spiders/catalog/index.html">http://research.amnh.org/entomology/spiders/catalog/index.html</a> (2013).</li>
<li>Sollod, B. L., Wilson, D., Zhaxybayeva, O., Gogarten, J. P., Drinkwater, R., King, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Were+arachnids+the+first+to+use+combinatorial+peptide+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Were arachnids the first to use combinatorial peptide libraries.</a> Peptides. 26 (1), 131-139 (2005).</li>
<li>King, G. F., Hardy, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spider-venom+peptides%3A+Structure%2C+pharmacology%2C+and+potential+for+control+of+insect+pests%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Spider-venom peptides: Structure, pharmacology, and potential for control of insect pests.</a> Annu. Rev. Entomol. 58 (1), 475-496 (2013).</li>
<li>Escoubas, P., Sollod, B., King, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venom+landscapes%3A+Mining+the+complexity+of+spider+venoms+via+a+combined+cDNA+and+mass+spectrometric+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%22%5BJournal%5D)">Venom landscapes: Mining the complexity of spider venoms via a combined cDNA and mass spectrometric approach.</a> Toxicon. 47 (6), 650-663 (2006).</li>
<li>Kristensen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comments+on+the+natural+expression+and+artificial+extraction+of+venom+gland+components+from+spiders%5BTitle%5D)+AND+%22Toxin+Rev%22%5BJournal%5D)">Comments on the natural expression and artificial extraction of venom gland components from spiders.</a> Toxin Rev. 24 (3-4), 257-270 (2005).</li>
<li>Ushkaryov, Y. A., Volynski, K. E., Ashton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multiple+actions+of+black+widow+spider+toxins+and+their+selective+use+in+neurosecretion+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%22%5BJournal%5D)">The multiple actions of black widow spider toxins and their selective use in neurosecretion studies.</a> Toxicon. 43 (5), 527-542 (2004).</li>
<li>Graudins, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+activity+of+a+novel+%CE%B1-latrotoxin+from+red-back+spider+venom%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Cloning and activity of a novel α-latrotoxin from red-back spider venom.</a> Biochem. Pharmacol. 83 (1), 170-183 (2012).</li>
<li>Spagna, J. C., Moore, A. M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safe+immobilization+by+CO2+of+Latrodectus+hesperus+%28Arachnida%3A+Theridiidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Pan-Pac.+Entomo.+l%22%5BJournal%5D)">Safe immobilization by CO2 of Latrodectus hesperus (Arachnida: Theridiidae).</a> Pan-Pac. Entomo. l. 74 (4), 210-213 (1998).</li>
<li>Foelix, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFoelix%2C+R+%22Biology+of+Spiders%22">Biology of Spiders</a>. , Oxford University Press. (2010).</li>
<li>Haney, R. A., Ayoub, N. A., Clarke, T. H., Hayashi, C. Y., Garb, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+expansion+of+the+black+widow+toxin+arsenal+uncovered+by+multi-tissue+transcriptomics+and+venom+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Dramatic expansion of the black widow toxin arsenal uncovered by multi-tissue transcriptomics and venom proteomics.</a> BMC Genomics. 15, 366(2014).</li>
<li>Pescatori, M., Bradbury, A., Bouet, F., Gargano, N., Mastrogiacomo, A., Grasso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cloning+of+a+cDNA+encoding+a+protein+%28latrodectin%29+which+co-purifies+with+the+%CE%B1-latrotoxin+from+the+black+widow+spider+Latrodectus+tredecimguttatus+%28Theridiidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Biochem%22%5BJournal%5D)">The cloning of a cDNA encoding a protein (latrodectin) which co-purifies with the α-latrotoxin from the black widow spider Latrodectus tredecimguttatus (Theridiidae).</a> Eur. J. Biochem. 230 (1), 322-328 (1995).</li>
<li>Grasso, A., Pescatori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+studies+of+latrodectin+from+the+venom+of+black+widow+spider+%28Latrodectus+tredecimguttatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural and functional studies of latrodectin from the venom of black widow spider (Latrodectus tredecimguttatus).</a> Adv. Exp. Med. Biol. 391, 237-243 (1996).</li>
<li>Szeto, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+funnel-web+spider+polypeptide+with+homology+to+mamba+intestinal+toxin+1+and+the+embryonic+head+inducer+Dickkopf-1%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%22%5BJournal%5D)">Isolation of a funnel-web spider polypeptide with homology to mamba intestinal toxin 1 and the embryonic head inducer Dickkopf-1.</a> Toxicon. 38, 429-442 (2000).</li>
<li>Binford, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+geographic+and+intersexual+chemical+variation+in+venoms+of+the+spider+Tegenaria+agrestis+%28Agelenidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%22%5BJournal%5D)">An analysis of geographic and intersexual chemical variation in venoms of the spider Tegenaria agrestis (Agelenidae).</a> Toxicon. 39, 955-968 (2001).</li>
<li>Alape-Girón, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Snake+venomics+of+the+lancehead+pitviper+Bothrops+asper%3A+geographic%2C+individual%2C+and+ontogenetic+variations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteome.+Res%22%5BJournal%5D)">Snake venomics of the lancehead pitviper Bothrops asper: geographic, individual, and ontogenetic variations.</a> J. Proteome. Res. 7 (8), 3556-3571 (2008).</li>
</ol>

著者は、開示することは何もなし競合する経済的利益を持っていません。

毒は、生理学的反応性タンパク質、ペプチドおよび薬物発見のための用途を有する他の分子の重要な供給源、ならびに携帯用や生態研究1-3の基本的な側面を表す。しかし、特に危険または小動物からの毒のコレクションは、困難な作業である。このプロトコルは、毒と毒腺が黒い未亡人のクモから採取することができる方法を示し、そして毒のMuDPIT分析と21腺毒液からクローン化cDNA由来タンパク質データベースとの組み合わせでこのアプローチの成功が確認される。このプロトコルは黒い未亡人や中規模のスパイダーに適していますが、他の毒収集技術は24、ピペットなどガラス内にそのような牙から毒の直接吸引などのより大きなmygalomorph（タランチュラ様）クモのために使用されてきた。この後者のアプローチを、しかし、aggressiされていない小さなサイズのスパイダーのためにうまく機能しませんVEの。 それはより多くのルーチン、一貫してより速くなるように、ここで説明毒収集プロトコルの一つの特に重要な側面は、収集プロセスの準備と最適化の初期段階である。プロトコルは当初、マスターするために挑戦されていますが、繰り返される裁判で、それが簡単かつ迅速になります。注意はまた、危険なクモの取り扱い、電流、細かい点ガラスマイクロキャピラリー、及び注射針の使用を含むすべての重要な位相で付勢されている。これは、マイクロキャピラリを整形する際にアイウェアとしてだけでなく、そのようなニトリル手袋、白衣、長ズボンと閉じた靴のような適切な個人用保護具を着用することが重要です。 毒コレクションに別の困難な局面は、収集された量は、Liとすることができるから、いずれかのクモ、特にゴケグモ属によって産生さ毒の少量であるせいぜい個体あたり1~2マイクロリットルにmited。そのようなタンパク質ゲルまたは機能的アッセイなどの下流のアプリケーションのために十分な毒を得ることは1チューブに複数の個人からの毒の組み合わせを必要とするかもしれない。このような場合には、毒は、同じ性別、個体発生段階の個体から組み合わされるべきであり、人口は、いくつかの毒25、26、intersexual発達および地理的変動の認識を与えられた。クモも少ない量の腺の最近の枯渇を反映している可能性が個体間で生成さ毒の量でかなりの変動を示すことができる。したがって、それは彼らの最後の給餌後に毒数日を収集することをお勧めかもしれません。少し毒が解除されると、過大な電流が血リンパや死と毒の汚染につながる、キューティクルが破裂する恐れがありクモに適用しないでください。 クモSiと毒のサンプルの汚染LKまたはヒト源も無菌またはクリーン機器の使用により回避されるべきである。これらの課題にもかかわらず、純粋な毒のコレクション、生きているクモを残して、（他の細胞タンパク質から毒成分を分離しないでください）​​とクモを殺す腺ホモジネートから毒液を得る方法に好適である。これはサンプルを迅速にタンパク質の分解を防ぐために凍結されることを保証するためにも重要である。 毒の抽出、それによって毒腺に毒遺伝子の発現を刺激する、後続の毒産生を促進する。クモ毒枯渇を生き残るためには、このプロトコルができるのでしたがって、それらの腺は毒遺伝子の発現は、例えば10,11をクローニングする転写物の遺伝子研究のために十分であると予想される時点で（クモを殺す）、数日後に解剖してもよい。いくつかの重要な注意事項も毒腺郭清に注意する必要があります。重点はラボを使用して配置する必要があり設備を導入ENTとRNAを分解RNaseを含まない試薬。したがって、RNaseおよびDNAの混入を排除するソリューションを鉗子やその他の非使い捨て機器や表面を拭くことをお勧めします。解離は、組織のRNAの完全性を確保するために可能な限り迅速かつ直接凍結として行われるべきである。彼らの頭胸部と腹部がすぐに分離した後、最終的に、解剖は、麻酔をかけスパイダーで実行する必要があります。 結論として、この記事では、クモ毒と毒腺を取得するために検証されたプロトコルを提供します。毒及び毒液腺およびトランスクリプトーム、プロテオームアプローチを用いて、それらのタンパク質およびペプチド成分の単離および特徴づけを可能にする。また、毒のサンプルは、その構成分子の生物医学的および薬理学的潜在性を決定する機能的アッセイの開始点を表すことができる。ほぼすべてのスパイダーは毒を生産し、幅広いダイバー個々の種によって合成毒成分をsityは毒分子の広大な多様性を示唆している13をまだ発見されています。したがって、このプロトコルは、クモの毒に存在する生物学的に活性な分子の豊富な供給源を調査するためのツールを提供します。

毒は主に捕食や防衛のために別の動物に注射し、動物の分泌物であり、また、生物医学関連性1-3との重要な生物学的なアプリケーションを持っている。唯一の特定の動物は毒を合成するが、それは進化して独立しているため、その生産は、無脊椎動物（ 例えば 、刺胞動物、コーンカタツムリ、サソリ、クモ）および脊椎動物（ 例えば 、ヘビ、いくつかの魚や哺乳類）全体の分類学的に広まっている複数回1,4 。毒の生化学的特徴付けは、典型的には、主に急速に構成毒素1を送達するために注入された動物の循環系および神経系に作用するタンパク質およびペプチドの多様な、から構成されて示されている。有毒動物のごく一部には、ヒト、synanthropic分布5で特に種に脅威を与えることがあります。毒組成および機能活性の研究が重要な役割を果たしてきました機能的な脊椎動物の細胞成分（特に、神経細胞のイオンチャネル）6の特性と基本的な細胞プロセスを解明する（ 例えば神経分泌）7。また、選択毒ペプチドは、癌および疼痛8,9の治療としてのそれらの使用を含む生物医学の文脈において有用な特性を有する、候補薬物リードおよび抗毒素の開発のために採掘されている。毒はまた従って、これらの危険な分泌物の収集は多くのユーティリティを持って、生態学と進化の研究1,4,10,11において顕著な役割を果たしている。 そこに蜘蛛（クモ目秩序）の&gt;4万説明し種があり、100以上のクモファミリーの1つを除くすべてが牙12で終端ペア毒腺を持っている。クモの高い種の多様性は、彼らが毒の生物の最大のクレードを表すことを示唆している。しかし、クモ毒の生化学的特徴付けは、Lを有しargely最も頻繁に人​​間毒物注入に関連した種の数が少ないに集中した。クモ毒の最近のプロテオミクスとトランスクリプトーム研究は、彼らは通常、多くのユニークなタンパク質およびペプチド2,13,14を含んで示している。高スループットcDNAの配列決定および質量分析ペプチドフィンガープリントの進歩は著しく、これらの毒タンパク質15の発見を容易にした。それにもかかわらず、このような作業は、このような技術のためのクモから十分な毒および/ ​​または毒液腺の収集、および詳細なドキュメントで始まり、いくつかの16である。 本論文では、同様のサイズのクモに適用することができ、黒の未亡人のスパイダーからの毒と毒腺の収集のためのプロトコルを提示します。別々腺からの毒のコレクションは、他の細胞の機能を実行するタンパク質とは対照的に、毒液中に分泌されるタンパク質の同定を可能にする。黒い未亡人や他のL種atrodectus広く、時には多量の発汗、筋肉の収縮、高血圧、呼吸困難や斑状麻痺5が付属して、ヒトでの激しい痛みを引き起こす彼らの非常に神経毒性毒に起因最も危険なクモ、間にあるものとして認識されている。ここで紹介する毒収集プロトコルは、筋収縮と毒のリリースを引き出すために麻酔をかけ、スパイダーに電流を提供するために電気刺激を使用しています。毒滴が迅速にマイクロキャピラリーを用いて収集し、冷凍保存のためのチューブに分注される。プロトコルは危険な手順が含まれているので、それだけで十分な訓練を受けた個人によって行われるべきであると注意が重要なステップで付勢されている。収集された毒は、生理学的実験または機能アッセイ18のためのこのような構成分子2の特徴付け及び単離のような多くの用途を有し、そして毒遺伝子発現11を刺激すること。プロトコルはDESCRで締めくくり毒特異的遺伝子のクローニングに有用な毒液腺解剖と保存のiptionは、の発現が異なるクモ10,11における毒枯渇後の2-3日に起こることが示されている。

<table><tbody><tr><td>神経・筋賦活装置(電気刺激装置)&nbsp;</td><td>グラス</td><td>テクノロジーSD9</td><td>http://www.grasstechnologies.com/products/stimulators/stimsd9.html</td></tr><tr><td>電圧計</td><td>RadioShack</td><td>22-223</td>任意の<td>一般的な電圧計/マルチメーターは、</td></tr>エースハードウェア25 G x 1&#189で利用可能<tr><td>尖ったフェザー級鉗子</td><td>Bioquip</td><td>4748</td><td></td></tr><tr><td>プラスティディップ</td><td>Performix</td><td></td><td></td></tr>を置き換えることができます<tr><td>。皮下注射器針</td><td>BDメディカル</td><td>305127</td><td></td></tr><tr><td>真空フィルターフラスコ1 L</td><td>Nalgene</td><td>DS4101-1000</td><td>小さいフラスコサイズは、</td></tr><tr><td>Buchnerツーピース漏斗、90ミリメートル</td><td>Nalgene</td><td>4280-0900</td><td></td></tr><tr><td>5 &#956も動作する可能性があります。l キャピラリーボア(マイクロキャピラリー)</td><td>VWR</td><td>53508-375</td><td></td></tr><tr><td>取付パテストリップ&nbsp;</td><td>Ace Hardware</td><td></td> Fisherbrandの汎用エクストラロング鉗子で入手可能なロックタイ<td></td></tr><tr><td>ト長さ:11-13 / 16インチ</td><td>Fisher</td><td>10-316C</td><td></td></tr><tr><td>SSC Buffer、20x (pH 7.0)、Molecular Grade</td><td>Promega</td><td>V4261</td><td>は、ストックケミカル (150 mM NaCl、15 mM クエン酸ナトリウム)</td></tr> <tr><td>Eppendorf safe-lock tubes 0.5 ml tubes (cryogenic safe)</td><td>Eppendorf</td><td>22363611</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene Dewar、1 L、HDPE、液体窒素ベンチトップフラスコ</td><td>Thermo Scientific</td><td>4150-1000</td><td></td></tr><tr><td>Rnase Away</td><td>VWR</td><td>53225-514</td><td></td></tr><tr><td>超微細ピンセット(解剖鉗子)</td><td>EMS</td><td>78310-0</td><td>同様の高品質細点鉗子で代用可能</td></tr><tr><td>フットスイッチ/ペダル</td><td>ラインマスタースイッチ株式会社</td><td>491-S</td><td></td></tr><tr><td>二股延長クランプ、ビニールカバースリーブ付き、8.5インチ</td><td>VWR</td><td>21570-007</td><td>同様のモデルを交換できます</td></tr><tr><td>クランプ</td><td>ホルダーVWR</td><td>89084-746</td><td>同様のモデルを交換できる、延長クランプロッドの直径に対応する必要があります</td></tr><tr><td>磁気ベース(クランプホルダーを介して延長クランプを保持)</td><td>VWR</td><td>300042-270</td><td>固定位置に延長クランプをしっかりと保持することができる同様の装置は、</td></tr><tr><td>プラスチック収集バイアル(大/ 40 dram)</td><td>Bioquip</td><td>8940</td><td></td></tr><tr><td>綿縫製糸</td><td>ジョアン生地とクラフトストア</td><td>7245855</td><td>同様の製品に置き換えることができます</td></tr></tbody></table>

プロテオームとトランスクリプトーム解析のための蜘蛛から毒の抽出と毒液腺microdissections

Extraction of Venom and Venom Gland Microdissections from Spiders for Proteomic and Transcriptomic Analyses

毒は、化学的に、典型的には多様な生理活性を有する多数のタンパク質およびペプチドを含む複合体の分泌物である。毒液タンパク質の機能的特徴付けは、細胞受容体に対する薬物リードまたはプローブの識別を含む重要な生物医学的用途を有する。スパイダーは毒の生物のほとんどの種が豊富クレードですが、ほんの数種の毒は、​​小さな動物から毒の微量を集めることに伴う困難のために部分的には、よく理解されている。本論文では、西部ブラックウィドウ（ ゴケグモ属のHesperusの ）上の手順を実証し、電気刺激を使用してクモから毒液を収集するためのプロトコルを提示します。収集された毒は、質量分析を経由して直接タンパク質同定、機能アッセイ、およびトランスクリプトーム研究のため毒遺伝子発現の刺激を含む様々な下流の解析に有用です。この技術は、そのイソプロトコルよりも有利である毒の一部として分泌されない細胞タンパク質から本物の毒成分を分離しない全体腺ホモジネート、後半から毒液。代表的な結果は、質量分析を使用して採取された試料からの既知の毒ペプチドの検出を実証する。毒収集手順は、結果は、これは配列レベルでの毒 - 発現されたタンパク質およびペプチドの特性をもたらすことを実証して、クモ毒腺を切開するためのプロトコルが続く。

毒と毒腺解離の集合は、しばしば配列レベル10,11,15で毒タンパク質およびペプチドを特徴付けるために実施される。収集された毒はまた、それらの機能的活性18を決定するために、生理学的ア ​​ッセイにおいて使用され得る。毒のコレクションは、それによってRT-PCR 10,11を介して、特定の毒素転写産物のクローニングを容易に毒腺遺伝子発現を刺激する。毒タンパク質の同定はまた、15,21毒腺cDNAライブラリーから生成された配列データベース標準質量分析技術を統合することにより、ハイスループット様式で行うことができる。このような作業の例は、毒液腺その有効性を実証し、上記で詳述したプロトコルを使用して収集から開始して、 図1に示されている。 L.から収集毒Hesperusの成人女性をトリプシンで消化し ​​、溶液中に供したタンデム質量分析（MS / MS）をHPLC（高速液体クロマトグラフィー）を結ぶMuDPIT分析。ここMuDPIT分析はプロテオミクスコンソーシアムアリゾナ大学によって行った。 （スペクトルから推測された娘イオン）を検出するペプチドの質量及びそれらの解離フラグメントは、理論的にはL.から構築遺伝子発現ライブラリーから得られたcDNA配列の翻訳から予測されたペプチド配列と比較したHesperusの毒腺21（腺切開プロトコルによって取得された、上述した）。この実験では、36のタンパク質は、99​​.9％の確率閾値で、すべての収集されたスペクトルから検出され、かつ少なくとも1つの検出されたペプチドを含有していた。検出されたタンパク質の一つはタンパク質配列（ 図1B）の35％をカバーする三排他的ペプチドに対応する、43の合計スペクトル（ 図1Aに示される模範スペクトル）によって支持されている。 collecteから翻訳検出されたタンパク質（<html> D cDNAは）L.からlatrodectinするトップのBLASTpヒットした図2e-46の電子スコア、およびこの実験で検出されるタンパク質とアミノ酸配列レベルでの株式80％の同一性を有するtredecimguttatus（GenBankアクセッション番号P49125.1）。また、α-ラトロトキシン低分子量タンパク質として知られているLatrodectinは、クロゴケグモの認識毒成分が提示プロトコルの有効性を検証し、22、23、スパイダーある。毒から同定されたいくつかのタンパク質はBLASTヒットが検出されないれる配列に対応する。未知のタンパク質が、毒汚染物質を表し、またはので、それは、クモのために利用可能な限られたゲノムリソース、ならびにそれらのタンパク質のための制限された機能情報にそのような結果があるかどうかは不明である。それにもかかわらず、遺伝子またはタンパク質の発現は、それが本物の毒の成分であるかどうかを明らかにする必要があり、他の組織に比べて毒腺におけるこのような新規タンパク質の存在量を調べる分析する。 常に &quot;&gt;：&quot; =キープtogether.withinページFO「ENT <img alt="図1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51618/51618fig1highres.jpg" width="600" /> 図1：質量分析法を用いてクロゴケグモ毒から識別Latrodectinペプチド（A）代表スペクトル（43の1）LのMuDPIT分析のMS / MS部を介して検出されました。パートB.スペクトルに示す収集cDNA配列の予測された翻訳に割り当てられたHesperusの毒液は、上部に文字で、親ペプチド（CGEEDFGEEIVK）を断片化することによって製造され、水平軸上で検出された娘イオンの比（m / z）の質量電荷を示している娘イオンの質量に基づいて、ペプチド配列を示す。スペクトルの一部にAが割り当てられた（B）タンパク質配列は、赤、太字および下線付きテキストでパートAに示すスペクトルから、対応するシーケンスを示す、追加の赤色のテキスト（太字ではない）他の収集したSPで検出し、このタンパク質に別のペプチドを表し、ectra。タンパク質配列を解剖毒腺から得られたcDNA配列から翻訳される。

この記事では、プロテオミクス特性評価を実施し、1）順番に電気刺激を使用してクモから毒液を抽出するためのプロトコルを提供します2）毒液腺遺伝子発現を刺激し、そして3）毒の機能研究を行う。これは、遺伝子発現研究のための毒液腺microdissectionsの記述が続く。

プロテオームとトランスクリプトーム解析のための蜘蛛から毒の抽出と毒液腺Microdissections

Venoms are chemically complex secretions typically comprising numerous proteins and peptides with varied physiological activities. Functional ...

本手順の全体的な目的は、トランスクリプトームおよびプロテオーム解析のために、クモから毒液を抽出して毒腺を摘出することです。まず、電気刺激により毒液を採取するために必要な器具と試薬を準備します。次に、解剖顕微鏡下でピンセットを用いてクモを固定し、麻酔をかけます。その後、クモに電流パルスを与え、放出された毒液をマイクロキャピラリーチューブで回収します。最終ステップは、2〜3日後にクモの毒腺を摘出することです。最終的に、質量分析法またはその他のプロテオーム解析を用いて、毒に含まれる構成タンパク質の配列を明らかにします。毒の採取手順は、迅速かつ慎重に行うべき一連の協調的な動作を伴うため、習得が困難であり、この手法を視覚的に提示することが極めて重要です。まず、電気刺激装置の電源コードをコンセントに接続し、外部フットペダルを外部信号入力に接続します。次に、極性スイッチがノーマルモードになっていることを確認し、正極を電気刺激装置の赤色の出力端子に、負極を黒色の出力端子に接続します。その後、刺激装置を以下の推奨初期設定に設定します。ワニ口クリップを電圧計の正極および負極のテストリードに接続し、電極の出力をテストします。次に、刺激装置の電源スイッチを入れ、フットペダルで電流を流します。液体プラスチックで片方の爪をコーティングして、フェザーウェイト鉗子を準備し、コーティングが乾燥するまで4時間待ちます。プラスチックが完全に乾燥した後、反対側の爪の先端から15 mmの範囲を綿の縫い糸で単層にきつく巻き付け、端を結んで糸を固定します。次に、鋭利なハサミを用いて、鈍端皮下注射針の先端を切断します。このとき、クモを傷つけない程度に小さく、かつ詰まりを防ぐのに十分な大きさに切断してください。切断面をサンドペーパーで滑らかにし、針を真空廃棄トラップに取り付けます。その後、解剖顕微鏡の視野内で、磁気ベースに固定したビニール被覆の2本爪クランプを用いて、超軽量ピンセットを水平かつ密閉した状態で配置します。この際、プラスチック被覆の爪を上に、スレッド被覆の爪を下にして固定してください。次に、糸の上流にある下側のpronged端子に正極のアリゲータークリップを取り付け、鈍端の金属製真空針に負極のアリゲータークリップを取り付けます。続いて、糸とアリゲータークリップの間にある鉗子のpronged端子に正極リードを、鈍端の真空針に負極リードを配置します。電圧計回路の電流を確認するためにフットペダルを押し、十分な電流が検出されることを確認した後、保護メガネを着用した状態でリードを取り除きます。毒素回収用のマイクロキャピラリーチューブを数本用意します。次に、ペトリ皿にマウント用パテのストリップを置き、その上にマイクロキャピラリーを載せます。手袋を着用した手で、マイクロキャピラリーチューブの一端を固定し、もう一端を滅菌済みの金属製ピンセットで保持してブンゼンバーナーの炎にかざします。一端を固定したまま、もう一端を炎から引き離して先端を細長く伸ばします。解剖顕微鏡でマイクロキャピラリーの端を確認し、滅菌済みの金属製ピンセットを用いて、伸ばした端に小さな斜めの開口部を作製します。チューブを閉じ、氷上に置きます。クモの不動化を開始するために、CO2チャンバーのガスをオンにします。次に、長い金属製ピンセットを用いて、クモを閉じたプラスチック製採集瓶からCO2チャンバーへと移します。クモをチャンバー内に5〜10分間保持し、長いピンセットでそっとつついて、クモがもう動いていないことを確認します。次に、生理食塩水を入れた転送ピペットを使用して、ピンセットの先端を濡らします。次に、麻酔されたクモを前脚でつまんでCO2チャンバーから取り出します。鈍端解剖鉗子と手袋を着用した手を用いて、麻酔されたクモをフェザーウェイト鉗子装置へ移動させます。その後、閉じた状態のフェザーウェイト鉗子の prong を開き、クモの頭胸部を prong の間に挟みます。クモがしっかりと固定され、かつ潰されないように、 prong を閉じます。クモの背甲背面が thread 塗布済みの prong に接し、腹面がプラスチックコーティング側に向けられ、正極が下の prong に取り付けられていることを速やかに確認してください。次に、解剖顕微鏡の倍率、焦点、および光源を調整し、クモの鋏角と牙がはっきりと見えるようにします。毒液の採取を開始するため、バキュームを起動し、クモの毒腺に水をスプレーします。2本目の鈍端針付きシリンジを用い、真空吸引針で水を吸引して不純物を除去します。次に、負極を接続した真空吸引針をクモの吻に接触させ、フットペダルでパルスを印加します。するとクモの脚が収縮し、牙から透明な液滴として毒液が現れます。必要に応じて、逆流した液体を吸引して除去します。次に、マイクロキャピラリーチップを用いて毒液の液滴を回収し、そのチップを水が入った0.5 milliliterチューブに挿入して、水をキャピラリ内に吸い込ませます。この際、キャピラリでクモに穴を開けたり、キャピラリがクモの糸や接着物質で汚染されたりしないように注意してください。次に、チューブアダプター付きの移送用注射器を、採取チップとは反対側のマイクロキャピラリーに取り付け、毒液溶液をチューブに戻し、チューブを氷上に置きます。毒液の入ったチューブは－80°Cで保存してください。毒液の採取が終了したら、蓋を開けたプラスチック製採取バイアルとキャップをクモの近くに配置します。迅速に移送するため、片方の手で持った鈍端解剖鉗子でクモの脚をそっと掴み、もう一方の手で極細鉗子を慎重に開きます。次に、鈍端ピンセットを用いてクモを回収バイアルの中に滑り込ませます。そして、すぐにキャップを閉めます。毒液採取の2〜3日後、CO2チャンバー内でクモを麻酔し、液体窒素キャリアを満たして解剖顕微鏡の横に配置します。解剖エリアとピンセットをRNA awayで清掃してください。次に、小型のシャーレに1xサリンクエン酸ナトリウムを満たし、解剖顕微鏡の下に置きます。続いて、クモをCO2チャンバーからシャーレに移し、ピンセットを用いて頭胸部を腹部から迅速に切り離します。その後、ピンセットで頭胸部を解剖顕微鏡の下で保持し、視界の中に複眼が来るように配置します。2組目のピンセットの尖った端を使用して、carabaseとcollieryの側面を繋いでいる角質層を外側に向かって切断します。2組目のピンセットでcollieryを掴み、毒腺が引き出されるまで、ゆっくりと前後に引っ張ります。この操作は15分以内で完了させてください。腺をコロニーから分離し、0.5 milliliterのクライオセーフチューブに移します。閉じたチューブを液体窒素に入れます。質量分析技術と、毒腺のCD NAから作成された配列データベースを統合することで、毒タンパク質の同定が可能となりました。質量分析を用いてブラックウィドウの毒から同定された36種類のタンパク質のうち、一つにLaro ineptペプチドがありました。クロゴケグモのようなクモを扱う際は非常に危険を伴うため、本手順の実施中は常に保護手袋を着用するなど、十分な予防策を講じてください。

extraction-venom-venom-gland-microdissections-from-spiders-for

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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プロテオームとトランスクリプトーム解析のための蜘蛛から毒の抽出と毒液腺Microdissections

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