Name: 海ヤツメウナギ（中肝変態期胆道変性を可視化するための新しい方法の明確化 Petromyzon·マリナス） (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-06T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: 学ぶ 海ヤツメウナギの変態期における胆道変性の可視化法。修正CLARITY法とレーザー走行型共焦点顕微鏡を用いて胆道樹全体を透明化し、構造・細胞変化を解析する手法を解説。人の胆道閉鎖症研究にも応用可能です。

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著者は、ハモンドベイ生物駅、グレイトレイクスサイエンスセンター、米国地質調査所の貢献を認めている。また、レーザー走査型共焦点顕微鏡の彼女の技術的なサポートのためのミシガン州立大学の高度な顕微鏡のためのセンターで博士メリンダ·フレームに感謝。この研究は、YWCDとWMLへの五大湖漁業委員会からの補助金によってサポートされています。

1。溶液の調製<ol><li> 26.2グラムのリン酸ナトリウム（一塩基性）、115グラムのリン酸ナトリウム（二塩基性）、および87.66グラムのNaClを秤量：1 L 10×0.1 Mリン酸緩衝生理食塩水（PBS、pH7.4）で行う。約800ミリリットル蒸留水に溶解し、O、pHを調整し、蒸留H 2 Oで1リットルにボリュームを持ち出す<ol><li> L 1 0.1 Mリン酸緩衝生理食塩水（pH7.4）で作る：100ミリリットル10×PBSを取り、900 mlの蒸留H 2 Oを加える</li><li> 0.1％トリトンX-100で1 L 0.1 Mリン酸緩衝生理食塩水（pH7.4）に行います、100ミリリットル10倍のPBSを取る1ミリリットルのTriton X-100を追加し、蒸留H 2 Oで1リットルにボリュームを持ち出す</li></ol></li><li> 26.2グラムのリン酸ナトリウム（一塩基性）を秤量し、115グラムのリン酸ナトリウム（二塩基性）：1 Lの10倍の0.1Mリン酸バッファー（PB、pH7.4）で行う。約800ミリリットル蒸留水に溶解し、O、pHを調整し、蒸留H 2 Oで1リットルにボリュームを持ち出す<ol><li> L 1 0.1 Mリン酸緩衝液（pH7.4）を作る：100mlの10×PBを取るとH 2 Oを蒸留900ミリリットルを追加</li><li> 0.1％トリトンX-100で1 L 0.1 Mリン酸緩衝液（pH7.4）を作る：100ミリリットル10倍のPBを取る1mlのトリトンX-100を追加し、蒸留H 2 Oで1リットルまでの体積を</li></ol></li><li> 400ミリリットルヒドロゲルモノマー溶液（4％アクリルアミド、0.25％ビス - アクリルアミド、4％パラホルムアルデヒド0.0075％の硫酸アンモニウム、0.1 M PBS中の0.0005％サポニン）を作る0.3グラムの過硫酸アンモニウムおよび0.2グラムのサポニンを秤量する。 H 2 Oを蒸留210ミリリットル、40ミリリットルの40％アクリルアミド、10ミリリットルの2％ビスアクリルアミド、40ミリリットル10倍のPBS（pH7.4）で、100ミリリットル16％パラホルムアルデヒドを追加して、よく混ぜる。 </li><li> 4 Lクリア溶液（0.2Mのホウ酸4％SDS）を作る：49.464グラムのホウ酸と160グラムのSDSを秤量する。 、約3.5 L 蒸留水に溶解し、NaOHでpHを8.5に調整し、4 Lにボリュームを持ち出す</li><li> 1Lの80％グリセロール溶液を加えます。、800ミリリットルグリセロールを測定し200ミリリットル蒸留水を加え、よく混ぜる。 </li></ol> 2。組織標本<ol><li>各15ミリリットル遠心管にハイドロゲルモノマー溶液と分量10ミリリットルを用意します。 </li><li>全組織を解剖し、4℃で2日間、ヒドロゲル中に修正ヒドロゲル溶液は、少なくとも10倍の組織のボリュームであることを確認してください。 </li><li>ドラフトに（15ミリリットルの遠心管中）ハイドロゲル固定された組織を持って来る。 </li><li> 、5μlのTEMEDを追加することにより、ハイドロゲル固定された組織を重合よく混ぜ、2〜3時間室温でヒュームフードに座ってみましょう。 </li><li>徹底的に余分なジェルを取り外します。注意：余分ゲルが染色の際にクリア処理し、抗体の浸透の妨げになる。 </li><li>組織が透明になるまで数日間70回転と50℃に設定したインキュベーターシェーカーでソリューションをクリアする10ミリリットル中に固定された組織をインキュベートする。少なくとも一日一回クリアするソリューションを変更し、清算ソリューションを変更する際に、組織から余分なゲルを取り除く。 </li><li> 70 rでの0.1％トリトンX-100、10 mlの0.1 M PBで組織を​​すすぐ午後と37℃で一晩。この手順を3回繰り返し、緩衝液を変更する際に、組織から余分なゲルを取り除く。 </li><li> 2日間、70 rpmで37℃、0.1％トリトンX-100でPBの一次抗体溶液中で清澄組織をインキュベートする。注：組織全体を水没するのに十分な一次抗体溶液を加えます。 </li><li>一晩70 rpmで37℃、0.1％トリトンX-100で10mlのPBで組織を​​すすぐ。この手順を3回繰り返し、緩衝液を変更する際に、組織から余分なゲルを取り除く。 </li><li>暗い部屋で、または薄暗い光の下で、次の手順を実行します。写真の退色を防ぐために、ホイルでサンプルをカバーしています。 </li><li> 0.1％トリトンX-100 PB蛍光二次抗体溶液および1日70 rpmで37℃でブロッキング血清を清澄組織をインキュベートする。 </li><li>一晩70 rpmで37℃、0.1％トリトンX-100で10mlのPBで組織を​​すすぐ。この手順を3回繰り返し、余分なゲルFを削除緩衝液を変更するときに、組織をROM等を用いることができる。 </li><li>一晩70回転と37℃で10 mlのPBSで組織をすすぐ。この手順を3回繰り返し、緩衝液を変更する際に、組織から余分なゲルを取り除く。 </li><li> 70 rpmで37℃で一晩、80％グリセロールで明らかに組織をインキュベートする。 </li><li>前共焦点顕微鏡に4℃で蛍光染色した組織を格納します。 </li></ol>

<ol><li>Applegate, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+the+sea+lamprey+%28Petromyzon+marinus%29+in+Michigan%5BTitle%5D)+AND+%22US+Fish+and+Wildlife+Service+Special+Science+Report+on+Fishery+Service%22%5BJournal%5D)">Natural history of the sea lamprey (Petromyzon marinus) in Michigan.</a> US Fish and Wildlife Service Special Science Report on Fishery Service. (55), (1950).</li>
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<li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497, 332-337 (2013).</li>
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<li>Morii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+apoptosis+in+the+cystic+duct+during+metamorphosis+of+a+Japanese+lamprey%2C+Lethenteron+reissneri%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Onset of apoptosis in the cystic duct during metamorphosis of a Japanese lamprey, Lethenteron reissneri.</a> Anat. Rec. 293, 1155-1166 (2010).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

このプロトコルは、ナノ多孔性ヒドロゲルを形成するためにポリアクリルアミドで無傷組織を架橋し、次いで、光透過性および巨大分子透過性を達成するために組織の原形質膜を剥ぎ「CLARITY」12と呼ばれる新たな方法から変更される。 「透明度」長距離突起と神経系におけるローカル回路配線の完全な組織のイメージングを可能にする。この新しい方法は、変態時にウミヤツメ肝臓胆管系全体を視覚化するために使用することができる。これは、高解像度の情報を取得し、そのような全体の胆管系または従来の埋め込みおよびセクショニングの方法を用いて、中枢神経系のような複雑なシステムのグローバルな視点を維持するために、生物学における課題である。このCLARITY修飾方法は、レーザビームは、通常のレーザ走査confoca低電力蛍光対物レンズ（4×）により1〜2mmの厚さまでそのまま海のヤツメウナギ幼生肝臓を貫通することを可能にするL顕微鏡。より深い浸透は、より高度な多光子共焦点顕微鏡を用いて達成することができる。三次元画像は、3次元再構成ソフトウェアを使用して再構成することができる。従来の方法を使用して同等の結果を達成することは、面倒であり、多くの部分の断片...

海のヤツメウナギは、次の3つのライフステージを通して1,2を開発しています。幼虫海のヤツメウナギ（L）は、底生フィルターフィーダーなどの巣穴に最も時間を費やしています。外部形態や内臓3における再編の劇的な変化の7変成岩の段階を経て、結果の少年（JV）が質量100回以上体を増やし、彼らはホストの魚由来の血液や組織液を餌その間に寄生段階に入る。海や大きな湖にあるホストの魚を食べて1.0から1.5年後には、大人が早春の間に給餌を中止し、産卵する河川に移行してから、1,2ダイ 。 変態中に、海のヤツメウナギの肝は、胆嚢や胆管系全体、人間の幼児疾患胆道閉鎖症を模倣進化の変異体の表現型を失う。乳児胆道閉鎖症は、重度の合併症を持つ稀な小児肝疾患である4,5,6,7、8,9,10は、しかし胆道閉鎖症の病因および病因は4不明な点が多い。外科的介入（葛西手順は）5実行されない限り、胆道閉鎖症の患者は生後2年以内に死亡する。その後、これらの患者は、広範な臨床管理と、多くの場合、肝移植6が必要です。胆道閉鎖症の病因の多くの理論は、このようなウイルス感染、先天性奇形、自己免疫疾患および毒性傷害として提案されている。しかし、胆道閉鎖症の発展にそれぞれの寄与は7,8,9,10決定的まま。 病理学的胆道閉鎖症に苦しむ乳幼児とは異なり、海のヤツメウナギは、広範な壊死炎症、線維症または肝硬変10なしで発生的にプログラムされた胆道閉鎖症を起こす。動物は、このプロセスの間に10の過渡胆汁うっ滞を受けるが、この発達状態に適合させることができる経由新規合成および肝臓11における胆汁酸塩の合成の減少として知られているメカニズムに加えて、発達胆道閉鎖症、後腸内の胆汁酸塩の分泌。海のヤツメウナギのこの発達過程は、胆道閉鎖症の進行を検討する唯一の既知の機会を提供しています。 「CLARITY」と呼ばれる新たに開発された方法は、光学的に透明なナノ多孔性ハイドロゲル12に無傷組織を形質転換することにより、複雑な哺乳類の神経系での高分解能イメージングを可能にします。海のヤツメウナギ肝臓と変更された透明度のプロトコルを使用して、胆管変性症の完全な組織のイメージングは​​、肝臓変態を通じて文書化することができます。

<table><tbody><tr><td>アクリルアミド40%&nbsp;</td><td>バイオ・ラッド</td><td>161-0140</td><td></td></tr><tr><td>2% ビスアクリルアミド&nbsp;</td><td>バイオ・ラッド</td><td>161-0142</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>バイオ・ラッド</td><td>161-0800</td><td></td></tr><tr><td>過硫酸アンモニウム&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>A3678-25G</td><td></td></tr><tr><td>ホウ酸</td><td>シグマ</td><td>B7901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>サポニン&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>ドデシル硫酸ナトリウム&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>L337-500G</td><td></td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム(一塩基性)</td><td>シグマ</td><td>04269-1KG</td><td></td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム(二塩基性)</td><td>シグマ</td><td>S5136-1KG</td><td></td></tr><tr><td>トリトンX-100</td>シ<td>グマ</td><td>X100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>グリセロール&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G9012-500ML</td><td></td></tr><tr><td>16%パラホルムアルデヒド&nbsp;</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710-S</td><td></td></tr><tr><td>NaOHペレット&nbsp;</td><td>EMD</td><td>SX0590-3</td><td></td></tr><tr><td>15 ml遠心分離管</td><td>任意のブランドの</td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖ツール&nbsp;</td><td>どんなブランド</td><td></td><td></td>でも</tr></tbody></table>

海ヤツメウナギ（中肝変態期胆道変性を可視化するための新しい方法の明確化 petromyzon·マリナス）

A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey (Petromyzon marinus)

胆道閉鎖症は、台湾の5000での1の報告された頻度で、南東米国では推定1 15000周波数で、乳児期の稀な疾患であるが、東アジア諸国の方が一般的。多くは胆道閉鎖症の管理について知られているが、その病因は依然としてとらえどころのないです。海のヤツメウナギ（Petromyzon·マリナス ） は、胆管変性のメカニズムおよび進行を検討するユニークな機会を提供します。幼虫に寄生し、大人：海のヤツメウナギは、次の3つのライフステージを経て発達する。幼虫から寄生少年への移行時には、海のヤツメウナギは外部形態や内臓の劇的再編·改造して変態を受ける。肝臓では、全体の胆道系は胆嚢や胆管系を含めて、失われます。 「CLARITY」と呼ばれる新たに開発された方法は、変成海のヤツメウナギにおける腸と肝臓全体との接合部を明確にするために変更されました。ザ·胆変性のプロセスは、レーザー走査共焦点顕微鏡を用いて可視化し、ウミヤツメ変態中に識別した。この方法では、ユニークな動物モデルにおける胆道閉鎖症を研究するための強力なツールが用意されています。

いくつかの重要な発生事象は、海のヤツメウナギ変態中に肝胆道系に発生する。胆管や胆嚢は、アポトーシスと縮退します（ 図1）を受ける。 （全体胆管系は、Z軸に沿って捕捉し、（変態13前後の胆管細胞および肝細胞の両方に存在CK19）、肝細胞マーカーサイトケラチン19、共焦点顕微鏡を用いて抗アポトーシスマーカーのBcl2で修飾浄化方法及び染色を組み合わせる図2）および3次元構造は（ 図3）再構成した。レーザー走査共焦点顕微鏡法は、胆管系のほとんどは、胆管が腸に入るジャンクショ​​ン以外は、肝臓の内部に埋め込まれているので、無傷の肝臓を介して光学部を実行するために使用した。変性プロセスは、中央に大きなintrahepに向かって、周辺の小さな胆小管から開始し、変成段階2-4で発生した以前の研究10と整合ATIC総胆管（ 図2）。 <img a...

海のヤツメウナギは変態期胆嚢や胆管、人間の胆道閉鎖症と同様のプロセスを失う。新しい固定および清澄法（CLARITY）はレーザー走査共焦点顕微鏡を用いて全体胆ツリーを視覚化するために変更されました。この方法では、胆管の変性を研究するための強力なツールが用意されています。

海ヤツメウナギ（中肝変態期胆道変性を可視化するための新しい方法の明確化 Petromyzon·マリナス）

Biliary atresia is a rare disease of infancy, with an estimated 1 in 15,000 frequency in the southeast United States, but more common in East Asian ...

本手順の目的は、変態期のウミヤツメにおける胆管変性の全般的、構造的、および細胞学的解析を行うため、肝臓全体および腸との接合部を透明化することです。これは、まず組織をハイドロゲルモノマー溶液で固定することで達成されます。次に、固定した組織とともにハイドロゲルを重合させます。その後、固定組織の細胞膜を除去することで、組織を透明化させます。最終的に、免疫蛍光染色を行い、レーザー走査型共焦点顕微鏡を用いて、変態過程にある Lampry の胆管変性における全体的な構造的および細胞的変化を可視化します。この手法は、中枢神経系のコネクトームや、本研究における血清点変態中の胆管変性など、生物医学分野における重要な疑問の解決に寄与します。この技術の意義は、ヒトの胆管疾患や胆道閉鎖症の治療や診断にまで及びます。なぜなら、この希少な乳幼児先天性疾患は、血清点変態中の胆管変性と同様の特徴を共有しているためです。私たちがこの手法を考案したのは、Nature誌のニュース記事を見つけ、当研究室の大学院生であるAnn Scottによる手順を実演したオンライン動画をラボミーティングで提示した時でした。まず、テキストプロトコルに従って、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）およびリン酸緩衝液（PB）を調製します。ドラフトチャンバー内で、蒸留水、40% acrylamide 2% bis acrylamide 10X PBS、16% paraformaldehyde、サポニン、および過硫酸アンモニウムを混合し、400 millilitersのハイドロゲルを調製します。4% SDSと0.2 molar ホウ酸からなる透明化溶液を1 liter調製し、さらに組織調製用に80% glycerolを500 milliliters調製します。ハイドロゲルモノマー溶液10 millilitersを15 milliliter遠心チューブに分注します。組織サンプルを解剖し、組織をハイドロゲル固定液が入った各チューブに入れ、4 °Cで2日間静置します。ドラフトチャンバー内でインキュベートした後、5 µLのTEMEDを加えて固定組織を重合させます。その後、十分に混ぜ合わせ、サンプルを室温で2〜3時間インキュベートします。インキュベーション後、組織サンプルを透明化させるため、余分なゲルを完全に取り除きます。各サンプルを15 millilitersの透明化溶液に入れ、50 °C、70 RPMsで、透明になるまで数日間インキュベートします。透明化溶液は少なくとも1日1回交換し、余分なゲルを除去してください。サンプルを0.1% Triton X 100を含む0.1 M PB 15 mLに移し、37 °C、70 RPMで一晩振盪させます。新鮮なバッファーを用いて、このインキュベーションをさらに2回繰り返します。組織が透明になり、過剰なゲルが除去されたら、サンプルをPB Triton X 100で希釈した一次抗体溶液に浸し、37 °C、70 RPMで2日間インキュベートします。インキュベーション後、0.1% Triton X 100を含むPB 15 mLを用いて、組織サンプルを37 °C、70 RPMで一晩洗浄します。最後の洗浄バッファーを除去した後、洗浄を3回繰り返し、0.1% Triton X-100およびブロッキング血清を含むPBで調製した蛍光二次抗体溶液を加え、暗所で37 °C、70 RPMで1日間インキュベートします。37 °C、70 RPMで10 mLのPB Triton X-100を用いてサンプルを3回洗浄した後、PBSで3回、一晩洗浄を行います。最後に、透明化した組織をアルミホイルで覆い、80% glycerol中で一晩インキュベートします。共焦点顕微鏡によるイメージングは通常、暗所または低照度下で行われますが、このビデオでは視認性を高めるために照明を点灯させています。ヤツメウナギの変態中、HEPA胆道系ではいくつかの重要な発生事象が起こります。例えば、ここで示されているように、胆管と胆嚢はアポトーシスを起こし、退化します。改良した透明化法を用い、肝細胞マーカーであるcytokeratin 19および抗アポトーシスマーカーであるBCL twoで染色した後、レーザー走査型共焦点顕微鏡を用いて、そのままの肝臓の光学切片を作成しました。染色により、変性過程が変態のステージ2から4にかけて起こることが明らかになりました。上段のパネルは前端、下段のパネルは後端のものです。ここに胆管系が示されており、さらに肝臓内の暗色で樹状に見えるアポトーシス細胞と、その周囲の毛細胆管および導管構造が示されています。この図は、変態ステージ2から3の間の肝臓3個の共焦点Zシリーズから再構成された3次元画像であり、cytokeratin 19およびBCL twoに対する抗体で標識されています。胆管系と、暗い樹状に見えるアポトーシス細胞、および周囲の毛細胆管と胆管は、それぞれ白と黒の矢印で示されています。ここでは、管腔内に胆汁滴を含む、変態ステージ2から3の個体の胆管の共焦点光学切片を示しています。このビデオを視聴することで、さらなるイメージング解析に向けて組織全体を透明化する方法について十分に理解できるはずです。パラホルムアルデヒドおよびポリアクリルアミド溶液の取り扱いは極めて危険であるため、本手順の実施中は、手袋の着用やドラフトチャンバーの使用などの予防措置を必ず講じてください。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ゼブラフィッシュ胚は、発生生物学の研究のための優れたモデルである。胚発生の間に、ゼブラフィッシュは、試料観察および分析のための3次元の課題が卵黄塊で開発しています。このプロトコルは、その場でホールマウントの準備を取り付ける2次元の平面を作成する方法について説明します（WISH）は、ゼブラフィッシュ胚の標本を染色した。...

ホールマウントによるゼブラフィッシュ胚標本ステンドの観察および分析のためのフラットマウントの準備<em&gt;その場で</em&gt;ハイブリダイゼーション

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胆道主導の肝臓の再生を研究するためにゼブラフィッシュにおける肝細胞特異的アブレーション

鰓掻き器、咽頭歯、枝骨を含む分枝骨格は、ほとんどの魚の食品加工の主要な場所として機能します。ここでは、この内部骨格を3本のトゲウオに解剖してフラットマウントするためのプロトコルについて説明します。この方法は、他のさまざまな魚種にも適用できます。...

解剖やイトヨ鰓スケルトンのフラットマウント

ゼブラフィッシュは、食事の脂質処理と代謝性疾患の貴重なモデルとして浮上しています。脂質が豊富な幼虫の飼料のプロトコル、食事性蛍光脂質類似体のライブイメージング、および食物摂取量の定量化について説明します。これらの手法は、さまざまなスクリーニング、イメージング、および仮説主導の調査手法に適用できます。...

幼虫のゼブラフィッシュのためのパラダイムを摂食高脂肪：摂食、ライブイメージング、および食物摂取の定量化

ここでは、分離し、構造、嗅力海ヤツメウナギの推定フェロモン化合物の行動応答を評価するためのプロトコルを提案する.

バイオアッセイ誘導分別を使用して海ヤツメウナギ フェロモンの同定

ここでは、標準化された一連の優れた眼溝を観察するプロトコルを提案する脊椎動物の目で最近識別される、進化的に保存されている構造。ゼブラフィッシュ幼虫を用いて形成と眼肺尖の閉鎖に寄与する要因を識別するために必要な技術を示します。...

優れた眼溝の動脈分布胚発生中に可視化

マウス肝臓における胆管密度を正確に定量するための、かなりシンプルで敏感な方法を提示する。この方法は、遺伝的および環境修飾子の効果と胆汁病のマウスモデルにおける潜在的な治療法の有効性の決定に役立ちます。...

マウス肝臓における胆管密度の決定

ここでは、幼虫ゼブラフィッシュの肝臓サイズを定量化する方法を実証し、肝臓の成長と発達に対する遺伝的および薬理学的操作の効果を評価する方法を提供する。...

ブライトフィールド顕微鏡を用いた幼虫ゼブラフィッシュの肝臓サイズの定量化

骨格筋再生は、筋ジストロフィーなどの多くの筋疾患で障害を受ける組織常駐筋幹細胞によって駆動され、筋肉が再生できないことが生じる。ここでは、筋疾患のゼブラフィッシュモデルにおける筋再生の検討を可能にするプロトコルについて述べる。...

ゼブラフィッシュモデルの筋肉再生を調べる

このプロトコルは、肝臓再生の研究を可能にするために、成体ゼブラフィッシュの肝臓の腹側葉を除去するための手順を説明します。...

成虫ゼブラフィッシュの部分肝切除術

このプロトコルは生体 内の 再生の間にゼブラフィッシュのelasmoidスケールの収穫そして視覚化を記述する。さらに、これらの鱗屑の収穫後最大7日間の 生体外...

ゼブラフィッシュの鱗の再生 TOTO および Ex Vivo の鱗の培養

学ぶ 海ヤツメウナギの変態期における胆道変性の可視化法。修正CLARITY法とレーザー走行型共焦点顕微鏡を用いて胆道樹全体を透明化し、構造・細胞変化を解析する手法を解説。人の胆道閉鎖症研究にも応用可能です。

海ヤツメウナギ（中肝変態期胆道変性を可視化するための新しい方法の明確化 Petromyzon·マリナス）

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