Name: ディープティシュ人間血管造影および機能前臨床研究のためのユニバーサルハンドヘルド三次元光音響イメージングプローブリアルタイムで (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: 学ぶハンドヘルド光音響イメージングシステムによる深部組織の三次元リアルタイム血管造影法。球形マトリクスアレイプローブを用いて血管形態と血流パラメータを可視化し、前臨床研究や臨床診断への応用可能性を示す。

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>jove_content<これらの結果につながった研究は、ERC-2010-StG-260991の助成金契約に基づき、欧州研究会議から資金提供を受けています。

体積ハンドヘルド光音響プローブを動作させるための詳細な手順については後述する。この手順は、動物およびヒトの実験に関する承認された制度的規制に従って行われる。 1.システムの準備<ol><li>出力光ビームを安定化させるための操作前〜15分のウォームアップ期間のためのレーザーのスイッチを入れる。 </li><li>皮膚（ 図1）と接触している隔離膜で一部を囲む水を置きます。 NOTE：（皮膚接触）分離膜とトランスデューサ（球形プローブの中心）の最大感度を有する領域との間の距離は、有効撮像深さを確立する。 </li><li>ポンプを用いて脱イオン水を用いて単離した膜と変換器の表面との間に約100mlの全容積を満たす。 </li><li>水漏れでも気泡がpresaの複数形されていないことを確認NT。あるいは、水の循環を提供することにより、気泡を避ける。 </li><li>室温で実験を実施し、この温度に維持される結合媒体（水）を確保する。 </li></ol> 2.イメージングの準備<ol><li>人間の撮影準備。 </li><li>画像内の望ましくないバックグラウンドを避けるために、脱毛ローション付きツー·画像化することが部分から毛を削除します（このステップはオプションです）。 </li><li>効果的な音響結合を提供するために、画像化される領域の周りの皮膚に超音波ゲルを適用する。関心領域内の光音響プローブを配置します。気泡が超音波カップリングゲル中に存在しないことを確認してください。 </li><li>動物の撮影準備。 </li><li>動物とのケアと実験手順は、制度や政府の規則や規制と一致していることを確認してください。 </li><li>シェービングローションで画像化される領域での動物の毛皮を削除します。で動物の目を保護超短パルスレーザ放射への暴露から乾燥や損傷を防止獣医軟膏、。 </li><li> 0.9リットルでケタミン/キシラジン体積（100 mg / kgをkgのケタミン+ 5mg / kgのキシラジンKG）は、実験に先立って、または使用イソフルラン麻酔（2-3％（）の腹腔内注射（IP）を使用して動物を麻酔/実験中の最小ガス流量）。動物の後肢の反射をチェックすることにより、麻酔を確認します。 </li><li>効果的な音響結合を提供し、関心領域内の光音響プローブを配置するために画像化される領域の周りの皮膚に超音波ゲルを適用する。気泡が超音波カップリングゲル中に存在しないことを確認してください。 </li></ol> 3.プリビュー動作モード<ol><li> 690 nmおよび900 nmおよび10および50 Hzのパルス繰り返し率と撮像波長（複数可）を確立する。音響データ収集システムのためのパラメータを選択します - 1MΩ入力インピーダンス。第12ビットの垂直分解能あたり40メガサンプルのサンプリングレートで各レーザパルス2030のサンプルを取得する。レーザーのQスイッチ出力と取得をトリガーする。 </li><li>オペレータと患者の両方が光励起波長（群）に適合した保護メガネを使用していることを確認してください。人体実験19の安全曝露限界を満たすために及び動物における熱ひずみおよび皮膚損傷を防止するために、組織表面での光のフルエンスは、近赤外波長について、実験中は20mJ / cm 2程度以下に維持されるように、レーザパワーを設定する。 </li><li>レーザーのパルス繰り返しレートに対応するフレームレートで三次元画像を可視化できるようにする処理アルゴリズムのGPU実装とプリビューソフトウェアを起動します。 </li><li>プローブおよび/または可視化の性能を最適化し、目的の構造を局所化するために、撮像対象を移動させる。 </li></ol> 4.データ収集<ol><li> （ハンドヘルド）モードを走査するためのデータ収集。 </li><li>必要であれば、関心領域のコントラストを豊かにするための取得に先立って造影剤を注入する。 注：私たちの実験では、我々は造影人間イメージングを行っていない。しかし、様々な造影剤は、潜在的にこの目的に使用することができる。インドシアニングリーン（ICG）は、成人の体重を2mg / kgでの最大推奨用量でのコントラストの強調のために使用することができる臨床的に承認された光学造影剤の一例である。 </li><li>プレビューソフトウェアの実行を維持し3.1で説明したパラメータを持つデータ取得のためのハードウェアを起動します。静かに関心のある構造を追跡するために、画像化領域の周囲にプローブを移動させる。 注：複数のレーザ波長で画像を同時に取得されると、ハンドヘルドモードでのプローブの運動の速度は、（好ましくは2mm /秒未満に著しく減少されなければならないスペクトル的に混合されていない画像の動きに関連するアーチファクトを回避するために、50Hzのレーザパルス繰返し率）である。 </li><li>定常モードのためのデータ収集。 </li><li>ホルダーに、撮像対象（ 例えば 、動物）とハンドヘルドプローブをマウントし、プレビューソフトウェアの実行を維持し3.1で説明したパラメータを使用して取得を開始します。 </li><li>関心領域内の動的な生物学的事象を可視化するために、実験中の同じ位置における光音響プローブと撮像部を保持する。 </li><li>関心領域内の動的配布を追跡するために造影剤を注入する。 注：我々のマウス実験では、インドシアニングリーン（ICG）はコントラスト強調のために使用した。一般的なガイドラインとして、ICGの10ナノモル、または0.4〜10mg / kgの量は、in vivoでのマルチスペクトルoptoacousticsで検出可能なコントラストを作成するために、マウスの循環中に導入されなければならない。 注：造影剤は、でなければなりませんそれぞれの機関によって、ヒトおよび/または動物の使用のために承認した。 </li></ol> 5.実験ファイナライズ<ol><li>レーザーを停止します。 </li><li>撮像された領域から光音響プローブを除去。動物実験では、麻酔の供給を停止する。 </li><li>暖かいそれを維持し、それが完全に麻酔から回復するまで他の動物との接触を防ぐために、赤外線ヒーターの下に動物を配置します。麻酔からの回復中に無人の動物を放置しないでください。 </li></ol> 6.オフラインデータ処理<ol><li>データ処理に使用されるソフトウェアアプリケーションで取得した光音響信号を含むファイルを読み込む。 </li><li>各フレームおよび各波長に対する光吸収のボリュメトリック画像に対応する3次元マトリクス配列を得るために再構成アルゴリズムを使用する。 注：再構成のために、そのようなheterogeneなどの要因を歪ませるためのアルゴリズムのアカウンティングを使用することが好ましい吸収されたエネルギー分布のより定量的な表現を得るために、撮像対象でITIES減衰、最終的な帯域幅と検出素子と光フルエンス変動の幾何学的形状の影響。 </li><li>各多波長フレーム、試料中に存在する各吸収性物質の光吸収を表す3次元マトリックスアレイの新しいセットから、取得するアンミキシングアルゴリズムを使用する。 </li><li>必要に応じて、さらなる生物学的に関連するパラメータの可視化および読み取りを容易にするために、光吸収分布を表す行列アレイを処理する。 </li></ol>

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<li>Ntziachristos, V., Razansky, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+by+means+of+multispectral+optoacoustic+tomography+%28MSOT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+reviews%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging by means of multispectral optoacoustic tomography (MSOT).</a> Chemical reviews. 110 (5), 2783-2794 (2010).</li>
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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

小動物研究に光音響イメージング技術によって提供されるユニークな利点は、 例えば想定診断と治療モニタリングアプリケーションの数と、臨床の実践に技術を変換するための強力な動機を作成している。、乳癌および皮膚癌、炎症または末梢血管疾患で。しかし、効果的な断層像取得ジオメトリを作成するための照明源と検出素子の十分な数で囲むことができるマウス又は小さな動物とは対照的に、人体全身の制限された光の侵入ヒンダー実装の大きな寸法MRIやCTと同様に光音響トモグラフィー。このような携帯用、高分解能、非電離励起およびリアルタイム容量と超音波の利点の多くを共有しているとして示さハンドヘルド光音響イメージングプローブは、人間のイメージングのために理想的である。それにもかかわらず、最適なハードウェア設計とRECO光音響イメージング用nstruction手順はかなり一般的に超音波スキャナで使用されるものとは異なる。これは、パルス繰り返し周波数、検出された超音波応答の振幅、下線信号励起機構と、得られた画像再構成アプローチは、2つのモダリティの最適な動作特性との間の基本的な違いである。また、この研究で実証されたように、撮像対象からの完全な容積の断層デー...

光音響（光音響）イメージング技術1-5が提供するユニークな利点を活用する新しいアプリケーションのさまざまな出版物を網羅増え続けることで明示されるよう、生物学および医学研究コミュニティからの関心の高まりを魅了しています。具体的には、はるかに光の拡散限界を超えた深さで高時空間解像度の画像スペクトル的に独特の光吸収剤の能力は、機能と分子イメージング6-10前例のない機能を開きます。 実際、臨床診療への光音響技術の翻訳は多くの疾患の診断および治療のモニタリングに有望な見通しが付属しています。しかし、光学的に散乱された光子を吸収組織や光音響現象に関連した一般的に弱い応答の限られた伝播は、この方法の適用可能な深さを制限。結果として、ハンドヘルドoptoa内視鏡システムは、自然のオリフィス13を介してそれらを挿入することによって、身体内から画像を提供するために使用されている間cousticプローブボディ11,12の外部からアクセス可能な画像部分に試みられてきた。そのような女性の胸のような人間の体の一部の低吸収部も、断層光音響スキャナ14,15でアクセスできます。それは同様に超音波検査を、大きな汎用性を可能にするので特に興味深いのは、手持ち式のアプローチである。ここでは、光音響イメージングのための一般的な超音波リニアアレイプローブの適応は、主に超音波およびoptoacoustics間の断層画像化要件の根本的な違いにより、依然として厳しい。標準的な超音波検査の高いフレームレートはkHzの範囲で高いパルス繰り返し周波数を用いた送受信シーケンシャル方式で有効にされているが、リアルタイムの三次元光音響イメージングは​​、単一のintから体積断層撮影データを同時に収集することにより達成されるレーザーパルスをerrogating。これにより、高品質の光音響イメージングは​​、撮像対象の周りに可能な限り大きな立体角から3次元データの取得を意味する。 最近、我々はリアルタイムで16を 3次元（体積）イメージングのための最初のハンドヘルド光音響プローブを導入しました。システムは、90°の角度をカバーする球面上に配置された圧電素子256（ 図1A中の青色のドット）の二次元配列に基づいている。約3×3mmの2の個々の要素の大きさ、ならびにそれらの配向および周波数帯域幅（約2-6メガヘルツ）は、 図中の球体の中心（黒立方体を囲むセンチメートルスケールのボリュームから有効な信号収集を保証する1A）。任意の波長SUSCように、撮像領域の光学的励起は、アレイの中央の円筒形キャビティを通って挿入繊維束を備えて​​いる繊維束を透過するのeptibleは、イメージングのために使用することができる。光ファイバ束と共にトランスデューサのアレイの実際の画像は、 図1Bに示されている。レーザーのパルス繰り返し周波数で決まるフレームレートでリアルタイムイメージングは​​さらに、グラフィックスを用いて有効にされるように、効率的な励起および信号の同時検出は、シングルショット励起（一方のレーザーパルス）と深部組織イメージングを可能にする処理ユニット（GPU）再建手続き17の実装。透明なポリエチレン膜（ 図1C）を有する円筒状ケーシングは、音響的に送信する液体媒体（水）を囲むように、トランスデューサアレイに接続されている。膜はさらに音響ゲルを用いて組織に結合されている。手持ち式の動作モードで使用されているような光音響プローブの画像が図1Dに示されている。 実証THR臨床診断および潜在的な用途の数の重要な利点が付属してリアルタイム機能イメージング能力と組み合わせるeeの次元ハンドヘルド光音響イメージングは​​、例えば、末梢血管疾患などの種々の適応症、リンパ系障害、乳癌、皮膚病変のために想定されている炎症または関節炎18。さらに、高速撮像能力は静止位置に配置されたプローブを用いた動的な生物学的事象の可視化を可能にします。高速波長同調光パラメトリック発振器（OPO）レーザー技術と組み合わせて、このアプローチは、光吸収剤の生体内分布のリアルタイムイメージングを可能にする。これにより、新たな可能性は等しく、例えば 、小動物イメージング用途に出現することができる。、組織血行動態を研究する、 インビボでの細胞追跡、薬物動態、臓器灌流の視覚化は、腫瘍及び心臓血管系、または神経画像の分子イメージング標的。

<table><tbody><tr><td>光パラメトリック発振器(OPO)ベースのレーザー</td><td>Innolas Laser GmbH, Krailling (Germany)</td><td>カスタムメイド</td><td>レーザーは、約10nsecの持続時間と最大80mJ. のエネルギーを持つレーザーパルスを提供します。</td></tr><tr><td>ピエゾコンポジット検出器の球形アレイ</td><td>Imasonic SaS, Voray (France)</td><td>カスタムメイド</td><td>アレイは、球面に分散した256個の圧電センサーで構成されています。 各要素の寸法は3 x 3 mm2、中心周波数は4 MHz、帯域幅は100%です。&nbsp;</td></tr><tr><td>データ収集システム(DAQ)</td><td>Falkenstein Mikrosysteme GmbH、タウフキルヒェン(ドイツ)</td><td>カスタムメイド</td><td>DAQは、毎秒40メガサンプルと2,030サンプルで256の信号を同時に取得します。 入力インピーダンスは1MWです。</td></tr><tr><td>ファイバーバンドル</td><td>CeramOptec GmbH, Bonn (Germany)</td><td>カスタムメイド</td><td>バンドルは、入力と出力にランダムに分布した480本のファイバーで構成されています。 各ファイバーの開口数は0.22です。</td></tr><tr><td>Athymic nude mouse</td><td>Harlan Laboratories (オランダ)</td><td>Athymic nude - Foxn1nu</td><td>マウスは実験時に8週齢(成体)でした。 倫理プロトコルはバイエルン政府によって承認されました(番号55.2.1.54-2632-102-11)</td></tr><tr><td>Bepanthenクリーム</td><td>バイエルAG(ドイツ)</td><td></td><td>麻酔中に目を保護するための獣医軟膏</td></tr><tr><td>データ処理ソフトウェア</td><td>Matlab(Mathworks, Natick, MA, USA)</td><td>カスタムメイド</td><td>データ処理ソフトは、当研究所で開発されました. これにより、各波長での再構成や多波長アンミキシング、さらにデータ処理が可能です。</td></tr><tr><td>水封入部</td><td></td><td>カスタムメイド</td><td>この部品には、皮膚とトランスデューサー要素との間の音響結合媒体として機能する水が含まれています</td></tr><tr><td>インドシアニングリーン (ICG)</td><td>PULSION Medical Systems SE</td><td></td><td>ICG-PULSION (有効成分:インドシアニングリーン色素) は、心臓、循環器、微小循環の診断、肝機能診断、眼科血管造影診断に使用される薬剤です。</td></tr></tbody></table>

ディープティシュ人間血管造影および機能前臨床研究のためのユニバーサルハンドヘルド三次元光音響イメージングプローブリアルタイムで

Universal Hand-held Three-dimensional Optoacoustic Imaging Probe for Deep Tissue Human Angiography and Functional Preclinical Studies in Real Time

高い光学コントラストと優れた空間分解能の排他的な組み合わせにより、光音響学(光音響学)は、光学的に不透明な深い組織で解剖学的、機能的、分子的なコントラストを同時に達成するのに理想的です。最近、小動物研究のための光音響学の応用において大きな可能性が実証されていますが、このイメージング技術を臨床診療に変換するためにも多大な努力が払われています。ここでは、組織の形態と機能の高解像度でスペクトル的に豊富な体積画像をリアルタイムで提供できる、新しく開発された光音響断層撮影アプローチを紹介します。ハンドヘルドモードと静止モードの両方でイメージングシステムを操作するための実験プロトコルの詳細な説明が提供され、マウスモデルとヒトの機能的および分子的研究を含むさまざまな潜在的なシナリオについて紹介されています。3次元でのリアルタイム可視化の可能性と、イメージングプローブの汎用性の高いハンドヘルド設計により、新たに開発されたアプローチは、今日の前臨床研究や臨床診療で使用されるイメージングモダリティの中でもユニークなものとなっています。

代表的な結果は、説明した容積ハンドヘルド光音響プローブの能力を実証し、このセクションで紹介されています。全ての場合において、皮膚表面上の光のフルエンスを20mJ / cm 2と19の安全曝露限界以下に維持した。 ヒト末梢血管系の追跡リア ​​ルタイムでプローブの性能は、図2に紹介されている。この実験の過程で、プローブをゆっくりレーザ動作と800nm ​​の単一波長で健康なヒトボランティアの手に沿って走査した17秒当たり10パルスで、すべてのスキャン位置の血管のリアルタイム可視化が達成されるようになっている。すべての3つの方向の再構成画像の代表最大値投影（MIP）は、 図2に表示される。測定時のリアルタイム可視化はGPUのimplementatioでイネーブルされフィルタ補正逆投影アルゴリズム17のnである。 リアルタイムのマルチスペクトル画像の容量は、図3<...

ここでは、3次元の機能的および分子的なイメージングのための新しく開発されたハンドヘルド光音響(光音響)システムを用いたイメージングのための実験プロトコルの詳細な説明を提供します。実証された強力な性能と汎用性は、前臨床研究および臨床診療における光音響技術の新たな応用分野を定義する可能性があります。

The exclusive combination of high optical contrast and excellent spatial resolution makes optoacoustics (photoacoustics) ideal for simultaneously ...

次の実験の全体的な目標は、3次元、機能、分子イメージングのための新しく開発されたハンドヘルド光音響システムのイメージング機能をリアルタイムで示すことです。これは、組織に保持されたときに光パルスをガイドするファイバーバンドルの周りに電気トランスデューサーであるpizoの球状マトリックスアレイを備えたプローブを使用して達成されます。ナノ秒の持続時間では、光のパルスが超音波応答を励起し、プローブによって捕捉されます。次に、データを使用してリアルタイムの画像再構築を行い、ハンドヘルドモードでのスキャンを可能にします。この結果は、血管形態の深部組織イメージングの実現可能性と、ポータブルシステムによる重要な血行動態および灌流パラメータを示しています。すべての研究室が特に注目しているのは、光学音響、拡散光学、超音波、およびマルチモダリティアプローチに基づく新しい生物医学イメージングツールの開発です。新開発のハンドヘルド光学音響断層撮影システムは、基本的に真の5次元イメージング機能を提供できます。これは、組織の形態と機能の高解像度のスペクトルに富んだ体積イメージングをリアルタイムで提供できることを意味します。ボリュームハンドイメージングアプローチとリアルタイム機能を組み合わせることで、容量を排除することは、臨床診断に重要な利点をもたらします。例えば、末梢血管疾患、リンパ系障害、乳がん、皮膚病変、炎症、関節炎などです。高速波長同調レーザー技術と組み合わせることで、光吸収剤の生体分布をリアルタイムにイメージングすることができます。これが、小動物の分子イメージングアプリケーションでも同様に新しい可能性が生まれる理由です。例えば、生体内細胞追跡、薬物動態の可視化、臓器灌流、またはニューロイメージングの組織血行動態の研究は、ハードウェアを準備することから始める。チューナブル近赤外線レーザー光源を約15分間ウォームアップ時間オンにします。出力を安定させるために、レーザー出力はハンドヘルドプローブに接続されます。プローブは、ファイバーバンドル用の開口部を持つ球の一部を覆うように配置されたピソ電気素子のマトリックスアレイで構成されています。中央でファイバーバンドルを接続して、レーザー出力からハンドヘルドプローブにレーザービームを導きます。次に、ハンドヘルドプローブの球面マトリックス検出アレイを並列データ収集システムに接続し、レーザーのQスイッチ出力によってトリガーされ、プローブの音響結合を準備することによって続行されます。トランスデューサには、光学的および音響的に透明なポリエチレン膜で覆われたマッチングケーシングがあり、皮膚と接触し、アクティブなトランスデューサの表面をケーシングで閉じます。組織表面に対する活性検出面の相対位置によって、有効なイメージング深度が決まります。タンクとプローブの

universal-hand-held-three-dimensional-optoacoustic-imaging-probe-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

光学分解能光音響顕微鏡（OR -...

三次元光学分解能光音響顕微鏡

本研究は、ラットの脳に対して非侵襲的な高周波超音波および光音響ベースのイメージングを行うための新しいプロトコルを説明しています。これにより、動物の頭蓋骨に自然に存在する頭蓋骨孔に信号を向けることにより、深部皮質下領域とその血管パターンを効率的に視覚化します。...

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容量型マイクロ超音波探触子 (による CMUT) 技術に基づく新しいの (米国)...

脳イメージングへの応用による CMUT 技術に基づく新しい超音波プローブの性能を評価するための実験プロトコル

ここでは、インビボで同じ試料上の浅い深度での高分解能画像化と低分解能深部組織画像化の両方が可能な切り替え可能な音響分解能（AR）および光学分解能（OR）光音響顕微鏡法（AR-OR-PAM）...

切り替え可能な音響光学分解能光音響顕微鏡<em&gt;インビボ</em&gt;小動物の血管系イメージング

小型動物での高速インビボ脳イメージングのためのコンパクトパルスレーザダイオード光音響トモグラフィ（PLD-PAT）システムが実証されています。...

高性能小型光音響トモグラフィーシステム<em&gt;インビボ</em&gt;小動物脳イメージング

小動物の非侵襲的な実時間イメージングの臨床ハンドヘルド光音響イメージング...

手持ちの臨床音響小動物の非侵襲的な実時間イメージングによる画像計測

侵襲医療機器の正確かつ効率的な可視化は、非常に多くの超音波ガイド下の低侵襲で重要です。ここでは、超音波イメージング用プローブに対する針先端の位置で空間をローカライズする方法が表示されます。...

三次元超音波針の先端光ファイバー超音波受信機と追跡

広視野イメージングとリアルタイムイメージングを統合したデュアルラスタースキャン光音響イメージャーが設計されました。...

血管可視化のための二重ラスター走査光音響小動物イメージャー

本プロトコルは、 インビボ ヒト皮膚血管系のマルチスペクトル光音響画像の取得を記載する。これらには、機能分析の対象となる発色団と見なされるヘモグロビンとメラニンの定量が含まれます。...

血管研究における機能イメージングのためのマルチスペクトル光音響断層撮影

卵巣/付属器病変の経膣イメージングのための超音波および光音響イメージングプロトコルの同時登録を報告します。このプロトコルは、他のトランスレーショナル光音響イメージング研究、特に光音響信号の検出に市販の超音波アレイを使用し、イメージングに標準的な遅延和ビームフォーミングアルゴリズムを使用する研究にとって価値がある可能性があります。...

卵巣病変の経膣イメージングのための同時登録された超音波および光音響イメージングプロトコル

学ぶハンドヘルド光音響イメージングシステムによる深部組織の三次元リアルタイム血管造影法。球形マトリクスアレイプローブを用いて血管形態と血流パラメータを可視化し、前臨床研究や臨床診断への応用可能性を示す。

ディープティシュ人間血管造影および機能前臨床研究のためのユニバーサルハンドヘルド三次元光音響イメージングプローブリアルタイムで

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