Name: 組織学的および機能的特性：メチルニトロソ尿素（MNU）は、網膜変性·再生ゼブラフィッシュでの誘発 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: 学ぶメチルニトロソ尿素（MNU）を用いたゼブラフィッシュの網膜変性・再生誘導法。視覚機能（OKR測定）と組織学的・免疫組織化学的手法を組み合わせ、網膜の形態・細胞変化を定量化する再現性の高いモデルです。

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私たちは、彼らの優れた技術支援に対して、Monika Kilchenmann、Federica Bisignani、Agathe Dudaに感謝します。

全ての実験は、ビジョンと眼科の研究のための協会（ARVO）の眼科と視覚研究における動物の使用に関する声明に従って。 1。動物<ol><li> 26.5℃の温度と10分の14時間の明/暗サイクル15と水中での標準的な条件下で6〜12ヶ月の間熟成さAB（オレゴン州）株の野生型ゼブラフィッシュ（ ゼブラフィッシュ ） を維持する。 </li><li>カントン獣医庁の承認後に動物実験のため、関係機関の動物保護ガイドラインに従ってください。 </li></ol> 2 MNUトリートメント<ol><li> N -メチル- N個の -nitrosourea（MNU）の150 mg / Lの乾燥物質を含む水を準備します。注意！ MNUは有毒である。胎児にがん、遺伝性の遺伝子損傷または危害の原因となります。 </li><li>室温で60分間、MNUを含む水中でのゼブラフィッシュをインキュベートする。 </li><li>で迅速にゼブラフィッシュをすすぐ新鮮な水とMNUずに新しい水槽に魚を入れた。限りの実験のために、必要に応じて標準的な条件下で魚を維持してください。 </li></ol> 3視力測定<ol><li> 、視運動システムを起動し、メニューから「テスト」を選択し、を「シンプルな階段」、「視力（周波数）」と「ランダム/セパレート「16オプションを設定します。 </li><li>視運動システム上で1メートル、約500 mlの水で満たされた輸液ボトルを取り付けます。 </li><li>検査室で1ゼブラフィッシュを置き、注入ボトルに接続します。視運動系での検査室を配置します。 </li><li>測定を開始し、コンピュータの画面上でリアルタイムに眼球運動を観察します。否定応答は、（「いいえ」）の駅で観察されたものと同様のランダムな目の動きを表しているのに対し、それによって、肯定的な応答は（「はい」）、正しい方向に連続したサッカードとして定義されている進の格子。ゼブラフィッシュ出品物の目が3つ以上の後続の視運動性応答（OKR）の場合、を押して「はい」。そうでない場合、キーを押し「いいえ」。 </li><li>メニューの「結果」の下に、視運動性刺激の空間周波数の閾値を決定することによって、ソフトウェアによって計算された視力を抽出する。 </li></ol> 4。組織学<ol><li>エチル3 - アミノ安息香酸メタンスルホネート（200〜300 mg / Lの）の過剰投与によりゼブラフィッシュを安楽死させると目を脱核。 </li><li> 12時間、4℃でリン酸緩衝生理食塩水（PBS）中4％パラホルムアルデヒド（PFA）で全体の目を固定した後、段階的なアルコール系でサンプルを脱水する。 </li><li>パラフィンにサンプルを埋め込む、視神経乳頭（ONH）を介して5μmの切片を切断し、ガラススライド上にマウントします。 </li><li> 4分間hemalumとdeparaffizedパラフィン切片を染色し、0.2％の塩酸ACIが続く蒸留水にスライドを2回浸しdおよび0.8％アンモニア。少なくとも10分（H＆E）水道水でhemalum染色の現像後3分間エオシン切片を染色する。 </li><li>メディアをマウントするには、脱水のスライドを埋め込むし、光学顕微鏡下でスライドを観察します。 </li></ol> 5。免疫組織化学<ol><li>ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼdUTPニック末端標識（TUNEL） <ol><li> 15分間室温で20μg/ mlのプロテ​​イナーゼKで脱パラフィン切片をインキュベート。トリスでセクションを3回洗浄を5分間ずつ生理食塩水（TBS）をバッファリング。 </li><li> 60分間37℃の加湿チャンバ内で50μlのTUNEL反応混合物（10％標識溶液および90％の酵素溶液）を用いて切片をインキュベートする。 5分ごとにTBSで3回洗浄する。 </li><li> DAPIを含む封入剤でスライドをマウントし、蛍光顕微鏡下でスライドを観察します。 </li></ol></li><li>増殖細胞核抗原（PCNA）染色<ol><li> 3分間の抗原回復緩衝液（トリス-EDTA + 0.05％ツイーン20、pHが9.0）中で脱パラフィン化切片を沸騰し、各5分間TBSで3回洗浄。 100μlを1時間室温で溶液（TBS + 10％ヤギ正常血清+ 1％ウシ血清アルブミン、pH7.6の）ブロッキング遮断する。 </li><li> 4℃で一晩、加湿チャンバー内で200倍希釈1中の抗PCNA一次抗体で染色する。 5分間ずつ、TBS + Tween 20で3回洗浄する。 </li><li> 1時間室温で500倍希釈1で適切な二次抗体で検出を終了します。 </li><li> DAPIを含む封入剤でスライドをマウントし、蛍光顕微鏡下でスライドを観察します。 </li></ol></li></ol>

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<li>Beck, J. C., Gilland, E., Tank, D. W., Baker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+the+ontogeny+of+optokinetic+and+vestibulo-ocular+behaviors+in+zebrafish%2C+medaka%2C+and+goldfish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Quantifying the ontogeny of optokinetic and vestibulo-ocular behaviors in zebrafish, medaka, and goldfish.</a> J. Neurophysiol. 92 (6), 3546-3561 (2004).</li>
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<li>Yurco, P., Cameron, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+M%C3%BCller+glia+to+retinal+injury+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Responses of Müller glia to retinal injury in adult zebrafish.</a> Vision Res. 45, 991-1002 (2005).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

以前は、私たちのグループは、ゼブラフィッシュのシステム9にげっ歯類から光受容体変性のMNUモデルを転送した。その後のイベントは、説明し、30日まで追跡した。この期間では、完全な網膜の形態学的変性と再生は、初期治療後に発生した。まず、組織学はそれに対応して8日目に最低で一日3から減少ロッド細胞数を明らかにし、TUNEL染色は、3日MNU処理後の桿体のアポトーシスを識別します。再生は、増殖細胞はこれがありませんが、増殖の増加INLとは対照的であり、5日目で最大の観察期間の終わりまで観察することができ、ONLで5日目で最大で、3日目にINLで開始毛様体辺縁帯は、いくつかのPCNA陽性細胞は、未処理の網膜で発見された網膜の唯一の場所である15日後に観察された。これは、常に網膜神経新生througで領域を示しているハウト寿命14。ゼブラフィッシュにおける薬理学的に損傷した光受容体の再生に関与する細胞型の識別は、この原稿の焦点では​​ありませんでした。ただし、以前の文献にプロセスがミュラー細胞9,17,18であることが示唆されているINL内再生細胞に起因する。 <p clas...

ビジョンは、人間のための最も本質的な意味であり、その障害は、高社会経済的影響力を持っています。先進国では、網膜変性疾患は、高齢者1の間で失明や失明の主な原因である。ほとんどの退行性網膜疾患の原因は部分的にしか理解されており、治療のソリューションは、失われた視力を回復することは非常に限られています。網膜色素変性症は、一次光受容体の損失2-3で網膜変性疾患の代表例である。N -メチル- Nの -nitrosourea（MNU）は網膜変性を誘導するので、広く一次光受容体細胞死4で疾患をモデル化するために、齧歯類において使用される。これは、アルキル化剤であり、通常、露光5-7後数ヶ月現れる良性および悪性腫瘍をもたらす。また、短期間の観察期間内の特定の光受容体細胞死を引き起こす。これにより、網膜層の損失structu再度、重要な網膜の菲薄化は、濃度依存的に観察された。網膜グリア細胞が活性化されたが、網膜色素上皮（RPE）には変化は見られなかった。小胞体（ER）ストレス関連アポトーシス、網膜8にMNU作用の主要経路であると思われる。 私たちは最近、ゼブラフィッシュ9の光受容体の変性を誘導するために、化学モデルとしてMNUを導入しています。他の理由の中で、ゼブラフィッシュ（ ゼブラフィッシュ ） は、他の脊椎動物10のそれに、その視覚系の類似性の視覚の研究に重要になってきた。外側の網膜は、紫外線、短、中にピーク感度、および可視スペクトルの長波長と1桿体タイプで四つの異なるコーンタイプに分類することができ、光受容体が含まれています。内顆粒層（INL）は、バイポーラ、水平、およびアマクリン介在ニューロンの細胞体はWELとして、発見されたミュラーグリア細胞の細胞体としてlである。外網状層（OPL）は光受容体と網膜内層の間のシナプス接合レンズに最も近い細胞層に対し、視神経および視神経管を備えた長い軸索を形成する成分神経節細胞層（GC）であり、形成されている。神経節細胞、および内顆粒層における細胞間のシナプス結合は内網状層（IPL）11が形成されている。 RPEは神経感覚網膜の外側にあると長い頂端微絨毛12で光受容体外側セグメントを取り囲んでいる。さらに、ゼブラフィッシュは、高度に再生し、傷害、脳、網膜、脊髄、心臓、および他の組織13を再成長させることができる。網膜損傷が発生すると、ミュラー細胞であると考えられているINL中の細胞は、活性化され、各種の網膜細胞型に分化する可能性を有している。さらに、それらはまた、ONLに位置しているロッド前駆体を生成する。もうそう新しい細胞と大人のゼブラフィッシュの網膜を供給するス間は、毛様体辺縁帯です。このソースは連続的に成長しているゼブラフィッシュの眼14に桿体光受容体の一定の密度を達成するために必要とされる。 MNUモデルは、網膜組織のための単純かつ再現性の変性/再生のアプローチとして使用することができる。によるゼブラフィッシュにおける生物学的プロセスの特定の類似性およびヒトにおいてこれは、関連細胞死経路を識別するためにドアを開ける可能性があり、潜在的な神経保護薬をスクリーニングする。私たちのグループからの以前の研究に基づいて、私たちは今、実験室のビデオ9に従って機能的な変更を含む、網膜変性およびその結果としての再生のこのMNU誘発のゼブラフィッシュモデルの方法を示している。

<table><tbody><tr><td>Acetic</td><td>acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Ammonia</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>294993</td><td>0.80%</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>05470</td><td></td></tr><tr><td>Dako Pen</td><td>Dako, Glostrup, Danmark</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>DAPIマウントメディウム</td><td>Vector Labs, Burlingame, CA, USA</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>45260</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>2860</td><td>100%, 96%, 70%</td></tr><tr><td>エチレンジアミン四酢酸 (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>ED Ethyl</td><td></td></tr><tr><td>3-aminobenzoate methanesulfonate salt</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>E10521</td><td>Tricaine</td></tr><tr><td>Eukitt</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>3989</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit Alexa 594</td><td>Life Technologies, Zug, Switzerland&nbsp;</td><td>A11012</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ正常血清</td><td>Dako, Glostrup, Danmark</td><td>X0907</td><td></td></tr><tr><td>塩酸</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td></td><td>320331 0.20%</td></tr><tr><td>In situ Cell Death Detection Kit</td><td>Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Switzerland</td><td>11684795910</td><td>TUNEL Kit</td></tr><tr><td>Mayer's hemalum solution</td><td>Merck, Darmstadt, Germany</td><td>109249</td><td></td></tr><tr><td>メチルニトロソウレア (MNU)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>N4766</td><td>Toxic</td></tr><tr><td>OptoMotry</td><td>CerebralMechanics, Lethbridge, AB, Canada</td><td>n.a.</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド (PFA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>P5368</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>ダコ、グロストラップ、デンマーク</td><td>S3004</td><td></td></tr><tr><td>ウサギ抗PCNA&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA</td><td>sc-33756</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus glass slides</td><td>Gehard Menzel GmbH, Braunschweig, Germany</td><td>10149870</td><td></td></tr><tr><td>Tris buffered saline (TBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>P5912</td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland</td><td>534056</td><td></td></tr><tr><td>ゼブラフィッシュ (Danio rerio) AB (オレゴン) 株</td><td>University of Fribourg, Dept. of Biology</td><td>n.a.</td><td>自社魚類施設</td></tr></tbody></table>

組織学的および機能的特性：メチルニトロソ尿素（mnu）は、網膜変性·再生ゼブラフィッシュでの誘発

Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

産業界における失明の大部分を光受容体の損傷アカウントを生じたとの網膜変性疾患、 例えば網膜色素変性症、。動物モデルは、そのような疾患を研究するために極めて重要重要である。この点において、感光体特異的毒素N -メチル- Nの -nitrosourea（MNU）が広く薬理学的に網膜変性を誘導するために、齧歯類において使用されてきた。以前は、私たちはゼブラフィッシュにおけるMNU誘発性網膜変性モデル、視覚的な研究の別の人気モデルシステムを構築しています。 哺乳動物への魅力的な違いは、大人のゼブラフィッシュの網膜の損傷後の再生に永続的な神経発生である。この観察を定量化するために、私たちは、大人のゼブラフィッシュで視力測定を採用している。これにより、視運動反射は、非麻酔下の魚における機能変化を追跡するために使用された。これは、組織学ならびに免疫組織化学的stainiを補充した開発形態変化を相関させるためにアポトーシス（TUNEL）および増殖（PCNA）のためにngの。 要約すると、光受容体のアポトーシスが三日外顆粒層（ONL）における細胞の顕著な減少が続いているMNU処理、後に発生します。その後、内顆粒層（INL）及びONLにおける細胞の増殖が観察される。ここで、私たちは完全な組織学的だけでなく、機能的な再生だけでなく、30日の時間経過にわたって生じることを明らかにした。今、私たちは、ビデオ形式でMNUを使用して、ゼブラフィッシュの網膜変性および再生を定量化し、フォローアップする方法を示している。

視力： 実験の設定[空間周波数：0.042サークル/度（c / d）前記コントラスト：100％;ドリフト速度：20度/秒（D / src）の;バックライト輝度：152 CD / m 2]と本研究の成人ゼブラフィッシュのOKR評価を可能にした。よく手順を容認それぞれゼブラフィッシュ、10分 - VA測定の平均時間は約5であった。 MNUの暴露前視力は0.577±0.014サイクル/度（C / D）であった。 図1に、150 mg / LのMNUの適用後に視力経過を示す。 1日目から開始して、測定は、視力の著しい減少を明らかにした8日目から始めて3日目での最小値に到達し、視力の増加は30日MNU曝露後の視力の完全な回復を示す、発生します。統計分析のためにボンフェローニの多重比較検定に続く一方向ANOVAを適用した。これにより、視力betweの違いなく、日15および30のための、治療後のベースライン及び測定専用1日目、3、5ために有意であり、そして8た（p &lt;0.001、それぞれ）。 <p class="jove_c...

ここで私たちは、網膜変性および再生及び成人のゼブラフィッシュにおけるN -メチル- N個の -nitrosoureaを使用して視覚機能への影響の定量化を実証する。視力の喪失や減少感光番号が内顆粒層での増殖が行われました。完全な形態学的および機能的な再生は、30日、最初の治療後に発生した。

組織学的および機能的特性：メチルニトロソ尿素（MNU）は、網膜変性·再生ゼブラフィッシュでの誘発

Retinal degenerative diseases, e.g. retinitis pigmentosa, with resulting photoreceptor damage account for the majority of vision loss in the industrial ...

この手順の全体的な目標は、nメチルとニトロueaaを使用して、成体のゼブラフィッシュに網膜変性とそれに続く再生を誘発することです。これは、まず野生型ゼブラフィッシュをNメチルN亜硝酸尿素(MNU)を含む水でインキュベートすることによって達成されます。次の視覚機能は、視運動反応または OKR を測定し、さまざまな時点での視力を計算することによって定量化されます。治療後、ゼブラフィッシュを安楽死させ、眼を核形成して組織学的検査を行い、h染色とe染色を行い、網膜組織の形態学的変化を観察します。最後に、細胞の変化は、細胞死と細胞増殖のための特異的な染色によって網膜で視覚化されます。最終的には、視力の測定と形態学的および細胞的変化の定量化を使用して、網膜Dと再生を視覚化します。この薬理学的モデルの主な利点は、それがシンプルで高速に使用でき、成体のゼブラフィッシュで信頼性の高い局所変性と再生を誘発することです NMメチルnニトロソ尿素またはMNU治療を実施するには、乾燥MNUのリットルあたり150ミリグラムを含む水を準備することから始めます。nmメチル尿素と亜硝酸尿素は有毒であり、がん、遺伝性の遺伝的損傷または害を引き起こす可能性があるため、取り扱いには注意して進めてください。胎児は、AB型を濾過しながら、標準的な条件下で生後6ヶ月から12ヶ月のゼブラフィッシュを維持します。ゼブラフィッシュをMNUの水に移し、室温で60分間インキュベートします。次に、真水を使用して魚をすばやくすすぎ、次にMNUを使用せずに新しい水槽に移します。実験に必要な限り、魚を標準条件下で維持します。モーターシステムを起動して視力測定を行う準備をします。次に、メニューから[テスト]を選択し、オプションを[単純な階段]に設定します。モーターシステムの約1メートル上に500ミリリットルの水で満たされた輸液ボトルを取り付けます。ゼブラフィッシュ1匹を診察室に入れ、輸液ボトルに接続します。次に、検査チャンバーを自動車システムに配置します。次に、測定を開始し、パソコンの画面上でリアルタイムで眼球運動を観察します。正の応答または「はい」は、正しい方向への連続した秒数として定義され、否定的な応答または「いいえ」は、静止した格子で観察されるものと同様のランダムな眼球運動を表します。ゼブラフィッシュの目が3回以上続いて視運動反応またはOKRを示す場合は、はいを押します。そうでない場合は、[いいえ]を押します。メニューの結果の下で、視運動刺激の空間周波数の閾値を決定することによりソフトウェアによって計算された視力を抽出し、組織学的分析を実施します。テキストプロトコルに従ってゼブラフィッシュを安楽死させ、核形成を行った後、目はPBS中のホルムアルデヒドの4%パワーを使用して無傷の目を摂氏4度に固定し、その後、等級付けされたアルコールシリーズを使用してサンプルを脱水し、サンプルをパラフィンに埋め込み、視神経頭またはONHを介して5マイクロメートルの切片を切断し、スライドガラスに取り付けます。次に、Alamを使用して脱炭素切片を5分間染色した後、スライドを蒸留水に2回浸し、続いて0.2%塩酸と0.8%アンモニアに浸します。スライドを水道水に少なくとも10分間移します。スライドをエタノールシリーズで洗浄および脱水した後、切片を3分間エオシンに移します。封入剤を使用してそれらを埋め込み、光学顕微鏡を使用して、末端、酸素ヌクレオチドトランスフェラーゼ、DUPT Nick n標識、またはトンネルのサンプルを観察します。1ミリリットルあたり20マイクログラムのプロナーゼKをde parize切片に添加し、室温で20分間インキュベートします。トリス緩衝生理食塩水を使用して切片を3回、それぞれ5分間洗浄した後、切片に50マイクロリットルのトンネル反応混合物を加え、摂氏37度の加湿チャンバーで60分間インキュベートします。サンプルを洗浄し、5分間ずつ3回トリスした後、dappyを含む封入剤を使用して、その前のスライドを蛍光顕微鏡でマウントし、増殖細胞核抗原またはPCNA染色を行います。サンプルを抗原賦活化、緩衝液、3分間煮沸した後、ブロッキングバッファーを使用してTB S3で1時間5分間洗浄し、サンプルを室温で1時間インキュベートします。次に、抗PC NAを1〜200希釈します。一次抗体は、TBS plus tweenでサンプルを5分間ずつ23回洗浄した後、加湿チャンバー内で摂氏4度で一晩インキュベートします。二次抗体を1〜500希釈して、サンプルを室温で1時間インキュベートします。dpiを含む封入剤をスライドに封入した後、蛍光顕微鏡で観察します。この図は、MNU1リットルあたり150マイクログラムを適用した後の成魚のゼブラフィッシュの視力経過を示しています。1日目から、測定値は、視力の顕著な低下が3日目に最小値に達し、値の増加が明らかになりました。ゼブラフィッシュの眼の網膜変性の組織学的分析を通じて見られるように、30日目に完全に回復しました。MNU治療後に30日間追跡されたのは、3日目から始まるONLの空洞形成によるINLの破壊が含まれ、8日目には感覚網膜のさまざまな層での陽性のトンネル染色を通じてロッドONLの最大損失が観察されました。MNU治療後の網膜変性は、3日目にONLにトンネル陽性細胞の大部分が見つかったアポトーシスによって引き起こされたことが観察されました。しかし、死にかけている細胞は、同じ時点でINLでも見られました。このビデオを見れば、成魚のゼブラフィッシュ成魚にmとuの治療によって網膜変性を誘導する方法や、OKR測定と免疫組織化学的手順を用いて機能的および形態学的変化を定量化する方法について、十分に理解できるはずです。

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生物学

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ゼブラフィッシュは、脊椎動物の網膜変性・再生のメカニズムを勉強する人気動物モデルです。このプロトコルでは、ローカライズされた外傷の内側の網膜に最小の被害で網膜の外側を中断することを誘導する方法について説明します。その後、我々 は生体内で網膜の形態と網膜再生を通してミュラー...

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MRイメージングと生体内追跡非侵襲のための酸化鉄ナノ粒子で標識ヒトES細胞とhMSCs

ヒトの急性腎臓損傷（AKI）は腎臓のネフロンを構成する上皮細胞の損傷によって引き起こされる一般的な臨床上の問題であり、AKIは50から70パーセント1の高い死亡率に関連付けられています。この現象を導くメカニズムと限界がよくわかっていないままにかかわらず、上皮細胞の破壊に続いて、ネフロンは、再生する機能が制限されています。このビデオの記事では、我々はターゲットレーザーのゼブラフィッシュ胚の腎臓で腎臓のネフロン細胞の切除、または前腎のための私たちのテクニックを説明します。私たちの新しいメソッドは、AKIの腎毒性誘発性のモデルを補完し、腎臓のネフロンにおける上皮再生に関連付けられている細胞と分子の変化の高解像度の理解を得るために使用することができます。...

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学ぶメチルニトロソ尿素（MNU）を用いたゼブラフィッシュの網膜変性・再生誘導法。視覚機能（OKR測定）と組織学的・免疫組織化学的手法を組み合わせ、網膜の形態・細胞変化を定量化する再現性の高いモデルです。

組織学的および機能的特性：メチルニトロソ尿素（MNU）は、網膜変性·再生ゼブラフィッシュでの誘発

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