実行するには非常に再現性と簡単な方法インビボ眼摘出

この手順の全体的な目標は、麻酔をかけたマウスから非常に簡単で再現性のある方法で眼を成功裏に除去することです。これは、最初に湾曲した鉗子で眼瞼をそっと押して眼球を変位させることによって達成されます。手順の2番目のステップは、鉗子を目の後ろに導き、視神経をしっかりとつかむことです。

3番目のステップは、円を描く動きをすることです。鉗子を握った手でマウス本体は同じ方向に動きます。最後のステップは、視神経の収縮を確実にするために動きの速度を徐々に上げ、眼球の剥離をもたらすことです。

最終的に、眼は、例えば、マウスの脳内のさまざまな感覚遮断可塑性プロセスを明らかにすることにより、AFR視覚経路を縦方向に研究するために使用することができます。この技術の主な利点は、縫合や鈍的解剖を頻繁に使用する既存の方法と比較して、私たちのアイション方法は単に視神経の狭窄に基づいているため、出血が最小限に抑えられ、非常に簡単に習得できることです。生理食塩水中のケタミンとマイネの混合物の腹腔内注射を使用してマウスに麻酔をかけることから始めます。

マウスの反射神経を確認して鎮静を確認します。鉗子でつま先をつまみ、反射反応を確認します。反応がない場合は、綿の先端のアプリケーターと70%エタノールを使用して、まぶたと目の周りの領域をきれいにします。

まばたき反応がない場合は、眼を核形成します。マウスを安定した、平らで滑らかで乾燥した表面に置きます。湾曲した鋸歯状の鉗子の先端をガラスビーズ滅菌器で滅菌します。

最適なチップサイズは 0.5 x 0.4 mm です。次に、眼球がソケットから移動して視神経に到達できるようになるまで、鉗子で眼瞭をそっと押します。次に、鉗子を目の後ろに導き、視神経をつかんだ状態で視神経をしっかりと押し続けます 鉗子を円を描くようにゆっくりと動かし始めます 抵抗が最も少ない方向。

マウスを手術台に当てて、マウスを固定する必要があります。その体も動くはずです。7〜15回の円運動の後、視神経が収縮し、眼球が離れるまで徐々に速度を上げます。

回転が速すぎたり、鉗子が強く引っ張られたりすると、神経が早々に壊れ、嘆願が続きます。麻酔を逆転させることから始めます。マウスに生理食塩水中のaamaz all塩酸塩の腹腔内注射を行います。

その後、0.05を筋肉内投与します。メロキシカムや鎮痛剤などの準備された鎮痛剤のミリリットルは、24時間ごとに投与する必要があります。.次に、角膜の脱水を防ぐために、残りの目に目の軟膏を塗布します。

もし手術前にこれを塗っていたら、テーブルに汚れていたでしょう。マウスを保持ケージに移動し、加熱プレートまたは毛布を使用してマウスの体温を制御し、動物が運動制御を取り戻したときにマウスが回復するまで、マウスをホームケージに戻します。眼球の摘出が成功すると、出血がないこと、または眼窩組織や眼窩に明らかな物理的損傷がないことが特徴となります。

除核された眼は、滑らかな角膜や脈絡膜のような無傷の球の特徴を持っている必要があります。視神経は網膜の基部で収縮している必要があります。動物の神経の残りの長さはきれいな切り傷を示すべきであり、周囲の脳領域が損傷を受けないはずです。

これらの技術を用いて実験を行い、続いて放射性in C twoハイブリダイゼーションによるZ 2 68 mRNAの検出を行い、大脳皮質における視覚的に誘導された神経活動を明らかにしました。視覚刺激対照とは対照的に、両眼と核を持つマウスは、視覚入力が完全に欠如しているため、左右の視覚野で基礎活動を示しました。このように、視覚野と非視覚野の境界が明らかになりました。

単眼核出術は、2つの単眼駆動領域が、除去色素の反対側の視覚野で低活動であることを明らかにしました。これらの領域は、中央の両眼帯の内側および横方向に位置しています。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば1分以内に完了できます。

したがって、耳鼻咽喉科の視覚経路における活性、可塑性、またはその他の現象を調べるための効率的な方法を提供します。