Name: ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO） (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: 学ぶラットにおける塞栓性脳卒中モデルの作成法。同種血血栓を用いた中大脳動脈閉塞によりヒトの虚血性脳卒中を模倣し、血栓溶解療法の前臨床研究に有用な再現性の高い実験プロトコルを確立する。

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この作業は、国立衛生研究所の助成金HL087990（G.L.）によって支援されました。

倫理に関する声明：オスの成体Sprague-Dawleyラット（330〜380グラムの重さ）が、このプロトコルで使用されていた。このプロトコルは、LSUの健康科学センター、シュリーブポートで施設内動物管理使用委員会（IACUC）によって承認され、（第8版、全米科学アカデミー「実験動物の管理と使用に関する指針」に準拠している、2011た）。 変性PE-50チューブの調製<ol><li>徐々チューブを柔らかく、手でガス火の上に長さ30cm、PE-50チューブを握り。静かにチューブを伸ばす。 </li><li>デジタルノギス（ 図1）を使用して、延伸管上のポイントを選択し、それをマークし、長さ1cmの先端部（外径：0.30〜0.34ミリメートル）で長さ25cmのセグメントに修正されたPE-50チューブをカット。 </li></ol>同種血の塊の調製<ol><li> 70％N 2 Oおよび30％O中のイソフルランでラット（誘導のための5％、維持2-3％）で麻酔&lt;採血前フェイスマスクによるサブ&gt; 2。つま先のピンチによって麻酔を確認してください。 </li><li>発表された方法4でドナーラットの大腿動脈カニュレーションを行い、20cm長のPE-50チューブに直接大腿動脈の血液を移す。血液を凝固さ、室温で2時間チューブを配置し、その後、4℃で22時間、チューブを保持している。注：ステップ3.1で説明したようにカニューレ挿入は無菌技術を用いて行われる。ドナーラットをさらにサンプリングのために回収する。 </li><li> 50ミリメートルのセグメントに、PE-50チューブをカットし、生理食塩水を含む滅菌ペトリ皿にチューブから血餅を洗い流す。 </li><li>長さ60mmのPE-10チューブに50ミリメートルに長い凝血塊を移し、23Gの針を用いて、通常の生理食塩水を含有する1ミリリットルの注射器に接続された20cm長のPE-50管に、PE-10チューブの両端を接続します（ 図2） 。 </li><li>から血液細胞を除去することができる5分間の他の1つのシリンジからの連続交互運動によって血餅をシフト血餅とフィブリンコアを破壊することなく、血管外凝固血餅の壊れやすいを最小限に抑えます。 </li><li> 40ミリメートル長いセグメントに血餅をカットし、無菌条件下でステップ1.2で説明したように修正されたPE-50カテーテル内に血塊セグメントを転送します。注：すべてのPEチューブはエチレンオキシドで滅菌する。 </li></ol> 3塞栓中大脳動脈閉塞（図3A、B） <ol><li> （15分の最低121℃、15 PSI）オートクレーブにより、すべての手術器具を滅菌する。 70％エタノールを用いて、手術テーブルと関連した手術用機器を消毒。 </li><li>ステップ2.1で説明したようにイソフルランでラットを麻酔。両後脚につま先のピンチを実行することによって、麻酔の深さをテストし、（足を引き抜く）のいずれか観察した運動は、動物が手術を行うのに十分に麻酔をかけないことを示します。麻酔下ながら乾燥を防ぐために、両眼に獣医軟膏の少量を適用します。腹側首と頭の再上の毛皮を剃る皮膚領域を露出させ、電気バリカンでgions。 </li><li>加熱パッド上に仰臥位でラットを置きます。直腸プローブ、コントロールを挿入し、恒温ブランケット制御ユニットを使用して36.5から37.5℃の間の体温を維持する。 </li><li> 70％エタノールに続いて、10％ポビドンヨードで剃毛した皮膚や周囲の毛を消毒。 </li><li>解剖顕微鏡下で首に2センチ長い正中切開を行います。手術野を露出し、右総頸動脈（CCA）、外頚動脈（ECA）、内頸動脈（ICA）、および神経および筋膜（ 図3A）の周囲から遊離翼口蓋動脈（PPA）を解剖するために使用するリトラクター。注：アシスタントが動物を準備するのに役立ちますしない場合は、手術の前に、滅菌手袋を変更してください。 </li><li> （迷走神経を傷つけることなく）、周囲の神経から無料でCCAを解剖し、動脈の下で無菌の5-0絹縫合糸を配置します。スリップノット（＃1）を接続し、小さなHEMOSを使用して縫合糸を把握tatおよび身体に向かって教えたプル。 </li><li> ECAとその2つの枝、後頭動脈（OA）と上甲状腺動脈（STA）を解剖。獣医電気外科ユニットを用いて二つの枝を凝固させる。 ECAの下で無菌の6-0絹縫合糸を2枚配置します。 </li><li>動脈の下に配置された二つのシルク、本体に向かってヘッド（先端）と他に向けて一枚を分離します。 （2＃）の頭に最も近い側に、小さな止血とシルクをつかみ、頭に向かって教えたプルタイトな合字を接続します。後で使用するために他の絹糸で緩い結び目（＃3）を準備します。 </li><li> （迷走神経を傷つけることなく）、周囲の神経からのICAとPPAを解剖。 6-0縫合糸（＃4）PPAを接続します。 ICA（＃5）の周りに6-0縫合糸で引き結びを作る。あるいはまた、微小血管クリップを使用してICAをクリップ。 </li><li> Vannasスタイルの春のはさみとの緊密な（＃2）ルーズ（＃3）合字間のECAに小さな穴（スルー1/2）カット。変性PE-50用浴槽を挿入CCAの分岐に切開して、事前に血液凝固を含む電子。 （＃3）だけで十分な内腔の周りに留置チューブの移動性を維持確保するために緩い結紮糸を締めます。 </li><li>切り株を解放し、ECAとICAの分岐下の切り株を配置するために小さな穴の部位にECAをカット。これは修正されたチューブが簡単にICAにスライドできるようになります。 ICAを開いて、静かに、カテーテルの先端がMCA（分岐から〜17ミリメートル）の原点に到達するまで、ICAにECAの内腔からチューブを進める。注：前の70％エタノールで滅菌した、ECA内管の外面をチューブの先端を挿入し、滅菌生理食塩水で洗浄した。 </li><li> 100μlのハミルトンシリンジ（ 図3B）を使用して、10秒以上の生理食塩水を10μlと一緒に修正されたPE-50カテーテルを通して血塊を注入。 </li><li> 5分後、ECAからカテーテルを撤回。 ECAを結ぶと、CCAを再度開く。首に切開を縫合。 </li></ol> 4。監視局所脳血流量（rCBFの） <ol><li> MCA閉塞の前に、頭蓋骨を露出させ、頭皮が1.2センチ正中切開を行います。歯科スクレーパーおよび滅菌綿スワップで頭蓋骨上の組織を削除します。注：手術の前に、露出した頭皮エリアと周囲の毛を70％エタノールに続いて、10％ポビドンヨードで消毒されています。 </li><li> 2mmの後部と0.7ミリメートルの球状のステンレス製バリ（ 図4）を使用して、ブレグマから5mm横に位置して1.5ミリメートルの直径のバーホールを開けます。 注：無傷の硬膜にしてください。 </li><li> 0.5ミリメートル硬膜表面の上にプローブを配置します。塞栓後の0（ベースライン）、5、15、30、60、90、および120分で脳血流量を監視し、5、15、30、45、およびtPAの静脈内投与後60分で続ける。脳血流の最後の測定後、頭皮切開を縫合によって閉じられている。注：首の切開の前に私たちは、MCAのocclus前ベースラインとして脳血流を測定イオン。ポストMCA閉塞私たちは首の切開の縫合閉鎖後のrCBFを測定します。したがって、頸部切開を無菌に保たれる。 </li></ol> 5。術後ケア<ol><li>脱水を防ぐ、すぐに手術や痛みの軽減のために必要に応じて、すべての6〜12時間後にBuprenex（0.05ミリグラム/ kgで、SC）を注入するために生理食塩水を皮下2.5mlの注入する。 </li><li>イソフルラン麻酔を停止します。 37℃獣医回収室（動物を暖かく保つ）にラットを置き、観察を続ける。ラットが麻酔から回復することは一般的に10分かかります。次に、滅菌したケージに動物を入れるケージにペトリ皿にいくつ濡れる食べ物を置き、動物滅菌室にケージを返す。 </li><li>脳卒中後24時間は、ペントバルビタールナトリウム（100 mg / kg体重、IP）の過剰投与によりラットを安楽死させる。 </li></ol> 6。神経学的欠損スコア<ol><li>塞栓後の2時間前とでBedersonスコアを実行します。グレーディングsを使用0-3のCALEは、先に説明した5：尾によってラットを上げ、0を、床に両方の前肢を拡張し、他の障害を示さない動物（通常の移動）; 1、尾によってラットを高め、対側前肢を曲げ; 2、旋回することなく、横方向のプッシュ（および前肢の屈曲）に対する耐性を減少した。 3、旋回とグレード2と同じ動作。 注：塞栓後の2時間後にBedersonスコア= 0（なし赤字）示さないラットは、さらなる研究から除外されます。 </li></ol>

<ol><li>Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., Høyer, S., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+reproducible+cerebral+infarction+using+thrombotic+blood+clot+emboli%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).</li>
<li>Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+focal+embolic+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A rat model of focal embolic cerebral ischemia.</a> Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).</li>
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<li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Tsuji, M., Nishimura, M. C., Davis, R. L., Bartkowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+middle+cerebral+artery+occlusion%3A+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).</li>
<li>Henninger, N., Bouley, J., Bråtane, B. T., Bastan, B., Shea, M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Doppler+flowmetry+predicts+occlusion+but+not+tPA-mediated+reperfusion+success+after+rat+embolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Laser Doppler flowmetry predicts occlusion but not tPA-mediated reperfusion success after rat embolic stroke.</a> Exp Neurol. 215 (2), 290-297 (2009).</li>
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<li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. 21 (955), (2008).</li>
<li>Sicard, K. M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+focal+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Transl+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Animal models of focal brain ischemia.</a> Exp Transl Stroke Med. 1 (7), (2009).</li>
<li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Westendorp, W. F., Nederkoorn, P. J., Vermeij, J. D., Dijkgraaf, M. G., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-stroke+infection%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurol%22%5BJournal%5D)">Post-stroke infection: a systematic review and meta-analysis.</a> BMC Neurol. 11 (110), (2011).</li>
</ol>

開示すべき潜在的な相反する利益はありません。

本研究では、MCAの起源は、フィブリンに富む血餅により閉塞されたラットの塞栓MCAO脳卒中モデルを実行するための標準的な方法を、実証した。このモデルの主な利点は：フィブリンに富む血餅によるMCAのステムの閉塞は、ヒトにおける血栓塞栓性脳卒中に似て、塞栓性脳卒中モデルは、線溶療法の前臨床研究を行うのに適しており、このモデルが開発できることMCAによって供給された領域内再現可能かつ予測可能な梗塞容積。 塞栓MCAOモデルを実行するために、血餅の導入、安定性と拠点は梗塞サイズの変化及び影響を受けた脳領域2,3に繋がる、管理が困難である。以前の研究では、障害となっている血栓をMCA 2,3のステムに留まっているときMCA領域における再現性の虚血性病変のみ達成できることを実証した。正確に凝血塊を提出し、再現性の塞栓性脳卒中モデルを生成する、この研究では、修正されたPE-50チューブとどのようにMCAの起源とどのようにMCAにフィブリンに富む血餅を注入することに変更されたチューブの先端を導入する準備する方法を示します。以前の報告2</sup...

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.
The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".

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Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

脳卒中は米国における死因の第3位であるが、急性脳卒中治療の選択肢は限られて残っている。現在では、血餅を溶解する組み換え組織プラスミノーゲンアクチベーター（tPA）の静脈内注入は、急性虚血性脳卒中のための最も効率的な療法である。しかし、tPAの使用は、その狭い治療窓によって及び脳内出血のリスクの増大によって制限されます。このため、血栓溶解研究するのに適したストロークのモデルが緊急に必要とされている。 中大脳動脈（MCA）は、ほとんどの場合、ヒトでの行程に閉塞した動脈である。この動脈を中心に、虚血性脳卒中の多くの動物モデルが確立されている。現在では、MCAを閉塞することにより齧歯類局所虚血モデルの二つの主要な種類が開発されている：縫合MCAOモデルおよび塞栓MCAOモデル。管腔内縫合技術によってMCAOモデルが広く機構駆動のストロークの研究で使用されてきたが、これらの縫合糸のモデルはない人間のストロークの最大80％が血栓症または塞栓症によって引き起こされるように、ヒトの脳卒中を模倣する。しかし、血の塊を使用して、塞栓性脳卒中モデルは、密接に人間のストロークを模倣し、血栓溶解の研究に適していると考えられる。この塞栓モデルは、最初1992年にオーバーガードら。1によってラットにおいて開発され、さらにZhang らにより特徴付けられた1997年2およびディナポリらによって2006年3。塞栓MCAOは、ますます注目を集めているが、直面する技術的問題がある多くの研究室による。 本稿では、MCA領域内の予測可能な梗塞を開発することができ、成体ラットにおける同種血の塊と塞栓MCAOを製造するための標準的な方法を示しています。この記事で紹介した技術は研究者が脳卒中研究のためのこのモデルを確立するための技術的な問題を克服するのに役立つはずです。

<table><tbody><tr><td>rh-tPA</td><td>Chemical</td><td>Genentech</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td><td>Chemical</td><td>Sigma</td><td>T8877</td></tr><tr><td>麻酔気化器</td><td>装置</td><td>、Soma Technology</td><td>Drager Vapor 19.1&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>充電式高速マイクロドリル</td><td>機器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18000-17</td></tr><tr><td>湾曲ハサミ</td><td>機器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14117-14</td></tr><tr><td>デュモン鉗子(医療#7)</td><td>機器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11270-20</td></tr><tr><td>デュモン鉗子(医療#5)</td><td>機器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11251-35</td></tr><tr><td>バンナススタイルの春はさみ</td><td>機器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15000-03</td></tr><tr><td>獣医用回収室&nbsp;</td><td>設備&nbsp;</td><td>Pecoサービス&nbsp;</td><td>V1200&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>Genie plusシリンジポンプ</td><td>機器</td><td>ケント・サイエンティフィック・コーポレーション</td><td></td></tr><tr><td>ラット脳マトリックス</td><td>機器</td><td>ケント・サイエンティフィック・コーポレーション</td><td>RBMA-310C</td></tr><tr><td>デジタルキャリパー&nbsp;</td><td>機器</td><td>ワールド精密機器</td><td></td></tr><tr><td>501601 解剖顕微鏡</td><td>機器</td><td>ワールド精密機器</td><td>PZMTIII-BS-LWD</td></tr><tr><td>ハミルトンシリンジ</td><td>機器</td><td>ハミルトン</td><td>モデル710</td></tr><tr><td>ホメオサーミックブランケットコントロールユニット</td><td>機器</td><td>ハーバード大学 装置</td><td></td></tr>電気<tr><td>クリッパー</td><td>機器</td><td>ブレインツリーサイエンティフィック</td><td>CLP-9931</td></tr><tr><td>獣医用電気メス</td><td>機器</td><td>MACAN 製造会社</td><td>MV-9</td></tr><tr><td>血流量計</td><td>機器</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 4/30</td><td>機器</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7.2</td><td>ソフトウェア</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>1 ml シリンジ</td><td>消耗品</td><td>ベクトン、ディキンソン・アンド・カンパニー</td><td>309659</td></tr><tr><td>23 G ニードル</td><td>消耗品</td><td>ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー</td><td>305143</td></tr><tr><td>30 G ニードル</td> ベ<td></td><td>クトン・ディキンソン・アンド・カンパニー</td><td></td></tr><tr><td>305106 PE-50 チューブ</td><td>ベ</td><td>クトン・ディキンソン・アンド・カンパニー</td><td>427517</td></tr><tr><td>PE-10 チューブ</td><td>消耗品</td><td>ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー</td><td>427400</td></tr><tr><td>6-0 シルク縫合</td><td>糸 消耗品</td><td>ハーバードの器具</td><td>723287</td></tr><tr><td>5-0絹の縫合</td><td>糸の消耗品</td><td>ハーバードの器具</td><td>517607</td></tr></tbody></table>

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（mcao）

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

組み換え組織プラスミノーゲンアクチベーター（tPA）を用いた臨床的には、血栓溶解療法は、急性虚血性脳卒中のための最も効果的な治療のままである。しかし、tPAの使用は、その狭い治療窓によって及び出血性変化のリスクの増大によって制限されます。虚血性脳卒中の治療のための新たな血栓溶解剤や戦略を研究するための適切な脳卒中モデルを開発する緊急の必要性がある。腔内縫合MCAO塞栓MCAO：現在、虚血性脳卒中モデルの2つの主要なタイプはラットおよびマウスにおいて開発されてきた。管腔内縫合技術によってMCAOモデルが広く機構駆動のストロークの研究で使用されてきたが、これらの縫合糸モデルは、臨床状況を模倣せず、血栓溶解の研究には適していないでください。これらのモデルの中では、塞栓MCAOモデルは、密接に人間の虚血性脳卒中を模倣し、血栓溶解療法の前臨床研究に適しています。この塞栓モデルは、最初にOVによるラットで開発されましたergaard らは 1992年の1、さらにZhang らによって特徴付け1997 2。塞栓MCAOがますます注目を集めているが、多くの研究室が直面する技術的な問題がある。血栓溶解研究のための増加のニーズを満たすために、MCA領域内の予測可能な梗塞体積を開発することができ、ラットにおける塞栓MCAOの再現性の高いモデルを提示する。簡単に述べると、修飾されたPE-50チューブを穏やかにMCAの起点に到達​​するカテーテルの先端まで内頸動脈（ICA）の内腔に外頸動脈（ECA）から前進する。カテーテルを介して、単一の相同血餅はMCAの起点に配置される。 MCA閉塞の成功を識別するために、局所脳血流量をモニターし、神経学的欠損および梗塞体積を測定した。本論文で示された技術は、研究者は、脳卒中の研究のためにこのモデルを確立するための技術的な問題を克服するのに役立つはずです。&lt;/ pの&gt;

レーザードップラーフローメトリー（LDF）は脳虚血6,7の誘導の間脳血流量をモニターした。私たちの研究室を含む多くの研究室が成功したMCA閉塞を有する動物を識別するために、局所脳血流を使用しているが、ベースラインのしきい値は、測定部位に関連している研究室間で変化した。以前に説明したように6 LDFのプローブは、2mmの後部とブレグマに対して横5mmと配置されている。脳血流は、0、5、15、30、60、90、及び血餅の注射後120分でモニターした。このデータに基づいて、ベースラインのrCBFの&gt; 70％減少を示す動物のみを、MCAの成功した塞栓性閉塞（ 図5）と考えられている。血餅の注射後2時間、tPAの標準的なラット用量（10mg / kg）の少なくとも7,8、10％ボーラスと、シリンジ注入ポンプ7,8を用いて30分かけて90％の連続注入で静脈内投与した。私たちは、脳血流レベルが次第にincreasことを観察したtPAの治療の30分以内にベースライン（ 図5）の&gt; 70％...

この論文では、成体ラットにおいて相同血栓(フィブリンリッチ)を伴う塞栓性中大脳動脈閉塞を引き起こす標準的な方法を示します。このモデルは、ヒトの虚血性脳卒中を密接に模倣しており、虚血性脳卒中の血栓溶解療法の前臨床研究に適しています。

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO）

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

この手順の全体的な目標は、ラットの塞栓性脳卒中のモデルを開発することです。これは、最初に結紮することにより達成され、総頸動脈を一時的にスリップノットで固定し、外部頸動脈をできるだけ緊密にします。次に、分岐部の上のECAの周りに緩い縫合糸を配置します。2番目のステップは、口蓋動脈と内頸動脈を分離し、スリップノットでそれらを一時的に結紮することです。次に、ECAのタイトな合字と緩い合字の間に小さな穴を開けます。次に、血栓を含む改変P50チューブをECAに導入する。次に、カテーテルをICAに反転させ、カテーテルの先端がMCAの原点に到達するまでチューブをゆっくりと進めます。最後のステップは、生理食塩水と一緒にカテーテルを通して血栓を注入し、5分後にカテーテルをECAから引き抜くことです。最終的に、脳卒中から24時間後に、TTC染色を使用して脳切片の梗塞領域を示します。この技術の主な利点は、私たちの既存の脳卒中モデルは、MCモデルのように、この塞栓性脳卒中モデルは、密接に人間の脳卒中を模倣し、虚血性脳卒中のSLI療法の事前研究に適しており、虚血性脳卒中のSLI療法の事前研究に適しており、手順が私の研究室からDr.Aポートの失敗であることを示しています。Dr.Geneは、レッドサーキットモデルの実行に10年以上の経験があります。この方法の視覚的なデモンストレーションは、命名に難しさがある重要なステップです。PE 50チューブを準備するには、ガス火の上に長さ30センチメートルのPE 50チューブを徐々に柔らかく伸ばします。デジタルキャリパーを使用してストレッチチューブ上の点を選択します。次に、先端が1センチメートル、外径が0.30〜0.34ミリメートルの25センチメートルの長さのセグメントにカットします。次に、麻酔をかけたラットから大腿動脈の血液を20センチメートルの長さのPE50チューブで採取します。血液が凝固するまで、チューブを室温で2時間置きます。その後、チューブを摂氏4度で22時間保持します。PE 50チューブを50ミリメートルのセグメントにカットし、チューブから血栓を通常の生理食塩水を含む滅菌ペトリ皿に洗い流します。長さ50mmの血栓を長さ60mmのPE10チューブに移します。次に、PE 10チューブの両端を長さ20センチメートルのPE 50チューブに接続し、23ゲージの針で通常の生理食塩水を含む1ミリリットルのシリンジに接続して、フィブリンコアを破壊せずに血球を除去し、その後5分間連続して血栓を一方のシリンジから他方のシリンジに移動し、その逆も同様です。 血栓を40ミリメートルの長さのセグメントに切断し、その血栓セグメントを改造されたPE50カテーテルに移します。この手順では、オートクレーブによってすべての手術器具を滅菌し、手術台と関連する手術器具を70%エタノールで消毒します。次に、ラットにイソフッ素で麻酔をかけ、後ろ足につま先つま先つまみを行うことで麻酔の深さを確保します。乾燥を防ぐために、目に少量の軟膏を塗ります。次に、ラットを加熱パッドの仰臥位に置きます。その後、電動クリッパーで腹側頸部の毛皮を剃り、皮膚と周囲の毛皮を70%エタノールで消毒します。直腸プローブを挿入し、ホメオテーマのブランケットコントロールユニットを使用して体温を摂氏約37度に保ちます。次に、解剖顕微鏡で、首に2センチメートルの長さの正中線を切開します。リトラクターを使用して、手術野を露出させます。迷走神経を傷つけることなく、周囲の神経からCCAを解剖し、動脈の下に滅菌済みのファイブゼロシルク縫合糸を留置します。スリップノットを結び、縫合糸を体に向かって引っ張ります。次に、ECAとその2つの枝を解剖し、OAとSTAは獣医電気外科ユニットを使用して2つの枝を凝固させ、次にECAの下に滅菌6ゼロシルク縫合糸を2枚置き、動脈の下に配置された2つのシルク縫合糸を分離します。頭に最も近い側でしっかりと結紮します。小さな止血剤で絹の縫合糸をつかみ、頭に向かって引っ張ります。後で使用するために、もう一方のシルク縫合糸で緩い結び目を準備します。次に、迷走神経を傷つけることなく、ICAとPPAを周囲の神経から解剖します。PPAをシックスゼロ縫合糸で結びます。次に、ICAの周りにスリップノットを作成するか、微小血管クリップを使用してICAをクリップします。次に、ヴェネツィアスタイルのスプリングハサミで、タイトな結紮糸と緩い結紮糸の間のECAに小さな穴を開けます。血栓を含む修正されたPE50チューブを切開部に挿入し、CCAの分岐部に進みます。ルーメンの周りの緩い結紮糸を、留置チューブの可動性をしっかりと維持するのに十分なだけ締めます。次に、小さな穴の場所でECAを切り取り、切り株を解放します。ECAとICAの分岐点の下に切り株を配置します。これにより、変更されたチューブがICAに簡単にスライドできるようになります。ICAを開き、カテーテルの先端がMCAの起点に達するまで、ECAの内腔からICAにチューブをゆっくりと進めます。次に、100マイクロリットルのハミルトンシリンジを使用して、10マイクロリットルの生理食塩水とともに、変更されたP 50カテーテルを介して血栓を注入します。5分後、ECAからカテーテルを引き出し、ECAを結び、その後ECAを再度開き、首の切開部を縫合します。この手順では、麻酔をかけたラットの頭皮に1.2センチメートルの長さの正中線切開を行い、頭蓋骨を露出させます。次に、0.7ミリメートルの球形ステンレス鋼のバリを使用して、bgmaの後方2ミリメートルと横方向5ミリメートルに位置する直径1.5ミリメートルのバーホールをドリルします。プローブを硬膜表面から0.5ミリメートル上に置きます。塞栓術の 0、5、15、30、60、90、および 120 分後の塞栓術の 2 時間で、血流量計を使用して RCBF を測定します。ラットをTPAで治療し、手術後のTPA治療後5、15、30、45、および60分で血流を継続的に監視し、脱水を防ぐために動物に2.5ミリリットルの生理食塩水を皮下に注射し、手術直後に皮下で0.05ミリグラム/キログラムでブレンを注射し、痛みの緩和のために必要に応じて6〜12時間ごとに。フッ化物麻酔を停止します。ラットを摂氏37度の獣医用回収室に入れ、監視を続けます。約10分後、動物を滅菌したケージに入れ、ウェットフードをシャーレに入れてから、ケージを動物の滅菌室に戻します。塞栓術の 2 時間後、神経学的スコアは BESON スコアを使用して評価されます。赤字を示さないラットは、さらなる研究から除外されます。.この図は、レーザードップラー流量計を使用したRCBF測定を示しています。血栓注入により、ベースライン値の RCBF が 70% 以上減少しました。血栓の2時間後にTPA処理を30分間回復させた。ベースラインに近いRCBF。ここでは、脳卒中から24時間後のMCAとCAの起源の血栓を示す代表的な写真です。そして、これらはTTCで染色された脳スライスの代表的な画像です。脳卒中後24時間 一度習得すれば、このテクニックは30分で完了します。

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遠位中動脈閉塞法を用いたマウスにおける急性虚血性脳卒中の誘発

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脳血管の解剖学的構造を損なうことなく中大脳動脈閉塞・再灌流のラットモデル

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ラットにおける中脳動脈の選択的かつ永久的な閉塞:運動記憶および空間記憶障害の研究における実験的アプローチ

学ぶラットにおける塞栓性脳卒中モデルの作成法。同種血血栓を用いた中大脳動脈閉塞によりヒトの虚血性脳卒中を模倣し、血栓溶解療法の前臨床研究に有用な再現性の高い実験プロトコルを確立する。

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO）

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