2014年10月11日
既知のモデルが、モルモットは、現在、実験動物科学のニッチを表し、限られたデータは、ほとんどのプロシージャの実行でのみ使用できます。ここでは、意識的または麻酔したモルモットのどちらかの生体内の血液サンプリング技術における非末端4つの異なるアプローチを提示します。
このビデオの全体的な目標は、モルモットの4つの異なる血液サンプリング手法の方法論を説明することです。示されている手順は、サンプル量またはサンプル数が採血のガイドラインを超えない限り、最終的ではありません。実験動物では、ここでは外側静脈と足根静脈の原因がわかります。
ous静脈は足根関節の上を背側と横方向に走っています。各後肢から最大3つのサンプルを採取する必要があり、サンプルごとに約100〜400マイクロリットルの血液を採取できます。必要な設備には、電気シェーバー、温水浴、清潔なタオル、脱脂綿、70%アルコールなどの消毒剤、滅菌針、21峡谷またはそれ以下の収集チューブが含まれます。
また、血糖値とAccuCheckサンプラーを測定することが目的であれば、ギニア豚でも麻酔なしで頭静脈または足根静脈からの採血を行うことができます。モルモットは訓練を受けたアシスタントによって拘束され、敗血症の技術を使用する必要があります。足根部を覆う毛を電気シェーバーで剃り、後ろ足を洗ってぬるま湯で温めます。
これにより、脚がきれいになるだけでなく、静脈が拡張して見えやすくなります。後肢を伸ばし、膝のすぐ上に穏やかな下向きの圧力を加えることでうっ血を達成し、サンプリングの直前に静脈が見えるようにします。剃った部分は消毒液で拭きます。
静脈に針またはランセットで穴を開け、血液を毛細血管またはマイクロチューブに集めることができます。採血が完了すると、うっ血が緩和され、脱脂綿で穏やかな圧力がかかります止血を促進するために、モルモットの耳の背側表面の表在動脈と静脈がここで見られます。これらの血管は、非常に少量しか必要ない場合に採血に使用できます。
一例として、血糖値の測定が挙げられます。モルモットは、耳にアクセスできるようにしながら、優しく拘束されます。穿刺部位は、サンプリング前に浄化槽で準備する必要がありますが、シェービングは必要ありません。
耳の付け根にわずかな圧力を加えると、静脈がより見えるようになります。静脈に針またはランセットで穴を開け、毛細血管に血液を採取するか、AccuCheckサンプルシステムを使用して血糖値を直ちに分析します。採血が完了したら、止血を促進するために穿刺部位に穏やかな圧力をかける必要があります。
この写真は、頸静脈採血のためのモルモットの位置と頸静脈の原因を示しています。この手順は、麻酔をかけた動物にのみ行われます。必要な機器には、麻酔薬や電気シェーバー脱脂綿、70%アルコール聴診器などの消毒剤、中性眼軟膏、1ミリリットルの注射器、滅菌針、通常は23または25が含まれます。
Gorge HeparinとEDTAは、凝固を防ぐために、サンプリング前にシリンジを洗い流すために使用できます。モルモットにはさまざまな麻酔プロトコルが存在します。この場合、動物は、首に皮下注射された単独のタイルサインとブチフの混合物を用いたバランスの取れた麻酔によって麻酔されます。
この混合物を生理食塩水で希釈して、投与をより正確にすることができます。注射後、モルモットはケージに戻して静かにしておくべきです。周囲効果は通常、約10分後に見られ、サンプリング前に30〜40分間持続します。
麻酔の深さは反射神経をチェックすることによって評価され、目を保護するために中立眼軟膏が投与されます。頸静脈は、モルモットを背中に置き、前脚を四半期ごとに引っ込めた状態でアプローチします。その領域を剃り、無菌的に準備し、鎖骨を触診し、1ミリリットルの注射器に取り付けられた23峡の針を正中線から約1センチ横、鎖骨の背側にちょうど
頭蓋骨を挿入します。シリンジは、わずかに上向きと内側の角度に保つ必要があります。.皮膚が貫通するとすぐに、頸静脈がかなり表面的に位置し、挿入深さが約3〜4ミリメートルで十分であるため、注射器にわずかな負圧が加えられます。サンプルを採取したら、前脚の張力をほぐし、穿刺側に穏やかな圧力をかけます。
その後、動物を回復ケージに戻すことができますが、止血と麻酔からの回復を確実に監視する必要があります。モルモットが麻酔から完全に回復すると、ペンに戻ることがあります。モルモットの解剖学的特徴は他のげっ歯類モデルとはわずかに異なり、種固有の違いに対応し、最短時間で十分な品質のサンプルを得るためには、サンプリング技術の調整が必要です。
長期と短期の両方として。In vivoでは、研究ではしばしば採血を繰り返す必要があります。ストレスや不快感を軽減し、生存を確保するために、またサンプルサイズとアクセシビリティの要件を遵守するために、技術の選択を慎重に検討する必要があります。
記載されているすべての方法は徹底的にテストされ、反復in vivo採血にうまく適用されています。私たちの研究施設での研究では、モルモットは実験動物科学のニッチを表していますが、基本的な手順の実行に関するデータは限られています。このビデオ論文では、意識のある動物または麻酔をかけた動物のいずれかで、サンプル量とサンプル数が実験動物の採血のガイドラインを超えない場合に、非末端のin vivo血液サンプリングに対する4つの異なるアプローチを紹介しました。
これらの手順は、モルモットで繰り返し採血が必要な場合に使用することをお勧めします。あなたの研究プロトコルで。
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この動画では、覚醒時および麻酔下のモルモットにおける4つの非終末的採血法を実演します。これらの手法は、手技に関するデータが限られているこのモデル生物を用いる研究者にとって極めて重要です。
モルモットにおける非終末的な採血は、動物福祉を維持しながら、高品質なサンプルの反復回収を可能にすることで、縦断的なin vivo研究を支援します。この機能は、連続的なサンプリングによってターゲットへの結合やメカニズムのリスク低減を判断する、前臨床の薬物動態および薬力学評価において極めて重要です。これらの手法は、ニッチながらもトランスレーショナルな関連性の高いモデルにおける手法的な空白を埋めるものであり、初期探索ワークフローにおけるデータの信頼性を向上させます。
これらのサンプリング方法は、標的パスウェイの解析およびリード化合物の評価のための信頼性の高い生物学的マトリックスを提供することで、ディスカバリーバイオロジーのワークフローに統合されます。