マイカの製造は、高分解能光学顕微鏡イメージングのための脂質二重層をサポート

ここで紹介する手順は、tur 1分子トラッキング研究などの高分解能イメージングに適した層によってMICA担持脂質を調製する簡単な方法を示しています。MICA表面は、ガラス顕微鏡スライドとカバースリップの間に接着されたMICAの1枚のシートのサンドイッチを光学接着剤を使用して分割することにより、平らで非常に薄い新鮮なマイカ表面が露出しました。1.5ミリリットルのバイアルカップから作られた小さなプラスチックチャンバーを取り付けることにより、二重層形成に必要な脂質ベシクルの量を30マイクロリットルまで低くすることができます。

最初のステップとして、サプライヤーから提供されたMICAの多層シートを取り、ハサミで細かくカットします。新しいナイフの刃を使用して、2つまたは3つの薄いリーフレットにAlリーフレット。今、カバーをきれいにして、徹底的に眠ります。

これには、0.17ミリメートルのカバーを配置することが含まれます。ガラスのトレーニングジャーに眠り、各カバーをカバーします。別のスロットで眠り、洗剤で摂氏60度で30分間超音波処理します。

カバーを洗います。ミニキーウォーターで10〜20回眠り、空気または窒素の流れでブロードライします。顕微鏡のスライドガラスを取り、所定の場所で清掃します。

低粘度光学aheの約15マイクロリットルの小さな滴は、顕微鏡のブラストと地球儀に以前。リーフレットをUVライトボックスで数分間カットします。スコッチテープを使用して、マイカの数層をはがします。

最初のいくつかのレイヤーは断片化されるので、スコッチにレイヤーが取り付けられているのが見えるまでそれを行います。テープは均一で完全です。テープを覆います。

高粘度の光学接着剤をMicah Surfaceに一滴垂らします。そこに空気の泡がないことを確認してください。攻撃的な飛沫に清潔なカバーの睡眠をそっと置きます。

ピンセットを使用してグラスをそっと軽くたたいて、アヘを広げます。再度、接着剤をUVライトで数分間硬化させます。ナイフを使ってガラスでできたサンドイッチを割る。

MICAをスライドさせて寝かしつけます。ほとんどの場合、MICAの非常に薄い層のみがカバースリープに接着されたままになります。解剖顕微鏡を使用して、針やピンセットの先端で小さな傷をつけてMICA表面を検査します。

表面が実際に雲母であるかどうかは、ここのように表面が均一に引っかかれているか、表面が光っているここのように光学接着剤に引っかかれているかを簡単に判断できます。1.5ミリリットルのガラスバイアルからカップを取り、ガスカントを取り除き、マニキュアを使用してキャップをMICA表面に接着します。数分間乾かします。

これで、ここで標準プロトコルを使用して、脂質二重層修復脂質を層ごとに調製できます。30マイクロリットルの液滴の脂質小胞をバイアルキャップチャンバーに入れ、バッファーを洗浄する前に60分間インキュベートします。洗浄後、サンプルはイメージングの準備が整います。

この場合、カスタムメイドのサンプルホルダーに取り付けられます。このような調製したMICA表面では、単一分子を容易に観察することができます。ここでは、A-D-O-P-Cをガラスとマイカで支持された層ごとに比較します。

この 2 つのサーフェスでは、動きの種類が大きく異なります。右のパネルに色で描かれた単一分子の経路は、MICA上の拡散挙動がガラス上の拡散挙動とは異なることを明らかに示しています。ただし、画像品質に大きな違いはありません。

20スポットの最大強度の半分での直線関数の平均織りは、両方の基材でほぼ同じであり、MICA表面が目立った光学収差を導入することなく、光を完全に透過可能であることを示しています。全体として、MSDSは拡散挙動に明らかな違いを示しています。しかし、いずれの場合も、異なる速度で拡散する粒子の2つの集団が観察されます。

速い拡散係数と遅い拡散係数の2つの異なる拡散係数を、二乗変位の累積確率への二重指数供給から抽出しました。このDOPC二重膜では、両方の拡散成分がMICA表面で高速になり、MICA上でゆっくりと移動する粒子は高速粒子よりも約10〜20倍遅くなります。しかし、ガラスの上の人口の遅い人は、ここでは動かなくなるのに近いです。

我々は、表面のタイプが脂質二重膜の拡散挙動に違いをもたらす可能性があることを示した。したがって、1つは、1つは、MICAとMICA上のガラスイメージング二重膜のような異なる基板上に支持された二重膜の研究との間の結果を比較するときには、通常、我々は複雑な準備のために非常に困難であるが、我々は、そのような高品質の表面を準備するための簡単かつ効果的な方法