Name: 生理的録音と黄熱病の蚊の味覚付属器RNAの配列決定ネッタイシマカ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 学ぶ生理的録音とRNA配列決定法でネッタイシマカの味覚ニューロン応答と遺伝子発現を解析する手法。電気生理学的技術と次世代シーケンスを組み合わせて、苦味化合物応答に関連する遺伝子を同定します。

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著者は、統計分析のためにUSDA、農業研究サービスのBryan T. Vinyard、Henry A. Wallace Beltsville Agricultural Research Center、Biometrical Consulting Service、メリーランド州ベルツビルの統計分析に感謝します。 この研究は、国防総省が国防総省(AFPMB)を通じて資金提供した展開戦闘機保護(DWFP)研究プログラムからJ.C.D.への助成金によって部分的に支援されました。

1.飼育ヨンエ。ネッタイシマカ大人<ol><li>浅いトレイ内の約¾インチの水でハッチの卵。過密状態は、大人のサイズを小さくします。 </li><li> 25°C（12 hLの：12-HD）でリア幼虫と接地魚の餌で飼育。 注：過剰摂取は、生存率を減少させることができる。 </li><li>毎日のパスツールピペットによって個別に蛹を外し、細かいメッシュ蓋で小さな封じ込めバケットの内側にプラスチック皿（5.5センチメートル×9センチ）に移転、このように24時間の年齢グループを確立する。 </li><li>ケージハウジングの画面の壁に置かれた綿球によるフィード大人の蚊10％のショ糖溶液の幼虫と同じ光周期の下で27℃、相対湿度70％の環境チャンバー内の蚊。 </li><li>電気生理学のために、5〜10日齢の動物を使用しています。一般に、大型動物、より良い結果を生む。 RNA単離のために、5〜10日齢の範囲内の単一の24時間の年齢グループ内にある動物を使用しています。 </li></ol><ol><li>選択した感覚ニューロンからの最小限の活動を誘発電解質の適当な濃度（ 例えば 1-10 mm）を決定します。 10 mMのNaClまたは1mMのKClを実験の開始時のベースライン活性を試験するために合理的な電解質である。 </li><li>適切な溶媒中で、各実験化学物質を溶解させる（ない場合は水、エタノールまたはDMSOを使用）単独の電解質に比べてスパイク活性にほとんどまたは全く効果を有している。 10％エタノールまたは1％DMSOの最終濃度は、妥当な出発濃度である。 </li><li>昆虫に送り抑止や覚せい剤を十分に記載されている制御化学物質（甘いのための苦いまたはスクロース例えばキニーネ）適切なを選択します。 </li></ol> 3.電気生理学（先端記録8;図1） <ol><li>機械的にガラスキャピラリーを引いてフォームガラス電極。熱を最適化し、適切な形状のrecordiを形成するために、ガラスを引っ張って設定を引っ張るNG電極。慎重には、ターゲット感覚子を包むのに十分な幅が、隣接する構造体との接触を回避するのに十分に小さい開いた電極チップを作成するために、解剖顕微鏡下でピンセットを使用してガラス電極の端部を断つ。 </li><li>顕微鏡下で、視覚的に形態によって特定し、先端記録の再現性を確保するために、ターゲット感覚器/感覚子を配置。準備は動物電極エントリの角度から感覚器への無料アクセスを許可する。 </li><li> -20℃の冷凍庫に冷たい麻酔大人の昆虫。低温に露出オーバーにより末梢ニューロンへの損傷を避ける。スライドガラス上にカミソリの刃でセロハンテープの狭いストリップをカット。狭いストリップを使用してスライドガラス上に全昆虫を不動。 </li><li>無関心（アース）電極として機能するように背側胸部または眼の中に化学的に尖らタングステン線を挿入します。 </li><li>興味のある刺激溶液とステップ3.1で行われたガラス電極を埋める。挿入された注射器を使用して、キャップを埋めるエンドを鈍らに引か端からillary。プルダウン端部を保持、すべての気泡をはじく。記録と刺激電極として機能するようにステップ3.1で行われたガラス電極に銀線（塩化物化別売）を挿入します。 </li><li>昆虫におけるコンタクト化学受容の感覚器からの​​記録のために設計されてプリアンプに電極を接続します。このプリアンプ（300 HZ-3 kHzの帯域通過フィルタ）が可能なように導入を刺激に近づけ神経活動をキャプチャするセトリング時間を削減します。収集、保存、スパイク記録ソフトウェアを搭載したマイコンを使用して電気信号を解析する。 注記：正しく記録セットアップを接地すると、急激に信号対雑音比を改善することができる。 </li><li>機能性を確保するために、コントロール溶液（電解液のみ）との感覚器を刺激する。すべての準備のための刺激アーチファクト次の200ミリ秒を開始するスパイクをカウントします。 </li><li>用量応答研究を除いて、すべての実験のための試験化学物質の順序をランダム化、バイアスを除去する。用量応答研究のために、実験的な化学物質の濃度を増加する感覚器を公開。十分な回復を確実にするために刺激間の3分の最小値を許可します。 注：この要件は、昆虫や感覚器によって異なる場合があります。閾値は、標準誤差は試験した最低濃度の標準誤差と重ならないためにその濃度として定義される。 </li></ol> 4. RNA単離および配列決定（図2） <ol><li>しっかりとスナップキャップチューブに合わせて組織disruption.Prepare伴うRNaseフリー乳棒前にドライアイス上でそれらを冷却することによりしっかりとフィット無RNAse乳棒を準備します。積極的に過剰結露を避けるために、解剖しない限り、閉じたコレクションチューブを保管してください。 </li><li>性別によるコールドステージとソートに（-20℃の冷凍庫15秒）で濾過吸引器を使用して、30から40の冷麻酔をかけた蚊を置く。置き動物は味の付属を損傷しないように翼を把握し、ダウンサイド背側。</li><li>細かい鉗子の二組を使用して、解剖顕微鏡下で男性または女性からペアのlabellaまたはtarsiを解剖し、隣接する組織を含めることを制限する。 注：500ペアlabellaは全mRNAの約800〜ナノグラムが得られます。 400個々のtarsi（5セグメント毎に）全mRNAの1,200-1,800ナノグラムをもたらす。 </li><li>あえぎ-鉗子の1対の、軽く内側のスタイレットを公開するlabellaのすぐ近位蚊口吻を把握する。コレクション-鉗子の他のペアを使用して、labellaを削除し、冷たい収集チューブの側に組織を追加します。 </li><li>鉗子の1対の、軽く脛骨と第一足根セグメントの接合部に蚊の足を把握する。鉗子の他のペアを使用して、tarsiを除去し、冷収集チューブの側面に組織を加える。 注：希望と望ましくない組織の界面において考慮細胞型を取る。それは、組織を隣接の混入を制限することが重要であるが、所望の組織の一部を省略しないことも重要である。 FiのNALサンプルを正確に関心のある器官全体を表している必要があります。コレクション鉗子を正確に掻きのみ所望の組織をつかんことで解放することができるように、把持鉗子との正確な境界を作成します。 </li><li>定期的に、チューブの底に組織を維持するために9000×gで簡潔に0℃の遠心機でコレクションチューブをスピンダウン。水分が解剖時に採取管に蓄積する場合、採取した組織をカバーするために冷たいTrizol試薬50μlのを追加します。 </li><li>防汚ラボマーカーを使用して、明らかに1 RNaseフリー1.5ミリリットルコレクションの各組織型用キャップチューブスナップラベルを付けます。 1.5ミリリットルチューブラックと液体窒素を用いて、（トリゾールであれば細かい個）の微粉末に組織を挽く後、凍結。一回繰り返します。 1ミリリットルにトリゾールの全量を、ボルテックスで地面組織を懸濁します。 </li><li>クロロホルム200μlのを追加し、完全に混合する。室温で5分後、4℃、15分間11000×gで遠心分離器でスピンダウン。慎重にゲノムDNAフィルターカラムに直接水層を追加します。 5分間11000×gでスピンダウン。スルー流れ、ピペットで混合するRNaseフリーの70％エタノールを等量加える。 RNAのコレクション列に液体を移し、提供の指示に従ってRNA抽出を続ける。 </li><li>定量化し、精密分光光度計で全RNAの純度を評価し、任意の標準RNA配列決定法を進める。 </li></ol> 5.定量的RT-PCR RNAの配列決定の検証（図3） <ol><li>予測された配列の存在量と推定される化学感覚遺伝子機能の両方で、ダイナミックレンジの相対的な遺伝子発現レベルを比較するために、できるだけ多くの遺伝子を選択する。 </li><li>各標的遺伝子のための設計プライマー対は、特定の100-180塩基対のPCR産物を増幅した。セットごとに少なくとも1つのプライマーは、イントロン境界にまたがる確実にすることによって、非特異的なgDNAの増幅を除外する。あるいは、ゲノム汚染を低減するためにDNase処理を使用しています。 </li><li>集める前のセクションで説明したように昆虫組織。すべてのqRT-PCR反応を完了するのに十分なRNAを提供するために必要な組織を計算する。 注：生物学的三連と技術的三連の反応は、結果の最大の自信を提供します。 </li><li> 、生物学的および技術的の両方をそれぞれの各標的遺伝子の平均のために（Ctは[対象] -Ct [参照]）を複製- X ターゲットとして相対的な遺伝子定量化を計算します。生物学的反復の間のCt値を正規化し、相対的発現の比較でY軸スケールを根絶するために、ハウスキーピング遺伝子を使用する。 </li><li> RNA-seqのと回帰ベース、ブートストラップ同値手順9、反復的に各組織からのデータに、適用を使用して定量RT-PCRデータセットの類似性を評価する。 注：この手順は、観察されたRNA-seqの及び定量RT-PCRデータの周りに構築することができる最小の「類似性の領域」を特定し、QRT-によって測定される相対的な遺伝子発現を可能にするPCRは、RNA-seqのにより相対的遺伝子発現の測定と統計的に同等であると考えられる。 </li></ol>

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<li>Hart, T., Komori, H. K., LaMere, S., Podshivalova, K., Salomon, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Finding+active+genes+in+deep+RNA-seq+gene+expression+studies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Finding active genes in deep RNA-seq gene expression studies.</a> BMC Genomics. 14 (778), (2013).</li>
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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

味覚感覚器からの​​記録活動電位の最も挑戦的な側面はあるの応答を決定されている「通常」与えられた昆虫種、総数と味覚受容体ニューロンの感度（GRNs）の最初の時間を記録する単一の味覚感覚子チップを採用する場合であるそう不明。多くの予備録音は最初のテストの範囲や化学物質の濃度を決定するために必要とされる。この例では、我々は、単一のGRNはDEETの低濃度（ 図1）に応答したことを観察し始めた。その後、我々は、苦味または他の昆虫に嫌悪であることが知られている化学物質の濃度の範囲に同じ感覚器内の反応を検討し、同様のスパイク形状および振幅（ 図1）を観察した。これらの観​​察は、単一のGRNのサブタイプはこれらの嫌悪の化合物に応答することを示唆した。比較のために、我々はmosquに摂食を刺激することが知られて甘い化合物を試験した同じようなスパイクが発生したかどうかを確認するためにitoes。我々は、この場合、異なる、より大きなスパイクを観察した。同様に、3つの合計GRNサブタイプ数をもたらす、塩の刺激に応答して第三の中間サイズのスパイクを観察した。 <p class="j...

DEET、Picaridin、シトロネラールとIR3535のような化合物は、効果的に重要な病気のベクトル1,2 ネッタイシマカヒトスジシマカなどの蚊を、撃退することが示されている。私たちは、蚊の忌避に関与する細胞を決定するために、特定の味覚感覚器に関連した感覚ニューロンからの活動電位を記録します。これらの組織で発現された遺伝子の下流の配列決定と相まって、我々は、改善された撥水性機能のための新規な化合物をスクリーニングするために最も可能性の高いこれらの細胞の応答を媒介する遺伝子を同定することができる。 RNA-seqが迅速に遺伝子発現の時間的·空間的変化を追跡するための標準になりつつ、強力なツールです。昆虫化学感覚付属や臓器のRNA-seqの分析が大幅に遺伝子6により従来のPCRベースの検索遺伝子に改善し、いくつかの昆虫種3-5の分子受容体を発見するために使用されている。昆虫は最も多様な動物のクラスを表す、事前遺伝子とユニークな表現型との間の接続を研究する多くの機会をセンディング。 RNA-seqの技術は、あらゆる生きている昆虫の組織に採用することができる。同様に、uniporous味覚感覚器内の感覚細胞からの電気生理学的記録は、多くの異なる昆虫種で達成することができる。これら2つの技術のペアリングは、研究者が観測された化学感覚表現型に関与セット遺伝子を絞り込むことができます。異なる種は、特定の課題を提示するが、化学感覚受容体遺伝子および化学感覚適応の間の接続を通知することができる。化学感覚感覚器のサイズおよび形態は可変であり、活動電位を記録する際のノイズを低減し、反復可能な信号を識別するために大規模なトラブルシューティングを必要とする場合がある。化学感覚器官の解剖は、昆虫の形態およびサイズ​​に応じて、些細なまたは繊細で時間がかかるかもしれない。高品質なRNAの回収は、そのような中に特定の顔料を避けるように、同様にいくつかのトラブルシューティングが必要な場合があります組織収集。 行動試験によって忌避化合物の効果を実証する直接的で有益であるが、このアプローチは、時間の作用機構に関して集中的かつ広い。 RNA-seqのと相まって電気生理学は、昆虫に回避行動を駆動何のより具体的な分析が可能になります。化学的差別の「キット」は、昆虫種で同定されたならば、既知の忌避剤に改善するためのより具体的な試みが可能である。これらの行動に関与する感覚細胞における受容体および関連タンパク質は、直接的な化学スクリーニングのために、異種発現されてもよい。さらに、分子モデリングは、化学物質は、これらの受容体7からの強い応答を誘発するかを予測することができます。 化学感覚組織の狭いセット内のすべてのアクティブな遺伝子のスナップショットは、他の種における類似の遺伝子を同定するのに有用であり得る。配列相同性および発現シを使用してmilarities、研究者は、最も可能性の昆虫に広く有効である忌避剤に対する応答を媒介する受容体分子の集合を形成することができる。私たちは、昆虫の化学感覚経路を解体の研究者を支援する非モデルと経済的に重要な昆虫のneuroethology掘り下げるために多くを説得するために以下のプロトコルを提示する。

<table><tbody><tr><td>ガラス毛細管</td><td>AMシステム</td><td>628000</td><td>標準、1.5ミリメートルX 0.86ミリメートル、4 "</td></tr><tr><td>銀線</td><td>AMシステム</td><td>7875.015</td><td>"裸</td></tr><tr><td>タングステンワイヤー</td><td>アルファ製品</td><td>369</td><td>0.127ミリメートル</td></tr><tr><td>直径ファイン鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11252</td> <td>#5SF イノックス</td></tr><tr><td>再冷却ステージ</td><td>BioQuip製品</td><td>1429</td><td>チルテーブル</td></tr><tr><td>プリアンプ</td><td>Syntech</td><td>Taste Probe</td><td>電気</td></tr><tr><td>生理学用プリアンプソフトウェア</td> 電気<td>生理学用</td><td>Syntech</td><td>Autospike</td>ソフトウェア</tr><tr><td>TetraMin 魚料理</td><td>Tetra</td><td>Tropical fish food granules</td><td>魚料理 微粉末に粉砕した魚料理</td></tr><tr><td>TRIzol</td><td>Life Technologies</td><td>15596-026</td><td>RNA単離試薬</td></tr><tr><td>RNeasy Plusミニキット</td><td>Qiagen</td><td>74136</td><td>には、gDNA エリミネーターと RNeasy スピンカラムが含まれています</td></tr><tr><td>ナノドロップ分光光度計</td><td>ナノドロップ製品</td><td>ND-1000</td><td>卓上分光計</td></tr><tr><td>R 統計</td><td>フリーウェア (Robert Gentleman と Ross Ihaka によって作成)</td><td>www.r-project.org</td><td>統計パッケージの lm 機能と Equiv.boot 機能を R コンピューティング環境で使用します。</td></tr><tr><td>1.5 mlチューブラック</td><td>エバーグリーン</td><td>240-6388-030</td><td>液体窒素をいくつかの空のウェルに注ぎ、ティッシュを凍結して粉砕します。</td></tr><tr><td>1.5 ml コレクションチューブ ベビーベッド付き</td><td>グレインジャー</td><td>6HAX6</td><td>RNase フリー</td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>11178160</td><td>凍結組織をスピンダウンして、1.5 ml チューブの底に保持します。</td></tr><tr><td>プライマー-BLASTプライマー設計ツール</td><td>NCBI</td><td>n / a</td><td></td></tr></tbody></table>

生理的録音と黄熱病の蚊の味覚付属器rnaの配列決定ネッタイシマカ

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

>jove_content<蚊の感覚ニューロンからの活動電位の電気生理学的記録は、蚊の感覚ニューロンからの電気生理学的記録により、研究者はこれらの病気媒介者の化学的知覚を垣間見ることができます。 私たちは最近、直接的な電気生理学的調査を通じて、雌のネッタイシマカのラベルに、DEETやその他の忌避剤、および苦いキニーネに応答する苦味感知ニューロンを特定しました。 これらの味覚受容体ニューロン応答は、これらの接触化学受容組織で発現する推定化学受容遺伝子を解明するために、雄と雌の両方のラベラおよびタルシサンプルからの総mRNAのシーケンシングを促しました。 足根のサンプルは、男女ともに親胸部、中胸部、中胸部のサブタイプに分けられました。 次に、同じ組織サンプルでqRT-PCRを実施してデータセットを検証し、統計的手法を使用して2つの方法間で結果を比較しました。 分子機能に取り組む研究は、蚊による忌避知覚に関与する遺伝子を決定するために、特定の遺伝子を標的にすることができるようになった。 これらの受容体経路は、有害なウイルスの拡散を抑制するための宿主探索行動の混乱に向けた新規の忌避剤のスクリーニングに使用される可能性があります。

アエからの活動電位のトレース記録。ネッタイシマカ味覚感覚器（ 図1）化学物質の範囲の直接刺激の有効性を示す。この技術は、合理的な時間範囲（一般に500ms未満）にわたって所定の振幅と持続時間のスパイクをカウントすることによって、任意の刺激の化学への応答を定量することができる。トレース記録は、実験条件の所定のセットの下で容易に再現可能でなければなりません。そうでない場合には、観察された生理学的反応は、試験動物種の個体間の珍しい表現型を表すことができる。 生RNA-seqのデータは、丸みを帯びたRPKM（マップされた数がマッピングされた読み取り万人当たりの転写産物のキロベースの長さごとに読み込む）またはFPKM（百万分の転写産物のキロベース長さ当たりの読み取りフラグメントの数がマッピングされた読み取り）として表示される前にろ過し、正確なマッピングが必要です数値は（ 図2）。の区別これら二つのRNA-seqの正規化手法は、2つの精液の作品10,11に記載されてい...

電気生理学的検査によって決定されるようネッタイシマカの主要な味覚付属における遺伝子発現を評価するために2つの方法を使用して、我々は、推定される苦味反発化合物に神経細胞応答の根底にある遺伝子のセットを同定した。

生理的録音と黄熱病の蚊の味覚付属器RNAの配列決定ネッタイシマカ

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

この手順の全体的な目標は、昆虫の味覚ニューロンの応答を観察し、味覚組織での遺伝子発現を測定することです。これは、最初に、異なる濃度のいくつかの味に対する特定の味覚毛の応答を記録することによって達成されます。2番目のステップは、味覚組織を注意深く解剖することです。次に、サンプルを性別と付属物で分けます。次に、各組織サンプルから全RNAを単離し、次世代シーケンシングおよびQPCR用のCD NA調製物を作成します。最後のステップは、遺伝子発現データを解析し、発現したケモス感覚遺伝子が昆虫の味覚に対する生理学的反応をどのように媒介するかなどの仮説を立てることです。最終的に、電気生理学的記録を使用して昆虫の味覚系の受容範囲を示し、味覚組織のRNAシーケンシングを使用して、味覚受容の最も重要な遺伝的要素を強調します。一般的に、これらの方法に不慣れな個人は、昆虫の化学療法のサイズが小さいため、苦労します。感覚付属物。小さな昆虫の臓器を解剖するか記録するかにかかわらず、患者での実践がこれらの技術を習得するための鍵です。この手順を開始するには、ガラスキャピラリーを備えたピペットプーラーで細い先端記録電極を解剖顕微鏡で引っ張ります。電極の先端を慎重に折って、その開口部がターゲットの中心を包み込むのに十分な幅を持ち、隣接する構造に接触しないように十分に小さくします。次に、マイナス20°Cの冷凍庫で2〜4匹の成虫に2〜4匹の昆虫に麻酔をかけます。その後、セロハンテープの小さなストリップでカバースリップを使用して、昆虫の1つを固定します。顕微鏡下で。ターゲットセンサーをその形態と位置で識別し、電極の侵入角度から動物が自由にアクセスできるように向きを変えます。次に、タングステンワイヤーを背側胸部に挿入します。接地電極として機能するには、先端からのガラス電極に目的の刺激溶液を充填します。先端を押さえながら気泡をはじき出します。電極に銀線を挿入して、記録電極と刺激電極として機能します。その後、電極をプリアンプに接続すると、ニューロンの活動を捕捉するためのセトリング時間を短縮できます。プリアンプは、電気信号を収集、保存、および分析するためのスパイク録音ソフトウェアを備えたコンピューターに接続されています。次に、制御ソリューションでCentumを刺激して、その機能を確保します。スティミュラス アーティファクトの 200 ミリ秒後から始まるスパイクをカウントします。用量反応結果を得るため。Centumを実験用化学物質の濃度の増加にさらし、刺激の間に最低3分の間隔を空けて、適切な回復を確保します。この手順では、ドライアイスを入れた浅いクーラーを用意します。組織採取チューブには、さまざまな種類の組織を採取するための1.5 mL RNAフリースナップキャップチューブをラベル付けします。過度の結露を避けるために、チューブを閉じたままにしてください。次に、マイナス20°Cの冷凍庫で30〜40匹の蚊に15〜30秒間麻酔をかけます。次に、麻酔をかけた蚊を寒い段階に移し、性別で分類します。昆虫の翅をつかんで背側を下に向け、味の付属器を傷つけないように注意します。解剖顕微鏡下で、ラベルのすぐ近位にある蚊のプロボアを優しくつかむことにより、男性または女性のいずれかの男性または女性からペアのラベルベラまたはタルシを解剖します。ベラは、内側のスタイラスを露出させ、他の鉗子のペアでラベルを取り外すための鉗子の1対。次に、組織を足根組織用のコールドコレクションチューブに入れます。脛骨と最初の足根骨セグメントの接合部で蚊の足をそっとつかみ、足根骨を取り除きます。次に、組織を冷たい標識チューブに入れます。0°C遠心分離機で0°C遠心分離機で1分間コレクションチューブを回転させ、チューブの底に組織を保ちます。解剖中に採取チューブに水分が蓄積した場合は、採取した組織を覆って保護するために、50マイクロリットルの冷たいトリオール試薬を追加してください。液体窒素が入った1.5ミリリットルのチューブラックでチューブを凍結します。その後、組織破壊の前にドライアイスで冷却することにより、ぴったりとフィットするRNAフリーの乳棒を準備します。次に、ティッシュを微粉末に粉砕し、もう一度繰り返します。トリオールの総量を1ミリリットルにして復活させます。ボルテックスにより、地上組織を懸濁します。その後、粉砕組織に200マイクロリットルのクロロホルムを加え、よく混ぜます。室温で5分間後、摂氏4度の遠心分離機で重力の11,000倍で15分間回転させます。水層をゲノムDNAフィルターカラムに直接慎重に追加します。次に、重力の11,000倍で5分間回転させます。同量のRNAを含まない70%エタノールをフロースルーに加え、ピペッティングで混合します。液体をRNAコレクションカラムに移し、RNA抽出を続けます。その後、精密分光光度計で全RNAの純度を定量および評価し、標準的なRNAシーケンシング法に進みます。エイドのE GTI味覚刺激性イラからの活動電位の微量記録は、さまざまな化学物質による直接刺激の有効性を示しています。この手法は、500ミリ秒未満の妥当な時間範囲で特定の振幅と持続時間のスパイクをカウントすることにより、任意の刺激化学物質に対する応答を定量化するために使用できます。これらの3つのスパイクは、感度の異なる3つの感覚ニューロンサブタイプに対応しています。RNA-Seqデータセットの生物学的複製は、組織収集のコストや難易度によって制限される場合があります。Q-R-T-P-C-Rは、全遺伝子発現の小さなサブセットを低コストで検証する能力を提供し、必要なソースも少なくて済みます。左パネルに並べて示したRNAは、RN Aeqで決定される相対発現とQ-R-T-P-C-Rで決定される相対発現の比較です。これら 2 つの方法は、遺伝子存在量の推定に異なるケミストリーに依存しています。右側のパネルにグラフィカルに表示された統計的同等性関数は、各ケースの確実性の限界を示しています。このビデオを見た後、昆虫組織を解剖してRNAを分離する方法と、生きた昆虫の味覚毛からの神経信号を記録する方法をよく理解しているはずです。

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学ぶ生理的録音とRNA配列決定法でネッタイシマカの味覚ニューロン応答と遺伝子発現を解析する手法。電気生理学的技術と次世代シーケンスを組み合わせて、苦味化合物応答に関連する遺伝子を同定します。

生理的録音と黄熱病の蚊の味覚付属器RNAの配列決定ネッタイシマカ

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