西ナイルウイルス変異株の感染に対するMyD88非介在細胞性免疫応答のインビトロ分析

この研究の全体的な目標は、in vitro T-cell priming assay樹状細胞、またはWest Nllウイルスに感染したマウスから精製されたdcsにおけるWest Nileウイルス感染に対する細胞媒介性免疫応答を測定するための2つのフローサイトメトリーベースの免疫学的アッセイを導入することです。卵子ペプチドの存在下でOT 2つのトランスジェニックマウスから精製したナイーブCFSE標識T細胞との共培養。次いで、T細胞の増殖応答を、ウエストナイルウイルス感染マウス由来の改変細胞内サイトカイン染色アッセイPLEサイトにおいて、バイオセーフティレベル2の実験室でフローサイトメトリーにより解析し、マイクロ遠心チューブ内でウエストナイル特異的ペプチドを用いてex vivoで刺激し、次いで細胞内サイトカイン産生を維持し、バイオセーフティレベル2の実験室でチューブ内でフローサイトメトリーにより分析する。

最終的に、これらの方法は、ウエストナイルウイルスに感染した動物のT細胞の活性化における特定のシグナル伝達経路の役割を調べるために使用でき、バイオセーフティレベル3の施設内でのパフォーマンス時間を大幅に短縮します。この方法は、ウェスタンNウイルスの細胞性免疫に関する洞察を提供することができますが、in vitro T細胞プライミングアッセイのために、他のバイオセーフティレベル3の病原体にも適用できます。まず、野生のC 57 black six A、私のD eight eightノックアウトマウスにウエストナイルウイルスを接種した脾臓樹状細胞を分離し、製造元の指示に従って抗CD 11 C磁気ビーズで未感染の動物を制御します。