マウス脂肪デポのローカライズ、識別、および切除

原因肥満や他の併存疾患の間で抜本的なと負の接続に、ロールの脂肪の研究は、病気で再生し、全体的な健康が保証されています。私たちは、 その場で、そしてインビトロ方法で使用して脂肪の研究を可能に脂肪デポの単離および切除するためのプロトコルを提示する。

この手順の全体的な目標は、脂肪に対する、および脂肪によるさまざまな因子効果の分析のための脂肪沈着の同定と切除を実証することです。これは、最初に成体マウスの内臓と脂肪貯蔵庫を露出させることによって達成されます。2番目のステップでは、臓器と余分な組織を取り除き、デポをより露出させ、対応する場所にあるデポを特定できるようにします。

最後のステップでは、汚染を避けるために特別な注意を払って脂肪組織を抽出します。最終的に、これらの沈着物の単離と切除は、組織学的分析、タンパク質発現、酵素活性、遺伝子発現分析、およびin vitro研究のための組織を提供します。この特定のプロトコルが既存の方法論と比較した場合の主な利点は、最小限の解剖と最小限の汚染で複数のデポ分離を可能にすることです。

したがって、この手順は、肥満の分野に関する質問に答えるのに役立ちます。たとえば、脂肪組織の人間の病気に対する有害な影響や有益な影響です。褐色脂肪組織を単離するには、まず、エタノールを洗浄し、安楽死させた成体マウスを仰臥位に置き、背をテーブルに背負わせます。

次に、鉗子を使用して横隔膜のすぐ下の皮膚を持ち上げ、はさみで皮膚を切開します。マウスの周囲を横方向に切り取り、腹膜を露出させます。次に、片手で下部の付属肢と腹部を持ち、もう一方の手で皮膚を頭に向かって引き上げてマウスの上半分を手袋をはめ、蝶の形をした茶色の脂肪貯蔵庫またはコウモリを明らかにします。

次に、スケープと対応するコウモリの貯蔵庫を見つけます。次に、解剖顕微鏡を使用して、蝶の上にある表面の白い脂肪を慎重に取り除き、関連する筋肉を避けながら肩甲骨間の褐色脂肪を解剖します。皮下脂肪組織または皮下脂肪組織を分離するには、片手で上肢と胸部を持ち、もう一方の手で皮膚を足に向かって引き下げてマウスの下半分を手袋をはめ、三角形の鼠径部サブク沈着物を明らかにします。

次に、マウスを仰臥位に戻し、サブq脂肪の三角形を慎重に解剖して、腹腔から性腺脂肪を分離します。はさみを使用して、横隔膜の真下に腹膜を横に切ります。次に、横隔膜から直腸まで腹膜を冠状に切断して腹部の臓器を露出させ、精巣epiとvasa deiaの両方の表皮脂肪貯蔵庫を慎重に解剖します。

血管周囲脂肪組織を分離するには、動物を仰臥位に維持し、上部と下部の付属肢を外側に伸ばします。.次に、鉗子で剣状突起を持ち上げて、体の上部全体に張力をかけ、横隔膜を水平に切り込み、胸腔の下部を露出させます。胸骨のすぐ横にある頭に向かって胸郭を上方に切り込み、鎖骨のすぐ下にある胸郭を拾います。

鎖骨の下方の長さに沿って腋窩に向かって両方向に切断します。胸腔とその内容物がはっきりと見えるようになりました。その領域から液体が取り除かれたら、気管支と付着血管を切断して肺を切除し、心臓を露出させます。

胃と食道を特定した後、胃食道接合部で食道を切開して胃を解放します。次に、腸と周囲の腸間膜を特定します。腸間膜を表面的に切り取り、次に腸をできるだけ直腸の近くで切って、胃、腸、結腸、膵臓、脾臓を解放します。

臓器が摘出されたら、肝静脈と接続腸間膜を切断し、肝臓のすべての葉を切除します。腎臓を取り巻く内臓層と脂肪を切り取り、in vivoで大動脈に付着した腎臓を大動脈に残して、大動脈のさまざまなセグメントの地理的マーカーとして機能します。次に、腎臓の周りの領域が明確になったら、マイクロハサミとマイクロ鉗子を使用して、大動脈を背側から脊椎への付着部と腹側からの食道への付着から分離します。

胸部では、大動脈を心臓の起源から腸骨領域の分岐部までたどって切り離します。大動脈脂肪組織を単離するために、この時点で鎖骨下血管を同定することができる。これらの血管を首から大動脈基部まで分離して、心臓の大動脈接合部と根部をよりよく露出させます。

次に、胸腺を切除し、腕頭症、左総頸動脈、左鎖骨下動脈を切開して、心臓の動きを可能にします。最後に、解剖顕微鏡を使用して、大動脈を囲む血管周囲脂肪組織またはP VVA T層を観察します。次に、マイクロ鉗子を使用して組織を大動脈からゆっくりと引き離し、マイクロハサミを使用して、横隔膜が配置されている場所のすぐ上の胸部から大動脈へのPVATの付着を優しく切断します。

次に、マイクロ鉗子を使用して組織を大動脈からそっと引き離し、マイクロハサミを使用して、横隔膜が配置されている場所のすぐ上の胸部から始めて、PVATの大動脈への付着を穏やかに切断します。このプロセスを、大動脈血管の腸骨分岐部のすぐ上に位置し、腎枝コウモリよりも劣る、腎下大動脈領域で終わる大動脈の全長で繰り返します。また、watサンプルは、皮下脂肪細胞の初代細胞株をhおよびe染色した組織学的分析と血管周囲細胞の染色により区別できます。

その後、脂肪細胞を培養し、プレアディポサイトからアディポサイトへと分化させて、マイクロアレイ解析を行うことができます。これらの代表的な画像では、例えば、油赤色O染色脂肪細胞で培養前駆体細胞の脂肪細胞への変換を確認し、この方法により単離、培養、分化させたものを、さらなるin vitro解析に用いることができる。この代表的な実験では、未治療の対照と比較して、実験的治療に応答して単離された血管周囲脂肪細胞において、MM P 2の酵素活性が低下することが観察されました。

この手順を試行する際は、汚染を最小限に抑えるために、手袋を交換するだけでなく、器具を頻繁に清掃することを忘れないでください。したがって、これらの組織が収集された後、それらに対してさまざまな手順を実行できます。例えば、細胞培養、組織学的解析、タンパク質測定、さらには遺伝子発現などです。

そして、それらの結果を使用して、異なるデポ間の関係、類似点、相違点を理解するのに役立ちます。