当然の雌ラットをサイクリングで馴化恐怖の消滅を研究するためのプロトコル

この手順の全体的な目標は、エスラサイクルの低ホルモン状態と高ホルモン状態の間の女性の恐怖絶滅行動に対する性腺ホルモンの影響と、エストラジオールが外因的に投与された場合の役割を調べることです。これは、まず成体の雌ラットのesraサイクルをモニタリングし、実験前に彼らがどの段階にあるかを特定することによって達成されます。次に、発情期にある動物は、居住と恐怖の条件付けのために割り当てられた部屋に入れられます。

翌日、動物が発情期になると、雌にエストラジオールまたはビヒクルを注射し、恐怖の絶滅訓練を受けます。最後に、3日目に、動物は前日の絶滅セッションの想起をテストするために同じチャンバーに戻されます。最終的に、ESTストリースの同定のための膣スワブにより、研究者は性腺ホルモンの自然な変動を操作して、恐怖の消滅記憶への影響を研究することができます。

このプロトコルは、性差の分野で重要な疑問、例えば、恐怖の消滅過程は男性と女性で異なるのかなど、答え出すために使用することができます。もしそうなら、これらの違いを満たすホルモンと神経生物学的メカニズムは何ですか?このプロトコルの主な利点は、そうする方法を共有することにより、絶滅を恐れる女性の研究を促進するのに役立つことです。

これらの方法に不慣れな研究者は、手順が時間がかかり、適切な技術に大きく依存する可能性があるため、eserサイクルを確実に監視するのに苦労することがよくあります。これらの研究の意味合いは、恐怖や不安に関連する障害に対する性別特異的な治療オプションに貢献する可能性があります。これは、女性が男性の2倍もこれらの精神病理を発症する可能性が高いことを考えると、重要なことかもしれません。

リサ・マンは、研究室のポスドクであり、またケア・コバートでもあります。ラボの研究助手が手順を示します 発情周期を監視するためのサンプルを収集するには。0.9%生理食塩水を準備した後、綿の先端のアプリケーターを液体に浸し、ペーパータオルを使用して余分な溶液の先端を吸い取り、ラットの尾を上に保持し、苦痛を引き起こさないように注意してください。

綿の先端を膣管に深くなりすぎないようにそっと挿入し、壁の周りを転がして緩んだ膣細胞を捕らえてからすばやくします。液体を移しすぎないようにチップを取り外し、アプリケーターチップを事前にラベル付けされた顕微鏡スライドにそっと転がし、サンプルがスライドに移動することを確認します。少なくとも2サイクルにわたってサンプルを採取し、1枚のスライドで数日間連続して転写することで、日々のESTエクストラをより適切に追跡し、特定することができます。

相変化 スライドが乾いたら、固定液に10回、次に染色液に10回浸漬します。そして最後に、対比染色液に5回入れます。水でやさしくすすいでください。

コンディショニング実験の開始前に顕微鏡で見る前にスライドを完全に風乾させ、ハウスライトを1日20〜30分間オンにして3日間、女性をコンディショニングチャンバーに事前にさらして、環境に順応できるようにします。彼らが事前に露出したボックスを研究のチャンバーとして割り当てます。セッションと動物の間のボックスを徹底的に清掃して、行動やESTストレスサイクルに影響を与える可能性があるため、臭いを取り除きます。

動物がESTエクストラサイクルの発情期にあることを確認したら、慣れ条件付け段階を開始します。最初のトーンコンディション刺激の前に、動物が刺激中に携帯電話を消費する秒数を測定することにより、フリーズのプレトトーンベースライン測定を行います。時間間隔がない場合は、2番目に動かない状態で過ごした時間を試行の期間で割って、フリーズスコアを計算します。

ME発情期に絶滅訓練を行うには、ESTROの最終日にラットをスワブで決定するようにコンディショニングします。動物をコンディショニングチャンバーに入れ、CSのみの慣れ試験を実施します。CSトーンを30秒間誘導します。

次の試行まで平均 3 分待った後、コンディショニングの前に CS 単独の試行をさらに 4 回、合計 5 回の試行を繰り返します。フットショックグリッドフロアを電気刺激発生器に接続します。無条件刺激として0.5〜0.6ミリアンペアの刺激レベルを使用するか、慣れセッションの直後のCSとして4キロヘルツ80デシベルトーンを使用します。

恐怖条件付けのペア CS US 試行を開始するには、32 番目の CS トーンを提示し、その後、約 3 分間の試行間隔で区切られた 0.5 秒の米国ショックを示します。コンディショニング セッションの最後に、ペアの試行をさらに 6 回繰り返します。動物を自宅のケージに戻し、2日目の翌日まで動物施設に戻します。

プロトコルの初日を受けたすべての動物のME発情期を綿棒で拭いて特定した後、ゴマ油または0.9%生理食塩水で十分なエストラジオールを準備し、各動物が1キログラムあたり15マイクログラムの用量を受け取り、ホルモンを皮下投与します。肩甲骨の間のゆるい皮膚を首で軽くつまむように持ち上げ、皮膚のひだによって形成される三角形に注射器を挿入します。動物が注射を受けてから30分後、動物をコンディショニングチャンバーに入れ、20CSを単独で行うことにより、絶滅訓練を開始します。

各試行は、32番目の4キロヘルツ、80デシベルトーンで構成され、24時間後の試行の間に約3分間あります。3日目は、1日目と2日目にセッションを完了した動物を、割り当てられたコンディショニングチャンバーに入れた後、綿棒で拭きます。リコールセッションの完了時に、試験の間に約3分を挟んで3つのCs単独の試験を実施することにより、絶滅リコールセッションを開始し、動物を自宅のケージに戻し、この恐怖絶滅プロトコルのテキストプロトコルに従ってデータを分析します。

よく消滅し、絶滅訓練の記憶を保持していた動物は、絶滅リコール中の行動試験の最終日に低い恐怖を示しました。ここで示したように、雄と雌のラットは、条件付けられた恐怖表現に大きな違いはない。各フェーズでは、動物を高エストロゲンES相グループと低エストロゲンES相グループとして別々に分析すると、性差が明らかになります。

このグラフは、ESTエクストラサイクルの低エストロゲンmeesフェーズ中に絶滅トレーニングを受ける雌ラットである恐怖の絶滅記憶に対するエストロフェーズの影響を示しています。3日目の絶滅記憶や、PROEで訓練された記憶を思い出さないでください。しかし、絶滅前にメトリ雌に1キログラムあたり15マイクログラムのエストラジオールを皮下注射すると、恐怖の記憶の定着が促進されるように見えます。これは、消滅想起時の凍結が少ないことで示され

したがって、これらのデータは、性腺ホルモンが恐怖の消滅想起を調節し、条件付けられた恐怖の消滅行動の性差を媒介できることを示しています。カニューレ挿入手術や免疫組織化学などの追加の手順は、ここで説明する方法と組み合わせて実行して、エストラジオールは恐怖、消滅、記憶の固定を調節するために脳内でどこに作用しているのか、エストラジオールはこれらの領域内のニューロン活動をどのように変化させているのかなどの質問に答えることができますか?このビデオを見た後、あなたは明確なex拡張の自然なリサイクル雌ラットとエストラジオールの影響を研究する方法について明確に理解しているはずです。