Name: スフェロイドにおける哺乳動物細胞の大規模拡張のための連続供給することによって栄養規制 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: 学ぼう、攪拌懸浮バイオリアクターを用いた連続供給による哺乳動物細胞スフェロイドの栄養制御法。一定の栄養環境で細胞増殖を最適化し、大規模培養と細胞治療への応用可能性を示します。

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著者は、有益なコメントをいただいたMichael Garwood氏とSam Stein氏、そして原稿の準備を手伝ってくれたKristen M. Maynard氏に感謝します。

著者らは開示するものは何もない。

58 -生物学的薬剤の製造のための、および細胞治療のために哺乳動物細胞産物の生成は、大規模での哺乳動物細胞55の文化と監視が必要です。さらに、これらのアプリケーションは、定義され、検証された培養条件を求めます。単純にこれらの要件のすべてを満たしていないであろう研究技術を用いて細胞の量を増加させます。栄養素や老廃物の蓄積の変動を引き起こすマニュアルの媒体の変更は、細胞質、生存率および収量を減らします。バイオリアクターの使用は、生物医薬用途のための微生物の商業的培養のために確立され、同様の戦略は、哺乳動物細胞培養物に適用されています。それらの環境と、哺乳動物細胞の複雑な相互作用は、細胞増殖の可能性を最適化するために、栄養素のレベルを調節するために特定の変更を必要とします。 これらの問題に対処するために、我々はstraightfoを開発しました変動金利灌流送り機構と攪拌懸濁液バイオリアクター内の生理学的レベルを近似する、特定の目標範囲内にグルコースレベルを維持するrward方法。これを達成するために、β細胞株のスフェロイ...

移植のための生存および機能的ヒト細胞を大量に生成するために、培養条件の調節に不可欠です。 3 -代謝老廃物の蓄積に伴う栄養素の枯渇は、細胞産物1の品質を低下させる老化および代謝変化の主な原因です。この手順では、培養期間を通じて生理学的範囲4中のグルコースを調節するために調整されたレート灌流供給システムと組み合わせて攪拌バイオリアクターを用いて、スフェロイドにおける培養哺乳動物細胞への方法を示しています。これらの研究のために、生理学的範囲は、100〜200ミリグラム/デシリットルと定義しました。同方法は、乳酸のような他の栄養素および代謝廃棄物を調節するために使用することができます。 少量の静的培養（1 - 30ml）を、典型的にはexperimeための細胞系を維持し、区別するために、実験室の設定で使用されていますNTAL目的。細胞の継代は、定期的に、必要に応じて完全培地の変更を行います。ほとんどの「従来の」培地は、栄養制限のリスクなしあまり頻繁に培地交換を可能にするために、高グルコース濃度（これらの研究で使用したDMEM 450ミリグラム/デシリットル）を有しています。しかし、このバッチ供給方法はまだ、頻繁な操作を必要とするセル環境の変動を紹介し、汚染5のリスク増加- 9。攪拌した懸濁液バイオリアクター（SSB）より良好な混合を提供し、3,10取り扱い減少- 20が、静的な文化など、栄養と廃棄物レベルの潜在的に有害な変動に貢献マニュアル培地交換を必要とします。 SSB培養の灌流供給は連続注入し、培地を除去することにより、これらの問題を減少するが、細胞増殖に起因する栄養レベルの大きな変化は、問題が残っています。調整後の送りraの使用推定されたセルの要件に基づいて、栄養利用の計算から、TEは、細胞生存率を最適化するために必要な安定な細胞環境を提供し、21機能することができる- 24。 25具体的に多能性細胞の培養および拡大のための哺乳動物細胞のスケーラブルSSB培養のための方法について説明する多数の文献がある-他の人と32は 、膵島（ベータ）細胞17,33,34に焦点を当てたが、または生物学的製品24の生産、 35から38。これらの調査の細胞型の多くは、スフェロイド培養物中で成長させてもよいし、使用される細胞型に特異的な手順は、連続的な供給システムを実装する前に最適化されるべきです。 43 -この実証では、灌流供給方法は、撹拌バイオリアクター39におけるスフェロイドとして増殖させ、β細胞株を拡大するために使用されました。本明細書に記載される方法を提供します標的培養条件を達成するために、オフライングルコース測定値に基づいて速度調整を供給する簡単な実装。生理学的なグルコースレベルを維持するために、この方法では供給量を調整すること増加細胞収率を示しています。哺乳動物細胞は、エネルギー産生のために、重要な栄養素、グルコースに依存しているので、この細胞株の使用は、多くの培養哺乳動物細胞44のモデルを表します。また、この線は、グルコース45の慢性的に高いレベルに感受性であるベータ細胞のさらなる複雑性を例示します。この研究のために、β-TC6細胞を、インビボでのランゲルハンス島の平均サイズを近似するために、培養中のスフェロイドを形成させました。灌流バイオリアクターシステム17 -消費グルコース調節供給速度で19,21,46は 、生存率の変化なしに、生理学的条件およびより高い細胞収率を維持することになりました。

<table><tbody><tr><td>&#946;TC-6細胞ATCC</td><td>、マナッサス、VA</td><td>CRL-11506</td><td>マウスインスリノーマ細胞株(接着細胞型)</td></tr><tr><td>DPBSいいえCa、No Mg</td><td>Invitrogen、カールスバッド、CA</td><td>14190-144</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144?ICID=search-14190144">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144?ICID=search-14190144</a</td></tr><tr><td>>Dulbecco's Modified Eagles Medium</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td></td><td>製品番号については以下を参照してください&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM High Glucose (500 mM)</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11965-092</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092</a></td></tr><tr><td>DMEM Low Glucose (100 mM)</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11885-084</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084%20(note%20that%20this%20medium%20already%20contains%20pyruvate)">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084(この培地にはすでにピルビン酸が含まれていることに注意してください)</a</td></tr><tr><td>>L-glutamine</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25030081</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081?ICID=search-product">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081?ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>ピルビン酸ナトリウム</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11360070</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070?ICID=search-product">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070?ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>Heat Inactivated Burcine Serum</td><td>Gibco - Life Technologies</td><td></td> <td>10082147<a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147</a></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25200056</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056?ICID=search-product">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056?ICID=search-product</a></td></tr><tr><td>T-150 組織培養処理フラスコ</td><td>コーニング, コーニング, NY</td><td>430825</td><td>http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=430825(Lifesciences) &categoryname=</td></tr><tr><td>NuAire細胞培養インキュベーター</td><td>ミネソタ州</td><td></td>プリンストン <td>US Autoflow.ウォータージャケット付きのCO2調整細胞培養インキュベーターであれば、どれでも使用できます。</td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td></td><td></td><td>Sorvall RT 7 (同様の卓上型遠心分離機を使用できます)</td></tr><tr><td>冷蔵庫</td><td></td><td></td><td>任意の実験室用冷蔵庫を使用できます (これらの研究では、小さな卓上型バージョンが使用されました)</td></tr><tr><td>1 L ガラス瓶</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>1395-1L</td><td>どのベンダーも使用できます。 http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=1395-1L(Lifesciences) &categoryname=</td></tr><tr><td>2 L ガラス瓶</td><td>コーニング, コーニング, NY</td><td>1395-2L</td><td>どのベンダーでも使用できます</td></tr><tr><td>250 ml 攪拌バイオリアクター&nbsp;</td><td>コーニング、コーニング、ニューヨーク</td><td>4500-250</td><td>http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=4500-250(ライフサイエンス) &categoryname=</td></tr><tr><td>攪拌板</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>11-496-104A</td><td>任意のインキュベーターの安全な攪拌板を使用でき、どのベンダーでも使用できます</td></tr><tr><td>組織培養皿 直径100 mm</td>の<td>ヌンク、ロチェスター、ニューヨーク(フィッシャーサイエンティフィック)</td><td>1256598&nbsp;</td><td>任意のベンダーを使用できます(Fisher Sciを通じて注文)</td></tr><tr><td>FALCON 50 ml Conical Tubes</td><td>Falcon, San Jose, CA</td><td>1256598</td><td>Any vendor could be used</td></tr><tr><td>to custom parts</td><td>McMaster Carr</td><td>Various</td> 材料は<td>どれでも使用できますが、Deranはオートクレーブで安全で、非反応性で、加工が容易なため、Deranが選択されています。</td></tr> カスタム<tr><td>蓋用 http://www.mcmaster.com/#acetal-homopolymer-sheets/=rjrcac ステンレス鋼パイプ</td><td>McMaster Carr</td><td>Various</td><td>任意のベンダーを使用できます。</td></tr><tr><td>http://www.mcmaster.com/#standard-stainless-steel-tubing/=rjrd91 連続供給用のカスタム改変デルランバイオリアクター蓋</td><td>カスタムメイド</td><td></td><td>同様の製品を製造しているベンダーを認識していません</td></tr><tr><td>連続供給用のカスタム改質ガラス瓶蓋</td><td>カスタムメイド</td><td></td><td>一部のベンダー(例:、Fischer Sci、Corning)は、以下のリンクで同様の製品を製造しています。</td></tr><tr><td>Masterflex デジタル蠕動ポンプ</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>EW-77919-25</td><td>任意の精密蠕動ポンプを使用できます。 http://www.coleparmer.com/Product/L_S_Eight_Channel_Four_Roller_ Cartridge_Pump_System_115_230 _VAC/EW-77919-25</td></tr><tr><td>PVDF Tubing Connectors (various)</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>リンク参照</td><td>どのベンダーでも使用できます。 http://www.coleparmer.com/Category/Cole_Parmer_PVDF_Premium _Luer_Fittings/55889</td></tr><tr><td>Pharmed BPT Tubing L/S 16</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-16</td><td>任意のベンダーを使用できます。http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-16</td></tr><tr><td>Pharmed BPT Tubing L/S 14</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-14</td><td>Any vendors could be used . http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-14</td></tr><tr><td>Pharmed BPT Tubing L/S 13</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-13</td><td>Any vendor could be used . http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-13</td></tr><tr><td>ミリポアMillex GP PESメンブレン0.22&#181;l 滅菌シリンジフィルター(ベントおよび中ろ過に使用)</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>SLGP033RS</td><td>任意のベンダーを使用可能</td></tr><tr><td>25 ml 目盛り付きピペット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>13-678-11</td><td>任意のベンダーを使用でき、さまざまなサイズを使用可能</td></tr><tr><td>ピペッター</td>フィ<td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>13-681-15E</td><td>任意のベンダー、または類似の製品を使用可能</td></tr><tr><td>血球計算盤</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>02-671-6</td><td>任意のベンダー、または同様の製品を使用できます</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco - Life Technologies</td><td>15250-061</td><td>任意のベンダー、または同様の製品を使用できます。</td></tr><tr><td>https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15250061 倒立型光学顕微鏡</td><td>ライカ</td><td></td><td>任意のベンダー、または同様の製品を使用できます</td></tr><tr><td>ワンタッチウルトラ血糖値計</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>22-029-293</td><td>任意のベンダー、または同様の製品を使用できます(例:、バイエル)</td></tr><tr><td>ワンタッチウルトラストリップフィ</td><td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>22-029-292&nbsp;</td><td>任意のベンダー、または同様の製品を使用できます(例:、バイエル)</td></tr></tbody></table>

スフェロイドにおける哺乳動物細胞の大規模拡張のための連続供給することによって栄養規制

Nutrient Regulation by Continuous Feeding for Large-scale Expansion of Mammalian Cells in Spheroids

>jove_content<このデモンストレーションでは、β-TC6インスリノーマ細胞株から形成されたスフェロイドを、哺乳類の膵島細胞製品の製造モデルとして培養し、栄養レベルの調節が細胞収量をどのように改善できるかを実証しました。これまでの研究では、バイオリアクターは静止培養よりも培養量の増加を促進しましたが、細胞収量の増加は観察されませんでした。バッチ給餌の合間に消費されるグルコースなどの主要な栄養素の制限は、細胞増殖の制限につながる可能性があります。培地中のグルコース濃度の増加にもかかわらず、グルコースレベルの大きな変動が観察されました。 連続給餌システムの使用により、グルコースレベルの変動がなくなり、バッチ給餌の静的培養法やSSB培養法と比較して細胞増殖速度が向上しました。計算された栄養素消費量に基づいて摂食速度を調整することにより、成長率のさらなる増加が観察され、これにより、培養中で3週間にわたって生理的グルコースを維持できました。この方法は、他の細胞タイプにも適応できます。

ミディアムグルコースレベルと変動が標準SSB培養における細胞増殖を制限します グルコース濃度は培養期間3を通して静置培養し、SSB培養で変動します。これらの変動は、21日間の培養期間中の細胞数の増加に伴って強化し、静的およびSSB培養物の両方においてほぼ同じでした。これらの観察は、我々の以前の出版物3に示されています。血糖値は、両方の方法のための培養期間の持続時間の超生理学的であることができます。この慢性暴露は、細胞増殖54を阻害することができるので、連続供給システムは、グルコース変動を排除し、スフェロイド培養中の栄養管理を改善するために開発されました。 スフェロイド培養のための連続供給システム 継続的に新鮮な培地を添加し、培養期間中の古い培地を除去単純な培地補充システムを用いて達成することが...

栄養調整は、攪拌懸濁バイオリアクターでの培養物に対する断続的なバッチ給餌と比較して、哺乳類細胞スフェロイドの増殖速度を改善します。 この研究は、単純な調整レートフェッド培養を確立するために必要な方法を示しています。

In this demonstration, spheroids formed from the &#946;-TC6 insulinoma cell line were cultured as a model of manufacturing a mammalian islet cell product ...

このプロセスの全体的な目標は、制御された栄養条件下で多数の細胞を培養することです。細胞培養ラボにある従来の装置を使用。関連するアルゴリズムにより、実験範囲内の栄養素の制御と操作が可能になります。この方法は、大規模な細胞培養アプリケーションにおける重要な疑問に答えるのに役立ちます。例えば、ヒト細胞療法など。この技術の主な利点は、栄養素とガスが均一に分布した大規模な細胞の施設培養です。これにより、静的またはバルク供給の細胞培養よりも高い細胞密度が可能になり、収量が増加し、細胞損失が減少します。これは、ほとんどの細胞培養ラボで一般的に見られる機器を使用して行うことができます。この方法の視覚的なデモンストレーションは、無菌条件下で特定の順序で事前に実行する必要がある多数のステップのために、使用されるこれらの技術を習得するのが難しい場合があるため、新しい研究者に役立つ可能性があります。給餌システムに必要な5つの主要コンポーネントを収集します。中型リザーバー、ペリスタルティックポンプ、攪拌バイオリアクター、廃棄物リザーバー、カスタム設計のチューブサンプリングセット。1リットルのガラス瓶を使用して中程度の貯水池を確立します。廃棄物貯留層は2リットルのガラス瓶を使用しています。250mL容量のガラス反応器を使用して攪拌したバイオリアクター。デジタル蠕動ポンプ、または8チャンネルポンプヘッドを備えた同様のポンプを使用して、媒体交換を制御します。リザーバーと改質バイオリアクターの蓋を硬質でオートクレーブ可能なプラスチックで組み立てます。ステンレス製パイプのパススルーポートにより、滅菌フィルターによる換気を行い、リザーバーとバイオリアクター間の媒体移動を可能にします。多孔質ガラス曝気チューブから製造されたアウトフローチューブを、改質された攪拌懸濁液バイオリアクターの蓋に取り付けます。ポリフッ化ビニリデン製チューブコネクターと耐久性に優れたチューブチューブから、オートクレーブ可能な灌流チューブセットを組み立てます。セクションの長さは、異なるコンポーネント間の距離によって異なります。2つのチューブ直径を使用してフィードラインを組み立てます。L/S 14 は、バイオリアクターから培地リザーバーまでの距離にまたがる一次チューブに使用します。適切なPVDFアダプターを使用して、ポンプセクションのチューブ長の中央にL / S 13チューブのソート長を挿入します。標準のPVDFホースバーブチューブアダプターを使用して、短いポンプセクションチューブの両側にある2つのL/S 14チューブを結合します。大径のL/S 16チューブを使用して廃棄物除去用のセクションチューブセクションを組み立て、ポンピングセクションの中央にL/S 14チューブの短いセクションを挿入します。これは、PVDFホースバーブアダプターを使用したフィードラインの組み立てと同じ方法で行われます。チューブセットの最終コンポーネントを組み立てるには、3つの短いL/S 14チューブの長さからセットを構築します。T型HVDFコネクタと、2つのチューブ長に2つの小さなホースクランプで接続されています。サンプルアセンブリをバイオリアクターの蓋に取り付けられたステンレス鋼のサンプルコネクタに接続します。滅菌後、クランプされた長さの1つにガスを通気するための滅菌ガスフィルターが取り付けられます。もう1つは、滅菌サンプリングシリンジへの接続に使用されます。サンプリングアセンブリをバイオリアクターに接続した状態でオートクレーブ処理を行い、テキストプロトコルに記載されている実験を開始します。このアセンブリを使用して、必要に応じてバイオリアクターから無菌サンプルを収集し、連続供給プロセスを妨害することはありません。スピナーフラスコ、中型容器、廃棄物容器、およびサンプルポートの蓋の適切な位置に滅菌ベントを取り付けます。テキストプロトコルに記載されているように細胞を培養し、回収します。細胞をバイオセーフティキャビネット内でトリプシンの室温で2〜3分間インキュベートし、その後、細胞を円錐形のチューブに集めます。次に、スモールセルサンプルを採取し、トリパンブルーで染色します。顕微鏡と標準血球計算盤を使用して、テキストプロトコルに記載されているようにトリパンブルー染色を行い、細胞密度をカウントします。各条件について、必要な数の総細胞を滅菌攪拌懸濁液バイオリアクターに添加します。ピペットを使用して攪拌した懸濁液バイオリアクターに培地を加え、所望の総培養量に到達します。細胞を撹拌した懸濁液バイオリアクターを細胞培養インキュベーター内の攪拌板に移します。バイオリアクター内で細胞を摂氏37度、二酸化炭素5%、相対湿度100%、撹拌速度70rpmで3日間培養し、スフェロイドを形成させます。スフェロイド形成後、攪拌した懸濁液バイオリアクターをインキュベーターから取り出します。連続供給システムのコンポーネントを生物学的安全キャビネットに組み立てます。まず、新鮮な培地リザーバーに目的の培地を充填し、次に供給ラインの片側に接続します。また、新鮮な培地リザーバーが滅菌フィルターで適切に換気されていることを確認してください。バイオリアクターの入口ポートに滅菌フィルターを交換して、培地がバイオリアクターに入る前に培地をろ過する必要があります。廃棄物ラインを中程度の廃棄物リザーバーに接続し、廃棄物リザーバーが滅菌フィルターで適切に換気されていることを確認します。攪拌した懸濁液バイオリアクターをインキュベーター内部の攪拌板に、スフェロイド形成と同じ培養パラメータを用いて置きます。新鮮な中型のリザーバーを近くのミニ冷蔵庫に入れます。供給ラインがドアが閉まるのを妨げずに冷蔵庫から出ることができることを確認してください。また、供給ラインが冷蔵庫やインキュベーターのドアに挟まれて閉じられていないことも重要です。廃液リザーバーは、インキュベーターの外側のベンチトップの便利な場所に置くことができます。残りのチューブの端をインキュベーターに通し、供給ラインをバイオリアクターの入口ポートのフィルターに接続します。次に、廃棄物ラインを流出管ポートに接続します。次に、供給ラインが新鮮な媒体リザーバーから攪拌された懸濁液バイオリアクターに媒体を送り込み、廃棄物ラインがバイオリアクターから廃棄物媒体リザーバーに媒体を送り込むように、適切な向きを確保し、供給ラインのポンプセクションをポンプヘッドに配置します。テキストプロトコルで説明されているように、調整された送り速度の式を使用して送り速度を計算します。細胞数情報を含む最新のサンプルを、成長率予測および培地グルコース測定値とともに使用して、培養物中の所望のグルコース濃度を維持するために必要な供給速度を推定します。計算された送り速度に基づいてポンプ速度を設定します。送り速度の計算を繰り返し、各サンプリングポイントのポンプ速度を調整します。Β-TC6インスリノーマスフェロイド培養物から、静的撹拌懸濁バイオリアクターを使用した培養物、および連続的に供給された攪拌懸濁バイオリアクター培養法による中グルコース測定値が示されています。標準的な高グルコース培地で給餌します。連続給餌はグルコースの変動を排除することができますが、培地の平均グルコースレベルは培養期間中に劇的に変化し、生理学的範囲をはるかに上回っています。調整された給餌は、変動を排除するだけでなく、培養期間中、グルコース濃度を生理学的レベル近くに維持することができます。ここでは、21日間の培養期間中の細胞数の倍数変化として報告された細胞増殖を、定期的な培地交換を伴う攪拌懸濁バイオリアクター、一定の供給速度の攪拌懸濁バイオリアクター培養、および調整された供給速度の攪拌懸濁バイオリアクター培養物と比較します。この手順に従うと、新しい細胞株の栄養要件や特定の実験結果などの追加の質問に答えるために、さまざまな条件などの他の方法が事前に実行されます。開発後、この技術は、細胞生物学の分野の研究者が、がんやその他の疾患を持つヒトの細胞の代謝要件を調査する道を開きました。このビデオを見れば、培養条件をより適切に制御し、細胞収量を最大化するためのプロフュージョン細胞培養システムの組み立て方法について十分に理解できるはずです。人間の細胞を扱うことは非常に危険である可能性があり、この手順を実行する際には、血液媒介病原体からの保護などの予防措置を常に講じる必要があることを忘れないでください。

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Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

スフェロイドは、2D細胞培養単層モデルと比較して、細胞の環境をより正確に表現するために使用される3D細胞培養モデルの一種です。このプロトコル例では、科学者が結腸直腸がん細胞株からスフェロイドを作製し、生細胞イメージングを適用してスフェロイドの成長を追跡します。...

細胞株からのスフェロイド作製:三次元(3D)細胞培養法

我々は、市販のマイクロウェルプレートを使用して、均一なサイズや組成制御の腫瘍スフェロイドの大量（数十万、何千）の生成のためのプロトコルを紹介する。...

マイクロウェルプレートを用いてサイズ制御の腫瘍球、多数の生産

ここでは、細胞凝集を通じて3D細胞スフェロイドを形成するための迅速で柔軟なプロトコルについて説明します。これは、複数の細胞タイプに容易に適応でき、細胞遊走、浸潤、アノイキスアッセイなどのさまざまなアプリケーションでの使用や、細胞-マトリックス相互作用のイメージングと定量化に適しています。...

3Dスフェロイド生産のための効率的で柔軟な細胞凝集法

ここで人間の鼻粘膜上皮細胞の三次元回転楕円体文化を生成する手法について述べる。回転楕円体は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス レギュレータ (CFTR) ドライブに刺激される-依存イオンと液分泌、「CFTR...

個別の嚢胞性線維症膜コンダクタンス レギュレータ研究のひと鼻腔上皮細胞スフェロイドの生成

ここでは、化学的エピジェネティック消去と機械化関連の手がかりを組み合わせて、遺伝子トランスフェクションやレトロウイルスベクターを必要とせずに哺乳類の多能性細胞を効率的に生成する方法を紹介します。したがって、この戦略はトランスレーショナル医療にとって有望であり、幹細胞オルガノイド技術の顕著な進歩を表しています。...

エピジェネティック修飾と生体力学的手がかりを組み合わせて哺乳類多能性細胞を生成する2段階戦略

このプロトコルは、Caco2結腸腺癌細胞から3次元スフェロイドを生成し、増殖させる新規、堅牢、再現性培養システムを提示する。この結果は、化学療法への応答を含む癌幹細胞生物学を研究するためのこのアプローチの適切性に関する最初の概念実証を提供する。...

大腸癌幹細胞を研究するスフェロイドの3次元モデル

これらのプロトコルは、タツノオトシゴの細胞外フラックス分析を使用して、3Dがん細胞株由来スフェロイドにおけるミトコンドリアエネルギー代謝を調べるのに役立ちます。...

細胞外フラックス解析を用いた単一3D微細組織スフェロイドのミトコンドリアエネルギー代謝の探索

このプロトコルは、大規模なハイコンテンツスクリーニングおよび分析に適した方法で3つの異なるタイプのスフェロイドを製造する方法を詳述する。さらに、回転楕円体および個々の細胞レベルでそれらをどのように分析できるかを示す例を提示する。...

ハイコンテンツスクリーニングおよび分析アプリケーションのためのスフェロイドの大規模生産のための堅牢な方法

再現性の高いスフェロイドを増殖させるためのプロトコルと、画像キャプチャとプロテオミクスを用いた表現型特性評価について紹介します。...

機能的3Dスフェロイド細胞培養の半自動表現型解析(英語)

オルガノイドは、臓器開発、創薬、疾患研究のための個別化組織モデリングに革命をもたらします。オルガノイド工学は、複雑な合成組織の作成へと進歩しています。その目的は、形態形成、アッサンブロイド技術、およびバイオマトリックスを統合して、組織工学を進歩させることです。このプロトコルは、肝臓の器官形成をモデル化し、合成組織構築のガイドラインを確立するのに役立ちます。...

ヒト細胞株を用いた肝臓器官形成のモデリング、アッサンブロイドの構築、合成組織の設計のためのin vitro培養技術

ここでは、フォローアップのマルチパラメーター生細胞顕微鏡検査を実施するためのさまざまな多細胞スフェロイド形成方法について説明します。蛍光寿命イメージング顕微鏡(FLIM)、細胞自家蛍光、染色色素、およびナノ粒子を使用して、生きた三次元(3D)がんおよび幹細胞由来スフェロイドにおける細胞代謝、低酸素症、および細胞死の解析のためのアプローチを実証します。...

多細胞スフェロイドの作製およびマルチパラメーター生細胞蛍光寿命イメージング顕微鏡(FLIM)

学ぼう、攪拌懸浮バイオリアクターを用いた連続供給による哺乳動物細胞スフェロイドの栄養制御法。一定の栄養環境で細胞増殖を最適化し、大規模培養と細胞治療への応用可能性を示します。

スフェロイドにおける哺乳動物細胞の大規模拡張のための連続供給することによって栄養規制

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