Name: 単離された灌流脊椎動物の網膜のためのストレスモデルとしてグルタミン酸および低酸素症 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: 学ぶ、単離灌流牛網膜を用いたグルタミン酸および低酸素ストレスモデルによる神経保護薬の有効性評価法。電気網膜図（ERG）で網膜機能変化を測定し、前臨床治験への応用可能性を示す。

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この論文は、私の最愛の妻マレンと私たちの小さなカールに捧げられています。

ウシ目の調製<ol><li>動物が屠殺された直後に牛の目を入手します。 </li><li> 120のNaCl、2のKCl、0.1のMgCl 2、0.15のCaCl 2、1.5 mMののNaH 2 PO 4、13.5のNa 2 HPO 4および5 mMグルコースでを含む特別な媒体」Sickel-ソリューション」で保護された目を輸送RT。 </li><li>暗赤色灯と暗順応条件下での網膜の準備を行います。 </li><li>眼の前の部分を削除します。赤道切開CAを実行します角膜輪部に4ミリメートルの後部。その後、1枚で角膜、虹彩、毛様体およびレンズを取り外します。 Sickel-溶液中の網膜にしてください。 </li><li>機械的に網膜表面にガラス質の添付ファイルを緩め、オープンアイカップから硝子体を除去する。 </li><li>その後4つの象限に目を分割し、約ラウンド領域をパンチアウトトレフィンを使用して直径7mm。 </li><li>静かに網膜を分離色素上皮から、光から保護ボックス内部の記録装置の上に置きます。記録装置は、中央にメッシュプラスチックメンテナで構成されています。メッシュ上に、網膜を配置し、電極上に直接プラスチックリングで固定します。 NOTE：プラスチックメンテ媒体の一定の流れを可能にするために二つのチャンネルを有している。 </li></ol> 2.録音電図（ERG） <ol><li> 、電位図を記録する網膜の両側にある銀/塩化銀電極を使用し、約一定の灌流速度で網膜を灌流するために1ml /分、37℃の一定温度。酸素で飽和した「Sickel-ソリューション」を使用してください。 </li><li>測定を開始する前に、暗い網膜を適応させる（すべての測定中に光から保護する）と、5分の刺激間隔を使用しています。網膜表面で6.3 MLXに設定された強度で刺激のための1 Hzの単一の白色キセノンフラッシュを使用してください。 </LI&gt; <li>使用は、最適な応答を得るために、減光フィルタ、タイマによって制御さ10マイクロ秒の光刺激をキャリブレート。 </li><li>グラスRPS312RMアンプを使用して（100Hzのハイパスフィルタ、50 Hzのノッチフィルタ100,000のx増幅）を測定し、処理したデータを、ERGをフィルタリングして増幅した。信号を乱す可能性のある妨害の周波数をフィルタリングしてみてください。データを処理するために、デスクトップコンピュータ（PC互換性のある）のアナログ·デジタルデータ収集ボードを使用する。 </li><li>安定b波振幅が記録されるまで一定の灌流下暗順応期間の後、電気信号​​の振幅を測定する。 注：5つの測定値が平均値に達し、10％未満を逸脱した場合には、振幅が安定しているとみなされる。単一の測定値の良い例は、 図1に示されている。 </li><li>テストを開始するには、純粋な窒素で純酸素を交換する（単一の実験の数、n = 5）の低酸素状態をテストするまたは250μmのグルタミン酸（n = 5）であった。 </li><li>電気的応答45分間5分毎に記録します。 </li><li>テスト期間の後、75分間酸素で飽和した標準培地で網膜を灌流し、b波振幅の変化を見てください。これはウォッシュアウトフェーズです。 b波のピークまでのA波の谷からb波の振幅を測定します。 </li><li>暗順応条件下で、感光体電位に対する低酸素またはグルタミン酸の効果を調べるために、栄養液に1mMのを追加することによってb波を抑制する。 </li><li> 30分間の安定した感光体の電位を記録した後、1mMのアスパラギン異なる洗浄溶液に網膜45分​​間さらす前と同様の手順を行う。前述のように同じ休薬期間（ステップ2.8）を使用します。 </li></ol> 3.データ分析<ol><li>統計的データを評価するために、 例えば、コルモゴロフ-スミルノフを使用して、すべてのデータのための正規分布を確実にするテスト15。 </li><li>博覧会の前に最後の測定と比較して露光段階後の割合でA及びB波の振幅の減少を計算します。 45分後にERG-振幅の減少を比較する - 展示期間の終わり - ERGへの適用前に測定した。 </li><li>可能な回復を調べるために博覧会前に、対応する振幅にウォッシュアウトフェーズの終了時にA-とB-波の比較。 </li><li>統計分析のために、ソフトウェアJMP統計ソフトウェアまたはSPSSソフトウェアを使用しています。平均±標準偏差として全体のデータを計算します。適切な統計的検定によって有意性を推定します。 注：これらのテストは、実験的な範囲に応じて異なる場合があります。この設定では、スチューデントのt検定を使用しています。 </li></ol>

<ol><li>Varma, D. D., Cugati, S., Lee, A. W., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+central+retinal+artery+occlusion%3A+clinical+presentation+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">A review of central retinal artery occlusion: clinical presentation and management.</a> Eye (Lond). 27, 688-697 (2013).</li>
<li>Resch, M., Suveges, I., Nemeth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension-related+eye+disorders%29%5BTitle%5D)+AND+%22Orv+Hetil%22%5BJournal%5D)">Hypertension-related eye disorders).</a> Orv Hetil. 154, 1773-1780 (2013).</li>
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<li>Januschowski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+the+effects+of+two+different+irrigation+solutions+on+an+isolated+perfused+vertebrate+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Res%22%5BJournal%5D)">Comparing the effects of two different irrigation solutions on an isolated perfused vertebrate retina.</a> Ophthalmic Res. 48, 59-66 (2012).</li>
<li>Sickel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+and+Electrical+Responses+to+Light+Simulation+in+the+Retina+of+the+Frog%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Respiratory and Electrical Responses to Light Simulation in the Retina of the Frog.</a> Science. 148, 648-651 (1965).</li>
<li>Luke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolated+perfused+bovine+retina--a+sensitive+tool+for+pharmacological+research+on+retinal+function.+Brain+research%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research+protocols%22%5BJournal%5D)">The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function. Brain research.</a> Brain research protocols. 16, 27-36 (2005).</li>
<li>Henderson, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+experimental+data+for+univariate+normality%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+chimica+acta%3B+international+journal+of+clinical+chemistry%22%5BJournal%5D)">Testing experimental data for univariate normality.</a> Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry. 366, 112-129 (2006).</li>
<li>Alt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroprotective+potential+of+Rho-kinase+inhibition+in+promoting+cell+survival+and+reducing+reactive+gliosis+in+response+to+hypoxia+in+isolated+bovine+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">The neuroprotective potential of Rho-kinase inhibition in promoting cell survival and reducing reactive gliosis in response to hypoxia in isolated bovine retina.</a> Cell Physiol Biochem. 32, 218-234 (2013).</li>
<li>Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+properties+of+a+new+isolated+rat+retina+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+research%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological properties of a new isolated rat retina preparation.</a> Vision research. 39, 2165-2177 (1999).</li>
<li>Richter, S. H., Garner, J. P., Wurbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+standardization%3A+cure+or+cause+of+poor+reproducibility+in+animal+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Environmental standardization: cure or cause of poor reproducibility in animal experiments.</a> Nat Methods. 6, 257-261 (2009).</li>
<li>Dutescu, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifocal+ERG+recordings+under+visual+control+of+the+stimulated+fundus+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Multifocal ERG recordings under visual control of the stimulated fundus in mice.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 54, 2582-2589 (2013).</li>
<li>Perlman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+retinal+toxicity+of+drugs+in+animal+models+using+electrophysiological+and+morphological+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Testing retinal toxicity of drugs in animal models using electrophysiological and morphological techniques.</a> Doc Ophthalmol. 118, 3-28 (2009).</li>
<li>Mukhopadhyay, A., Gupta, A., Mukherjee, S., Chaudhuri, K., Ray, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Did+myocilin+evolve+from+two+different+primordial+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Did myocilin evolve from two different primordial proteins.</a> Mol Vis. 8, 271-279 (2002).</li>
<li>Januschowski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+retinal+toxicity+of+a+new+heavy+intraocular+dye%2C+using+a+model+of+perfused+and+isolated+retinal+cultures+of+bovine+and+human+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Evaluating retinal toxicity of a new heavy intraocular dye, using a model of perfused and isolated retinal cultures of bovine and human origin.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 250, 1013-1022 (2012).</li>
<li>Luke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolated+perfused+bovine+retina--a+sensitive+tool+for+pharmacological+research+on+retinal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 16, 27-36 (2005).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

本研究では、低酸素症の45分後にb波の振幅に有意な影響が見られた。この減少は、依然としてウォッシュアウト段階の後に有意であった。感光性に関する同様の効果が観察された。 結果は、他の公開されたデータ16でサポートされているし、私たちに低酸素症の後の可能な神経保護効果を研究する機会を与えている。 250μMのグルタミン酸の45分の博覧会の後、我々は唯一のウォッシュアウト期間の終了時に完全に可逆的であったb波の振幅に統計学的に有意な影響を見つけた。感光体電位は250μMグルタミン酸の影響を受けていなかった。唯一の内側の網膜は、低酸素症の影響を受けたという事実は変化が非常に微妙であり、私たちは、そのため、可能な神経保護のために非常に敏感で標準化された指標を持っていることをことを示しています。アスパラギン酸は、特に光受容体からホリゾントへの送信を禁止するしたがって、Alまたは双極細胞とは、b波を抑制します。 この知見は、250及び500 mMの濃度のグルタミ...

神経保護は、過去数十年で眼科研究の調査の強い分野となっている。網膜は、酸素化に大きく依存し、その周囲の細胞の代謝によって強く影響され、高感度の神経回路網である。神経細胞の損傷に関連する主な眼の病状は、網膜血管閉塞、緑内障、および網膜剥離である。 網膜動脈閉塞は網膜血管閉塞のための例として、内側網膜1の低酸素状態に視力の突然の損失につながる。それは、多くの場合、一般的な血管の病理2に関連付けられており、患者のわずか8％を大幅に1視力を回復し、永続的な視覚喪失1につながる。動脈の線維素溶解が治療選択肢として提案されているが、利益は、無作為化臨床試験3に示すことができなかった。 緑内障と網膜剥離両方のグルタミン酸濃度4-6の増加を持っている。生理学的条件下でグルタミン酸は、全体の中枢神経系全体に興奮トランスミッタと内側の網膜7,8として検出された。上昇グルタミン酸レベルは、緑内障及び網膜剥離5,6においても、増殖性糖尿病性網膜9のみならず発見されている。グルタミン酸の増加は、おそらく、したがって、神経細胞の損傷10の興奮毒性につながり。網膜剥離の網膜（毛様体輪の硝子体切除）上の増殖性糖尿病網膜症の手術のいくつかのケースでは、ほとんどの場合必要です。扁平部の硝子体切除機械的操作時には、光ファイバーや長い操作中に灌漑ソリューションの高流量によって発揮されるせん断応力の明るい光が網膜11,12に追加のストレスを発揮する。 すべての疾患は、病理がレチンに局在している点で共通している単独および感覚神経系として網膜を保護する方法を見つけるという課題に眼科コミュニティをもたらす。 電図（ERG）は、インビボで光受容体機能（波）と内網膜（b波）の機能を評価するための標準的な方法である。 ERGは、角膜内に導入銀電極で測定され、眼は、ロッドまたは円錐または内側の網膜の欠陥を検出するための光のレベルの増加によって刺激されている。網膜における異なる欠陥は、振幅（応答の強さ）またはERGの待ち時間（時間 - 応答間隔）の変化によって検出することができる。異なるERGプロトコルと測定方法（パターン-ERG、多焦点-ERGまたは明視野ERG）は、欠陥のさらなる差別化を可能にする。単離された網膜の技術により、試験動物の例からの干渉なしで、網膜への影響を評価すること、最近導入された一般的な反応は13,14。 評価および灌流孤立網膜上の低酸素症およびグルタミン酸ストレスのために定義され、標準化された応力モデルを紹介するこの研究の目的だった。したがって、私たちは、特定の薬剤または眼内灌漑ソリューションの神経保護効果に関する今後の研究のための基礎を築くことを望んでいます。

<table><tbody><tr><td>120 mM NaCl&nbsp;</td><td>Merck Pharma, ドイツ</td><td>1,064,041,000</td><td></td></tr><tr><td>2 mM KCl,&nbsp;&nbsp;</td><td>Merck Pharma, ドイツ</td><td>1,050,010,250</td><td></td></tr><tr><td>0.1 mM MgCl2,&nbsp;</td><td>Merck Pharma, ドイツ</td><td>58,330,250</td><td></td></tr><tr><td>0.15 mM CaCl2</td><td>Merck Pharma, ドイツ</td><td>111 TA106282</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mM NaH2PO4/13.5 mM Na2HPO4&nbsp;&nbsp;</td><td>Merck Pharma, ドイツ</td><td>1,065,860,500</td><td></td></tr><tr><td>5 mM glucose</td><td>Merck Pharma, Germany</td><td>40,741,000</td><td></td></tr></tbody></table>

単離された灌流脊椎動物の網膜のためのストレスモデルとしてグルタミン酸および低酸素症

Glutamate and Hypoxia as a Stress Model for the Isolated Perfused Vertebrate Retina

神経保護は、過去数十年で眼科研究の調査の強い分野きや、緑内障、網膜血管閉塞、網膜剥離、および糖尿病性網膜症などの疾患に影響を与えています。それは、将来の前臨床治療試験のための標準化された応力モデルを紹介する本研究の目的であった。 ウシ網膜を調製し、灌流酸素飽和標準溶液とし、ERGを記録した。安定したB波を記録した後、低酸素（純粋N 2）またはグルタミン酸応力（250μmのグルタミン酸）が45分間に発揮した。単独の光受容体機能に対する効果を調べるために、1mMのアスパラギン酸は、波を得た。 ERG-回復は75分間モニターした。 低酸素症の場合、87.0％の波振幅の減少は45分（ウォッシュアウトP = 0.03の終了後に36.5％の減少）の露出時間の後に（P &lt;0.01）が認められた。さらに、初期のDECR87.23パーセントのb波振幅の容易さは、統計的有意に（p &lt;0.01、ウォッシュアウトの終了時の25.5％の減少はp = 0.03）に達したことを記録した。 250μmのグルタミン酸、1.9％た（p&gt; 0.05）の減少が続く波振幅た（p&gt; 0.05）の最初の7.8％の減少である。 b波振幅た（p &lt;0.01）の83.7％の減少が認められた。 75分のウォッシュアウト後に減少が2.3％（P = 0.62）であった。本研究では、標準化されたストレスモデルは、将来の可能性神経保護効果を同定するために有用であり得ることが示されている。

酸素飽和標準溶液（ 図1AおよびB）と網膜製剤の灌流の1時間後にERG-振幅が安定化し、単一の測定値との間の振幅のより少ない変動を示した。 pHは、浸透圧、温度、及び（低酸素症試験を除く）のpO 2は、すべてのテストのために一定に維持した。 内網膜の信号から光受容体の信号を分離するために、1mMのアスパラギン酸は、b波（ 図1A）を抑制するために、標準溶液に添加した。低酸素の効果の試験中に、87.0％の波振幅の減少は、45分の露出時間の後に（p &lt;0.01）が認められた。ウォッシュアウトの終了時に、36.5％の減少た（p = 0.03、 図2A）は、統計的に有意であったが認められた。さらに、87.23パーセントのb波の振幅の初期低下が等しく、統計的有意に（p &lt;0.01）に達したことを記録した。このでは25.5％の削減を設定するた（p = 0.03、 図2B）、統計的に有意であったことが、注目された。 250μmのグルタミ...

本研究では、我々は将来の前臨床治療試験のための孤立した灌流ウシ網膜のための標準化された応力モデルをご紹介。 A及びB波振幅によって表さ網膜機能上のいずれかの低酸素（純粋なN 2）またはグルタミン酸ストレス（250μMグルタミン酸）の効果を評価した。

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal ...

本実験の全体的な目的は、神経保護剤の有効性を試験するための潜在的なモデルとして、グルタミン酸または低酸素ストレスを導入することである。まず、新鮮な牛の眼球を入手し、迅速かつ低侵襲に網膜を摘出することでこれを実現する。次に、特殊な栄養溶液を用いて網膜を固定した後、電極を用いて一連の安定したベースライン網膜電図（ERG）を記録する。次に、栄養液にグルタミン酸を添加するか、または酸素の代わりに100%窒素を添加して低酸素状態を誘導します。最後に、グルタミン酸ストレスまたは低酸素がA波およびB波の振幅に及ぼす影響を確認するために、ERGを記録します。その結果、ERG記録を通じて、低酸素またはグルタミン酸ストレスに曝露された際の網膜機能の変化が示されます。本手法の細胞培養やin vivoでのERG記録などの既存手法に対する主な利点は、細胞培養とは対照的に機能試験が可能であり、かつin vivo試験と比較して電極配置や全身麻酔による変動の影響を受けないことです。本手法は、神経保護剤の試験など、薬理学分野における重要な課題の解決に寄与します。また、本手法の応用範囲は、急激な疾患または慢性疾患の治療や診断にまで及びます。このストレスモデルを用いて、神経保護剤となる可能性のある薬剤の試験が可能です。この手法は眼科領域における神経保護への知見を提供しますが、神経変性疾患などの他の医学分野にも応用できます。一般的に、この手法に不慣れな方は、調製技術に苦労することがあります。このモデル自体は、優れた神経生理学者であったケルンのSickle教授によって開発されました。屠殺された動物から牛の眼球を採取した後、暗順応条件下で暗い赤色光を用いて、室温のsickle溶液に入れて研究室へ運搬します。眼球の前眼部を取り除き、角膜縁から後方に約4mmの位置で赤道切開を行い、角膜、虹彩、毛様体、および水晶体を一塊として取り出します。網膜をsickle溶液に浸したままにします。次に、網膜表面への硝子体付着部を機械的に緩め、開放した眼杯から硝子体を除去します。その後、眼球を4つの象限に分割し、TR refineパンチを用いて直径約7 mmの円形領域を打ち抜きます。網膜を色素上皮から慎重に剥離し、記録装置に設置します。網膜をメッシュ上に移し、プラスチックリングを用いて電極上に固定してください。その後、記録装置を遮光されたボックスの中に入れます。測定を行う前に網膜を暗順応させ、校正済みのニュートラルデンシティフィルターを用い、10マイクロ秒に設定した光刺激を与えます。5分間隔で、網膜表面において光強度6.3 MLX（matching light intensity）の1 Hzの単一白色キセノンフラッシュを刺激として照射します。一定の灌流下で暗適応期間を設けた後、a波の振幅が安定して記録されるまで、電気信号の

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げっ歯類の網膜は、長い脳へのアクセス可能なウィンドウとして認識されている。この技術的な論文では、虚血性損傷後の中枢神経系内の血管再生の故障につながるメカニズムを研究するために、酸素誘発性網膜症のマウスモデルを採用しているプロトコルを提供する。説明したシステムはまた、網膜およびCNS内の機能の血管の成長を促進するための戦略を探求するために利用することができる。...

マウス網膜を使用してCNSにおける血管再生の評価

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Entorhino海馬器官型スライス培養における神経血管リモデリングの解析

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などの酸素グルコース欠乏および再酸素化<em&gt;インビトロ</em&gt;虚血再灌流傷害モデル血液脳関門の機能障害を研究するための

この記事では、マウスにおける高眼圧によって網膜虚血再灌流障害を誘導するための手順を説明します。高眼圧による網膜虚血 - 再灌流障害は、網膜神経血管ユニットのヒトの疾患のための潜在的な細胞機構と治療法を検討する研究者を可能にする、網膜に妥協酸素と栄養配信を特徴とするヒトの病態をモデル化するのに役立ちます。...

眼圧の上昇を通じて、網膜虚血再灌流障害のマウスモデル

低コストで、簡単に使用できる強力なシステムは、ヒスタミンにより誘発される血液網膜関門の違反を改善する可能性のある潜在的な治療法を評価するために確立されています。血管漏出、ミュラー細胞の活性化および神経突起の連続性は、損傷応答および潜在的薬物、リポキシンA4との逆転を評価するために利用されます。...

治療のために血液網膜関門の違反と潜在的な薬を評価するための急性網膜モデル

虚血性脳卒中、酸素無グルコース (OGD) に影響を受ける脳の領域にアストロ サイトの特定の貢献がさらされて複雑なイベントは調査しにくい。孤立したアストロ サイトを取得し、反応性、OGD...

反応性アストロ サイトと増殖の in Vitro虚血のような条件下での監視

このプロトコルでは、化学 wholemount...

バイオミメティック化学ニューロモデュレーション神経伝達物質グルタミン酸の in Vitroラット網膜のための方法論

ここでは、単純な縫合糸とクランプを用いた一過性両側共通頸動脈閉塞によるレチナル虚血のマウスモデルについて述べている。このモデルは、心血管異常によって引き起こされる虚血の病的メカニズムを理解するのに有用である。...

一過性両側性頸動脈閉塞による虚血性筋炎損傷のマウスモデル

このプロトコルは、成体マウスから得られた網膜外植片の単離、解剖、培養、および染色の手順を提示し、説明しています。この方法は、糖尿病性網膜症などの異なる網膜神経血管疾患を研究するための ex vivo...

網膜神経血管疾患研究のための ex vivo モデルとしての成体マウス網膜網膜の外植片

このプロトコルは、前房カニューレ挿入と眼圧上昇を介して網膜虚血を誘発することにより、マウスの眼の網膜虚血再灌流損傷をモデル化し、続いて眼圧の正常化により再灌流を開始します。...

マウス眼モデルにおける網膜虚血-再灌流障害の誘導

ここでは、マウスの眼から網膜を分離し、 ex vivo での長時間の実験を行うための詳細な方法論を提供します。このプロトコルは、生体組織中に網膜グリア をin situ...

マウス網膜におけるグリア相互作用を研究するための ex vivo 外植片モデル

学ぶ、単離灌流牛網膜を用いたグルタミン酸および低酸素ストレスモデルによる神経保護薬の有効性評価法。電気網膜図（ERG）で網膜機能変化を測定し、前臨床治験への応用可能性を示す。

単離された灌流脊椎動物の網膜のためのストレスモデルとしてグルタミン酸および低酸素症

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