Name: 同時電気生理学的記録およびげっ歯類の脳における阻害剤のマイクロ注射 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: 学ぶ ラット上丘への神経伝達物質マイクロ注射と同時多単位神経活動記録の手法。ガラスピペットと銀線を用いたコスト効率の良いツール構築により、深部脳構造の不活化とリアルタイムモニタリングが可能になります。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

CIHR (MOP231122) と NSERC (RGPIN-2014-06503) からの助成金によりサポートされています。実験の準備と実験室作業の監督に協力してくれたGeneviève Cyrに感謝します。MALは、カナダ自然科学工学研究評議会(NSERC)から奨学金を受けました。

注：すべての手順は、動物の保護とモントリオール大学の倫理審査委員会のためのカナダ評議会の指令に従って行われました。 録音注入ピペットの1アセンブリ<ol><li>ピペットプラーを使用して、約7センチのガラスキャピラリー（1ミリメートル外径）を引き出します。 </li><li>キャピラリの先端を破壊し、光学顕微鏡下で開口部をチェックします。内径が40〜30μmの間のマイクロメートルであることを確認します。 </li><li>ガラスピペットの非テーパ状端から突出した約1cmを有するガラスキャピラリーに7センチメートル長い銀線を挿入します。 </li><li>ガラスキャピラリーに直交し、過剰なフィラメントを曲げます。 </li><li> 30 G注射針の軸に柔軟なプラスチック接着剤の液滴を適用します。 </li><li> 図1に示す回路図に従って、ガラスピペットで30 Gの皮下注射針を挿入します</stro&gt; NG。 </li><li>ガラスピペットと注射針との間の接合部からの適切なシールを確保するために、接着剤の第二のコーティングを追加します。 </li><li>先端が接着剤の適切な硬化を確実にするために約12時間上に向けて乾燥するピペットを残します。完成した結果を図2に示されています。 </li></ol>注：この手順は、急性実験に行われ、ピペットチップの滅菌が必要とされていません。 2.動物の準備<ol><li>麻酔ボックスにラットを配置します。 </li><li> 5〜10分間、4％イソフルランを用いて麻酔を誘導します。 </li><li> 37℃の体温を維持するために加熱パッドおよび直腸プローブと定位テーブルの上に動物を配置します。 2％イソフルランで麻酔を維持するためにノーズコーンを使用します。耳のバーや歯ホルダーを使用して、ラットの頭を固定します。 </li><li>アトロピンは、瞳孔拡張を支援するために低下1％を含む眼軟膏や点眼薬を適用します。乾燥を防ぐために、ドロップ潤滑適用約30分ごとです。 </li><li>頭を剃る、10％ポビドンヨードを使用してクリーニングします。 </li><li>局所麻酔のために、皮膚を持ち上げ、針の先端を挿入することにより、2-3の場所で頭皮の下で2％リドカインの0.5ミリリットルを注入。 </li><li>つま先のピンチを行い、運動の欠如を観察することにより、麻酔の適切なレベルを確認してください。また、それは正常値（300〜400拍/分）の範囲内にあることを確実にするために心拍数を監視します。 </li><li>冠状および矢状縫合の両方を公開するために＃10手術用メスの刃を用いて正中に沿って直線状に頭皮を切開。 </li><li>手術用スパチュラで頭蓋を覆っている組織を脇に押して、ラムダとブレグマ点を明らかにしました。 </li><li>ブレグマとラムダ位置は同一平面上にあるように、頭蓋を水平に。 </li><li>基準点を設定するには、右のブレグマの上にそれを設定するために取り付けられたガラス管を定位デバイスを使用しています。これは、前後およびMEDのために &quot;ゼロ&quot;になりますIAL-横測定座標。 </li><li>定位は、必要な座標にマウント定位座標をメモして開頭が行われる場所をマークターゲット領域の周囲に四角形を描画移動させることにより、目的のポイントを設定します。 </li><li>ゆっくりと骨材を除去するために圧力をかけずにゆっくりとマークされた正方形に沿って滅菌ドリルで外科用ドリルを使用してください。それは熱を発生し、皮質の病変の原因となるように、同じ地域に長すぎるドリルしないように注意してください。 </li><li>開頭術を区切る骨が十分に薄くなってきた場合には、慎重に皮質を露出するようにピンセットで頭蓋セクションを削除。 </li><li>よく組織乾燥を防止するために、人工脳脊髄液で露光野を灌漑。 注：injectrodeの先端が貫通するのに十分頑丈であるように硬膜除去はラットに不必要です。 </li></ol> 3.充填と噴射システムのマウント<ol><li>塗りつぶし鉱物油との吸引により、5〜10μlをマイクロシリンジ。 </li><li> 0.5％シカゴスカイブルー（CSB）および300μMのγアミノ酪酸（GABA）または0.5％CSB 9で2％リドカイン溶液の溶液で固定したガラスピペットを用いて皮下注射針を埋めます。生理食塩水ですべてのソリューションを希釈します。 <ol><li>豊富な物質の場合には、定期的な注射器を用いて充填し、気泡の形成を避けるために、通常の予防的技術を使用します。 </li><li>より高価な物質の場合には、injectrodeを埋めるためにミネラルオイルを使用し、化学薬品は、次いで、吸引により導入することができます。鉱物油と水との間の密度差が比較的高いように、この物質は、水溶液の注入のための良好な候補です。 注：染料の両方の液体との間の分離を確認するために加えることができます。 </li></ol></li><li>注射ピペットを充填するために、吸引によって液で1mlシリンジを充填した後、ゆっくり溶液を注入注入ピペットに。 </li><li>クリーンこれらの領域を拭き取り、さらに注射器でゆっくり溶液を注入することによって漏れを観察することによって、図1に示した領域で漏れの細心の注意を払ってください。 </li><li> 1mlシリンジを取り外します。その際、真空注入用ピペットから溶液を除去しないように、プランジャーに光の圧力を保つようにしてください。 </li><li>吸引によりミネラルオイルとマイクロシリンジを記入し、充填された注入ピペットにしっかりとそれを添付し、慎重にガーゼで組み立てinjectrodeから余分な溶液を乾いた布で拭き取ってください。 </li><li>先端がガラスピペットの先端に形成小滴を参照するのに十分な非常に小さな体積を注入することによってブロックされていないことを確認します。 </li><li>マイクロポンプシステムのinjectrodeをマウントし、それが十分に固定されていることを確認してください。 </li><li>慎重に目標座標でinjectrodeチップを配置し、皮質の表面に先端を下げます。 </li><li>ゆっくりinjectrを下げます適切な解剖学的座標を用いて、ターゲット構造（ここでは上丘）への定位固定装置を使用して頌歌。 </li><li>組織乾燥を防ぐために、温かい寒天で露光野をカバーしています。 </li></ol> 4.インジェクションと可逆的不活性化<ol><li>注入を開始するには40 NL / minであり、プレスランで400〜800 NLを注入するマイクロインジェクションポンプを設定します。そのスパイク率は注入中削減が表示されます注意してください。 注：実験では、神経活動は、GABAの配信の終了後1時間以内に回復しました。任意に較正機械装置は、注入を行うためにマイクロインジェクションシリンジに圧力を適用するために使用することができます。 </li><li>電気生理学的データを取得した後、地元の動物倫理コミュニティに承認方法を使用して安楽死させます。 </li></ol>

<ol><li>Martin, J. H., Ghez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+inactivation+in+the+analysis+of+the+central+control+of+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Pharmacological inactivation in the analysis of the central control of movement.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 145-159 (1999).</li>
<li>Ponce, C. R., Hunter, J. N., Pack, C. C., Lomber, S. G., Born, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+indirect+pathways+to+visual+response+properties+in+macaque+middle+temporal+area+MT%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+Of+Neuroscience+The+Official+Journal+Of+The+Society+For+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Contributions of indirect pathways to visual response properties in macaque middle temporal area MT.</a> The Journal Of Neuroscience The Official Journal Of The Society For Neuroscience. 31 (10), 3894-3903 (2011).</li>
<li>Lomber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+advantages+and+limitations+of+permanent+or+reversible+deactivation+techniques+in+the+assessment+of+neural+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">The advantages and limitations of permanent or reversible deactivation techniques in the assessment of neural function.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 109-117 (1999).</li>
<li>Malpeli, J., Schiller, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+reversible+inactivation+of+small+regions+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A method of reversible inactivation of small regions of brain tissue.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 1 (2), 143-151 (1979).</li>
<li>Lomber, S. G., Payne, B. R., Horel, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cryoloop%3A+an+adaptable+reversible+cooling+deactivation+method+for+behavioral+or+electrophysiological+assessment+of+neural+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">The cryoloop: an adaptable reversible cooling deactivation method for behavioral or electrophysiological assessment of neural function.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 179-194 (1999).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Guerrero-Cazares, H., Quiñones-Hinojosa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+deep+brain+structures+with+microinjections+for+delivery+of+drugs%2C+viral+vectors%2C+or+cell+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Targeting of deep brain structures with microinjections for delivery of drugs, viral vectors, or cell transplants.</a> Journal Of Visualized Experiments. (46), (2010).</li>
<li>Hupé, J., Chouvet, G., Bullier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+parameters+of+cortical+inactivation+by+GABA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal parameters of cortical inactivation by GABA.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 129-143 (1999).</li>
<li>Casanova, C., McKinley, P., Molotchnikofff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responsiveness+of+Reorganized+Primary+Somatosensory+%28SI%29+Cortex+after+Local+Inactivation+of+Normal+SI+Cortex+in+Chronic+Spinal+Cats%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+%26+Motor+Research%22%5BJournal%5D)">Responsiveness of Reorganized Primary Somatosensory (SI) Cortex after Local Inactivation of Normal SI Cortex in Chronic Spinal Cats.</a> Somatosensory & Motor Research. 8 (1), 65-76 (1991).</li>
<li>Malpeli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+inactivation+of+subcortical+sites+by+drug+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Reversible inactivation of subcortical sites by drug injection.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 119-128 (1999).</li>
<li>Minville, K., Casanova, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+frequency+processing+in+posteromedial+lateral+suprasylvian+cortex+does+not+depend+on+the+projections+from+the+striate-recipient+zone+of+the+cat%E2%80%99s+lateral+posterior-pulvinar+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Spatial frequency processing in posteromedial lateral suprasylvian cortex does not depend on the projections from the striate-recipient zone of the cat’s lateral posterior-pulvinar complex.</a> Neuroscience. 84 (3), 699-711 (1998).</li>
<li>Diao, Y., Wang, Y., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Representation+of+the+binocular+visual+field+in+the+superior+colliculus+of+the+albino+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Representation of the binocular visual field in the superior colliculus of the albino rat.</a> Experimental Brain Research. 52 (1), 67-72 (1983).</li>
</ol>

開示するものは何もありません。

提案されたプロトコルは、現在の可逆的不活性化の方法から生じる課題を解決するために設計されました。具体的には、このプロジェクトは、特に脳深部構造において、神経活動を調節する物質の化学的微量注入のために使用される方法を改良することを目的と。セットアップのこのタイプから出る技術的課題は、注射部位での正確な記録を得るために、in vivoで同じ限られた空間内に共局在化する両方のプローブを必要とすることです。この問題は、同じ部位に注射し、記録の両方が可能であるような、ここで提示されている1つのような装置を使用することによって克服することができます。別の方法は、ガス圧力パルスに基づく装置の使用を含みます。このようなツールは、長年にわたって利用されているが、圧縮可能な中間体の使用は、注入速度とボリューム、可逆性を保証するために制御することが重要な2つのパラメータの制御を減少させます。このようなイオン導入注入のような他の方法ystemsも利用可能であるが、液体の拡散ダイナミクスは不活性化の電位範囲を減少させる、ボーラス注入対異なります。これらの方法は、マイクロ注射7について観察された楕円形のパターンとは対照的に球...

皮質領域および皮質下核の不活性化は、様々な脳構造2-4との間の機能の関係を研究する上で重要です。最近の文献は、脳構造2,5の役割を研究するための機能喪失化学的又は極低温技術を採用しています。周囲組織6,7の巻き添え被害を最小限に抑えながら、薬理微量注入に関しては、薬物の少量は、制御された速度で、脳の領域に投与することができます。この技術は、ニューロン活性に異なる薬理学的標的の効果を研究するために、特定のアゴニスト、インバースアゴニストまたはアンタゴニストを送達するために使用することができます。このような効果はまた、研究者が、異なる皮質および皮質下構造の間の関係を研究することができ、遠隔地からの神経応答の変化を測定することによって調べることができます。 ここでは、BOが可能な装置の組立、injectrodeを実証します電気生理学的信号を記録し、目標位置での薬物の少量を送達目。我々は、ラットの上丘では、GABA、神経活動の一般的な阻害剤を注入することによって、このシステムの能力を実証します。この領域は、私たちはinjectrodeの局在を確認するために、視覚的に誘発されたマルチユニット活動の使用を許可視覚刺激に敏感で​​す。不活性化の可逆性は、GABA注射の終了後、通常の神経活動の回復により評価しました。 注射部位からマルチユニット活動を監視する能力は、所望の薬力学的応答を達成するの​​に必要な注入速度や体積の微調整を可能にします。最小の有効体積が注入されているのでしたがって、この手法の利点は、微小灌流によって引き起こされる組織損傷の制限電位です。提案されたプロトコルは、使い捨てのハードウェアnecessarを生成するためのコスト効率的な方法を提供します薬物送達およびローカルニューロンの活動記録が望まれている実験を行うためのY。

<table><tbody><tr><td>インジェクションポンプ(UltraMicroPump III)</td><td>WPI</td> <td>#UMP3</td><td></td></tr><tr><td>インジェクションコンソール(Micro4コントローラー)</td><td>WPI</td> <td>#SYS-MICRO4</td><td></td></tr><tr><td>ハミルトンシリンジ</td><td>Hamliton</td><td>(80301)701LT 10&マイクロ;L SYR</td><td>シリンジ 5 から 10 &mu;l使用</td></tr><tr><td>柔軟なプラスチック接着剤</td><td>ルパージュ</td><td>393915</td><td>ゲル状は30&nbsp;のシャフトに塗布しやすくなります。G皮下注射針は、乾燥すると防水シールを形成します。</td></tr><tr><td>ガラスピペット</td><td>WPI</td> <td>#TW100F-4</td><td>薄壁, 1&nbsp;mm外径、0.75&nbsp;mm ID フィラメントピペット使用</td></tr><tr><td>720 Needle Pipette Puller</td><td>Kopf</td><td>720</td><td></td></tr><tr><td>Silver wire</td><td>A-M Systems, Inc.</td><td>782500</td><td>裸0.010インチ</td></tr></tbody></table>

同時電気生理学的記録およびげっ歯類の脳における阻害剤のマイクロ注射

Simultaneous Electrophysiological Recording and Micro-injections of Inhibitory Agents in the Rodent Brain

ここでは、商業的にアクセス可能で、手頃な価格の部品を使用して、単回使用」injectrode」を構築するための方法を説明します。プロービングシステムが影響を受けた神経細胞の集団からの電気生理学的信号を記録しながら、薬剤を注入するのを可能にするように開発されました。この方法は、商業的なソリューションに簡単かつ経済的な代替手段を提供します。ガラスピペットは、皮下注射針と銀のフィラメントと組み合わせることによって変更されました。 injectrodeは、薬物送達のための商業的なマイクロポンプに取り付けられています。これは、薬物送達の部位に由来するマルチユニットの細胞外シグナルを介してリアルタイムの薬力学フィードバックを提供する技術をもたらします。コンセプトの証明として、我々は同時にinjectrodeを介して薬物の送達と、ラットでの光の点滅によって誘発さ上丘からニューロン活動を記録しました。 injectrodeの記録容量は、INJの機能解析を可能にします薬物送達の局在を正確に制御する有利ectionサイト​​。 injectrodeにロードされた化学物質の選択は、解剖学的実験のためのマーカーを追跡するなど、広大であるように、この方法の適用はまた、これまでここで実証されているものを超えています。

injectrodeの構造は、ワイヤの屈曲部とガラスピペット（D）に供給され、開口部から突出している図1の銀線（C）に示されています。 30 G針（B）が取り付けられ、接着剤でガラスピペットの開口部に封止されています。ピペット注入物質で充填された後に、ガラスマイクロシリンジ（A）は、針に取り付けられています。これは、マイクロシリンジは針（E）に接続し、銀線がガラスピペット（F）から突出するところ良好なシールが存在することが重要である。 図2は injectrodeは組み立てが完了した後にどのように見えるかの写真を示します。 視覚的に誘発されたマルチユニット活動は、図3に示すように、反対側の眼に300ミリ秒以下のフラッシュ上丘で得られた。GABAの注入時には、抑制されたフラッシュ刺激に応答して活動をスパイク。視覚的に注入が終わった後に、通常、45〜60分の間、返さマルチユニット活動を誘発。 図4は、</str...

ここでは、薬物のマイクロインジェクションによる脳深部構造の阻害と、同時の電気生理学的記録によるその影響のリアルタイムモニタリングという2つの機能を備えたガラスピペットを作ります。

Here we describe a method for the construction of a single-use &#8220;injectrode&#8221; using commercially accessible and affordable parts. A probing ...

本手順の最終的な目的は、マルチユニット神経活動をモニタリングしながら、ラットの上丘に神経伝達物質を微量注入するための、安価な注入路を構築することである。まず、ガラスキャピラリーと垂直マイクロピペットプラーを用いてガラスピペットを作製する。次に、銀線をキャピラリーに挿入し、非テーパー端から線の一部を突き出させる。次に、ガラスピペットと皮下注射針の間を密閉するために接着剤を使用します。最終ステップとして、マイクロインジェクターに固定し、ミネラルオイルを満たしたマイクロシリンジに接続したピペットに、シカゴスカイブルーで着色したGABA溶液を満たします。最終的に、入手可能で安価な部品を用いて構築されたこの注入装置により、薬物注入前、注入中、および注入後の不活性化領域のニューロン活動を記録しながら、脳深部構造を不活性化させることが可能になります。この手法には、ガスベースの圧脈パルスや光注入システムなどの他の既存の手法と比較して、いくつかの利点があります。一つは、薬剤投与を機能的に制御できるコスト効率の高い方法であることで、これにより過剰注入によって引き起こされる組織損傷を抑えられます。もう一つの利点は、記録機能を兼ね備えていることであり、神経不活性化の時間的要素を効率的に制御することが可能です。記録用注入ピペットを準備するために、まず外径1 mm、長さ7 cmのキャピラリーを、Cop Verticalモデル（Seven 20または同様の装置）でプルします。ヒーターを18に、ソレノイドを1に設定します。次に、手袋を着用し、手動で先端を折って開口部を作成し、顕微鏡下で内径が30〜40 µmの間であることを確認します。ビューファインダーの定規を用いてこれを測定します。これにより、0.3から0.6 MΩという比較的低いインピーダンスが得られます。次に、テーパーのない端から、長さ約7 cmの銀線をピペットに挿入し、1から2 cm分をピペットの外に出したままにします。この余分なワイヤーをキャピラリーに対して直角に曲げます。次に、30ゲージの皮下注射針を用意し、シャフトに柔軟性プラスチック接着剤を塗布します。その後、ゆっくりと針をピペットに挿入します。可能な限り、ピペットと針の接合部に接着剤を追加してシールを作成します。ピペットチップを上にした状態で、アセンブリを約12時間乾燥させます。ラットを麻酔し、脳定位固定装置に固定した後、眼軟膏を塗布し、頭部をきれいに剃毛します。局所麻酔を施し、外科的な麻酔深度にあることを確認した後、10番のメスを用いて正中線に沿って頭皮を切開します。これにより、冠状縫合と矢状縫合が露出します。次に、外科用スパチュラを用いて、Lambdaおよびbgmaの解剖学的指標を確認します。これらの指標が同一の水平面上で揃うように頭部の位置を調整します。その後、ガラス管のような細い剛性ポインターをbgma上のゼロ点に合わせます。次に、bgmaの座標を用いて、チューブの位置を目的の場所に調整します。シャーピーを使用して、開頭術の標的領域を囲む正方形を描きます。次に、滅菌済みの外科用ドリルを使用し、印に沿ってゆっくりと骨を除去します。骨が薄くなった際に摩擦によって生じるヘッド起因の組織損傷を避けるため、可能な限り弱い圧力をかけ、ドリルを動かし続けてください。その後、ピンセットを用いて四角い部分を慎重に除去します。注入液はそのまま透過するため、Dura MAを除去する必要はありません。露出した皮質は脳脊髄液で灌流し続けてください。まず、5～10 µL シリンジにミネラルオイルを満たして注射液を準備します。次に、生理食塩水を用いて、染料を加えた目的の薬物を調製します。ここでは、0.5% Chicago sky blue を 300 µM GABA と混合します。次に、まず1 mLシリンジに調製した溶液を充填し、そのシリンジを用いて注入用ピペットに充填します。シリンジを取り外す際は、プランジャーに軽く圧力をかけ続け、真空状態によって注入路から溶液が吸い出されないようにしてください。漏れが生じやすい箇所で液漏れがないか確認します。余分な液体をスワブで吸い取り、漏れがないか再確認します。次に、ミネラルオイルを満たしたマイクロシリンジを注入路に取り付けます。その後、余分な溶液を拭き取ってください。ガーゼを用いてください。注入チップを確認します。溶液が小さな滴となって流れる必要があります。流れない場合は詰まっているため、対処してください。その後、インジェクターをマイクロポンプシステムにしっかりと取り付けます。次に、注入路の位置を目標座標まで移動させ、電極を上丘まで降ろします。上丘は視覚誘発電位の記録によって特定できます。電極を降ろす際、閉塞を防ぐために低流量で注入を行い、わずかな正圧をかけます。目的の構造に到達した時点で注入を停止してください。注入後、乾燥を防ぐために露出した皮質を温かいアガロースで覆います。電極を最終的な位置に配置した後、電極周囲の組織が安定するまで30分間待ちます。その後、溶液を40 nanoliters/minの速度で400から800 nanoliters注入し、上丘の神経活動が活性化することを確認します。抑制性溶液の注入中は、電極でスパイクの減少が認められるはずです。上丘において視覚誘発電位を測定した。GABAの注入後、対側眼に300ミリ秒間のフラッシュ刺激を与えたところ、フラッシュ刺激に応答するスパイク活動が45〜60分間にわたり抑制された。この手順を行う際は、充填時の漏れがないかを確認し、薬液が注入チップからスムーズに流れていることを検証することが重要である。

simultaneous-electrophysiological-recording-micro-injections

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

我々は、神経活動と血中酸素レベル依存（BOLD）MRI信号との関係の調査のためのプラットフォームを提供し、齧歯類の脳における同時機能的磁気共鳴イメージングと電気生理学的記録法を開発した。...

齧歯類の脳における同時fMRIと電気生理学

手順は脳波、筋電図、脳乳酸濃度が監視されながらoptogenetically大脳皮質錐体ニューロンの活動を操作するために記述されている。彼らは自発的睡眠/覚醒サイクルを受けながら、実験的な録音はケーブルつながマウスで実行されます。...

同時脳波、リアルタイム乳酸濃度の測定と齧歯類大脳皮質ニューロン活動のOptogeneticマニピュレーション

このプロトコルは、麻酔をかけたラットの標的脳領域への正確な薬物送達のための注射器の組み立てと使用を概説し、続いて記録された電気信号によるニューロン活動のモニタリングを行います。...

ラット脳における電気生理学的記録による薬物マイクロインジェクション

このビデオは、麻酔をかけたラットを複数の部位からの脳活動の電気生理学的記録のために準備するための詳細な手順を示しています。頭皮を解剖して頭蓋骨にアクセスし、電極を取り付けて固定するために正確な位置に穴を開けます。次に、タングステンマイクロワイヤ電極を目標位置に挿入してデータを記録します。...

ラットの複数の部位からの脳活動のin vivo電気生理学的記録

このビデオは、統合マイクロドライブアレイを使用して、ラットの複数の脳領域からの電気生理学的記録を同時に行う方法を示しています。記録電極は嗅球に、基準電極は前頭皮質に、マイクロドライブアレイ電極は海馬に配置されます。ラットは自由に採餌することができ、アレイを使用して埋め込まれたすべての電極からの同時記録が記録されます。...

マイクロドライブアレイ法による脳領域の複数からの電気生理学的記録

このビデオは、麻酔をかけたラットで共局在脳波(EEG)と局所電位(LFP)を同時に記録する手順を示しています。このプロセスには、ラットを準備し、そのウィスカーパッドに刺激電極を取り付けることが含まれます。脳波クモ電極をラットの頭蓋骨に配置して、表面の脳波を測定します。同時に、マルチチャンネルの微小電極を頭蓋骨のバリ穴から特定の脳領域に挿入し、局所的な脳領域からの神経活動を記録します。...

麻酔ラットにおける脳波および局所電位記録の同時実施

出典: Lai, J., et al. げっ歯類脳における電気生理学的記録と抑制剤のマイクロインジェクションの同時投与J. Vis.

ラットにおける神経活動の阻害とその電気生理学を用いた検出

覚醒マウスにおいて、細胞外神経活動を同時に記録し、記録部位付近で複数の神経活性物質を放出する電極の構築方法を提示します。この技術により、目的のニューロンへの推定される局所シナプス入力の詳細な分析が可能になります。...

覚醒マウスにおける神経活性物質のMicroiontophoreticアプリケーションと組み合わせることで神経活動の細胞外記録

このプロトコルでは、共局在脳波 (EEG) や麻酔下のラットにおける潜在的なマルチ-層流のローカル...

共局在脳波および齧歯動物のローカル フィールド電位の同時記録

微小電極アレイを用いたげっ歯類脳スライス 4 アミノピリジン誘発てんかん活動の記録と電気変調を実行する方法を示します。カスタム記録室は、長期の実験的セッションを通して組織実行可能性を維持します。電極マッピングをライブ、刺激的なペアの選択は、カスタム グラフィカル ユーザー...

記録と電極アレイに結合された齧歯動物の脳スライスにおけるてんかん活動の変調

電気生理学用に設計されたマイクロインジェクストローデシステムと、オプションの薬物注入による実験プローブ(ナノセンサ、マイクロ電極)の送達を支援します。広く利用可能なマイクロ流体成分は、プローブを含むカニューレに結合される。マイクロインジェクストロード構築のためのステップバイステッププロトコルが含まれており、マカク皮質におけるムスシモール注入中の結果が含まれています。...

複合薬物注入と電気生理学のためのマイクロインジェクストローデシステム

学ぶ ラット上丘への神経伝達物質マイクロ注射と同時多単位神経活動記録の手法。ガラスピペットと銀線を用いたコスト効率の良いツール構築により、深部脳構造の不活化とリアルタイムモニタリングが可能になります。

同時電気生理学的記録およびげっ歯類の脳における阻害剤のマイクロ注射

さらに動画を探す