Simple Method for Fluorescence DNA <em>In Situ</em> Hybridization to Squashed Chromosomes

Amanda M. Larracuente; Patrick M. Ferree

doi:10.3791/52288

JoVE Journal
Biology

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Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

蛍光DNAための簡単な方法その場でぺしゃんこ染色体へのハイブリダイゼーション

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11:36 min

January 6, 2015

DOI: 10.3791/52288-v

Amanda M. Larracuente¹, Patrick M. Ferree²

¹Department of Biology,University of Rochester, ²W. M. Keck Science Department,Claremont McKenna, Pitzer, and Scripps Colleges

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ここでは、スライドマウント染色体上の反復ヘテロクロマティック配列を可視化するために、蛍光DNAのin situハイブリダイゼーション(DNA ISH)を行う簡単な方法を紹介します。この分析法は最小限の試薬で済み、短いプローブまたは長いプローブ、さまざまな組織、蛍光または非蛍光ベースのシグナルでの検出に汎用性があります。

この手順の全体的な目標は、DNA in situハイブリダイゼーションを使用して、ヘテロクロマティック配列を有糸分裂染色体にマッピングすることです。これは、最初にスターショウジョウバエの幼虫の3番目の脳、または関心のある別の組織を解剖することによって達成されます。2番目のステップは、ティッシュをカバースリップに固定することです。

次に、ティッシュをカバースリップとスライドの間に押しつぶします。ハイブリダイゼーションのために染色体を準備するための最後のステップは、短く合成されたオリゴプローブを押しつぶされた組織にハイブリダイズすることです。最終的に、蛍光顕微鏡法を使用して、染色体上のオリゴプローブに相補的な配列の局在を示します。

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