Name: 組織工学血管移植片とその後の移植のために手術手技インビボモニタリング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: 学ぶ組織工学血管移植片の羊頸動脈への外科的移植と血流・血圧のリアルタイムモニタリング手法。この再現性の高いプロトコルは血管移植の生体内評価と臨床応用研究に有用です。

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この作品は、国立心臓と肺研究所（R01 HL086582）とニューヨーク幹細胞科学基金（NYSTEM、契約＃からの補助金によってサポートされていました &#160; STAとジョン·ナイキストによって完成したJoveのビデオで使用されるDDSイラストにC024316）;バッファロー、ニューヨーク州立大学のメディカルイラストレーター。

注：このプロトコルは、バッファローのニューヨーク州立大学で動物実験委員会によって承認されています。 1.手術前の準備<ol><li>以下の研究のために（40〜60の体重で約1-3歳ドーセットクロス、女性、）羊を使用してください。手術の前に3日から始めて、口の中にシクロスポリンA（200mg /日）、アスピリン（975 mg /日）、及びクマジン（20〜30 mg /日）を管理し、すべての研究の期間継続する。 </li><li>羊は手術（通常の飼料= 1.8キロの干し草と0.4キロ粒）の前に12時間絶食させていることを確認します。 </li><li>蒸気121℃のオートクレーブで30分間15psiのを使用して、すべての外科用品を殺菌する。 </li><li>手術前にパラホルムアルデヒドのデシケーター48時間で次の項目を配置します：4ミリメートルドップラー流量プローブ、1ミリメートルの超音波の結晶、留置動脈カテーテル、延長チューブ、および42「タイゴンチューブを。 注：のために必要な、関連する医療機器のテーブル手術と殺菌のためには、 表1に記載されています。この段階でタイゴンチューブに計装の事前配置は、手術中に時間を節約するのに役立ちます。 <ol><li>左及び該当する場合は、右のようにプローブ、カテーテルおよび結晶の両端にラベルを付けます。 </li></ol></li></ol> 2.手術<ol><li>ジアゼパム（0.5ミリグラム/ kg）およびケタミン（4ミリグラム/ kg）を静脈内（IV）で麻酔するための羊を誘導する。また、テラゾール（4 mg / kgを）IVを使用しています。 <ol><li> 8.5〜10.0ミリメートル、内径カフ付き気管内チューブ7と経口気管内挿管を行います。 </li><li>一回換気量の換気装置（7〜10ミリリットル/ kg）または圧力調整式人工呼吸器に再呼吸回路を介して吸入麻酔を投与する（15〜20センチメートルH 2 O）。深い外科麻酔ステージにメディアに到達するために適切な量（3％-4％、当初）でイソフルランまたはセボフルランを管理するための精密な気化器を使用してください。の最小肺胞内濃度羊は1.4％以上、それぞれ1.9％8である。 </li><li>運動刺激に応答して、眼瞼反射、目の位置、および心拍数を観察することにより、麻酔深度を評価する。パルス酸素濃度計を用いて血液の酸素飽和度（95％-100％）はカプノグラフィーを使用して、呼気ガス中のCO 2濃度（45〜55 mmHg）で、監視し、自動調整さ加温ブランケットを使用して、手順（38.5から39.5℃）中に体温を維持する。 </li></ol></li><li>標準バリカンの＃40ブレードを使用し、羊の全体首から、そして1橈側皮静脈の上にウールを剃る。 70％のイソプロピルアルコール、7.5％ベータダインスクラブ飽和ガーゼを使用した手術のための両方の部位の皮膚を準備します。皮脂の除去を容易にするために、アルコールガーゼで始まる。ベタジンガーゼとアルコールとの代替を三回ガーゼ。 </li><li>加温ブランケットの上に背側横臥位で動作テーブルの上に羊を置きます。胃内容物の受動的な追放を可能にするために、中規模の経口胃管を渡します。拡大する羊の首と、必要に応じて配置を維持するために協力的緩衝材を使用しています。 <ol><li> 7.5％ベタジン浸したガーゼを使用して、最終的な無菌スクラブを行い、手術前に5分間座ってすることができます。 </li></ol></li><li>橈側皮静脈に配置された血管カテーテルを通して10ミリリットル/ kg /時間での静脈内輸液（乳酸リンゲル液または0.9％生理食塩水）を管理。ペニシリンGプロカイン6600 U / kgを筋肉内（IM）、ゲンタマイシン1.6 mg / kgを、IM、およびブプレノルフィン0.005から0.01 mgのIVまたはIM：術中抗生物質や鎮痛を管理します。 </li><li>電気焼灼を使用して腹側正中首の上に縦に~12センチ切開する。鈍的切開技術を用いて結合組織を除去することにより、左右の頸動脈（1~6 cm）を単離する。オフネクタイと出血を最小限にするために頸動脈から分岐したマイクロ血管を焼灼する。 </li><li>すべての配線とチューブ（フロープローブ、超音波水晶ワイヤーを掘り進むを支援するために（非滅菌）の手術看護を利用することにより、無菌性を維持皮膚の皮下層内のカテーテルチューブ）。背外側首に外科的に準備さ切開を通って出る鈍いトロカールを使用してください。 <ol><li>無菌ドレープの下に到達し、首の側はドレープの下で可視化することができるように、羊の頭を回す。 </li><li>腹側正中頸部切開と首の側との間の皮下空間を介してトンネルに8センチメートル湾曲した止血剤を使用してください。オープンとぶっきらぼうに幅1.5cmの管〜のためのスペースを解剖するために止血剤を閉じます。止血のヒントは、頭と肩の間の中間に右または左耳に尾約10cmを配置する必要があります。ヒントは表面的な皮膚に向かって指しているように止血剤を回します。 </li><li>無菌ドレープの下にリーチし、滅菌＃11ブレードと止血剤の先端の上に、皮膚を介しての1.5cm切開する。皮膚を通して明確な終了を確認する止血のヒントを視覚化する。 </li><li>含むタイゴンチューブを渡す皮下トンネルを通してLL配線とチューブ。無菌ドレープ上記ワイヤーとチューブを保持する。 </li><li>それは羊の首を離れるとして移植配線を露出させ、首から外側のタイゴンチューブを削除するにはドレープの下に達する。皮下空間内の任意の緩みを最小限に抑えるために、個々の行を引き出します。適切に動脈に機器を取り付けるための十分な距離にしておきます。 </li></ol></li><li>両方の頸動脈に4ミリメートルドップラーフロープローブを配置し、初期読み取ります（ 図1）を達成する。動脈をクランプする前に、ヘパリンIVの30分の100 U / kgのを管理します。 </li><li>手術の終了まで100 U / kg /時間でのヘパリン投与を継続します。非破砕血管クランプを使用して頸動脈をクランプ部分（長さ約4 cm）を切り出す。対側頚動脈流量は、脳への血流を維持するために、50％-100％に増加する。 注：これは、除去することによって本来の​​血管の反跳によって縦延伸を制限することが可能である置き換えおよび/または完全な吻合手順が完了するまでの間隔を短くするために血管クランプを使用してネイティブ動脈延伸さより短いセグメント。これは、個々の保持縫合糸の張力と移植された移植片を制限するのに役立ちます。 </li><li> 7-0プロリンethalloy重武装したモノフィラメント縫合糸でシンプルな中断されたステッチを使用して所定の位置にTEVを縫合。必要に応じて、吻合の縫合を妨げるであろう血管収縮を防止するために、天然の血管系に局所的にそのようなパパベリンた（15mg / ml）またはニカルジピン（1.25 mg / ml）での血管平滑筋弛緩剤を適用する。 注：約1ミリメートル間隔で縫合糸を配置することから始めます。これは非常に、場合に変化することができる。組成やTEV厚さは、縫合糸との間の有効距離に影響します。天然の組織またはTEV減少の厚さとしては、互いに接近、縫合糸を配置する必要があるかもしれない。 <ol><li>二つの対向するSを配置することによって、ネイティブ動脈にまずアンカーTEVの4点近位端および遠位端（図2 -Di）の両方でtitches。止血剤を使用して教えた各アンカーを持ちます。 注：近位および遠位の説明は、紙全体に血流の方向に関連している。 </li><li>吻合を開始するために、近位端および遠位端の両方の表面的な側面に5-6以上の縫合糸を追加します（図2 -Pr）。同時に血管を180度回転させるクランプ。 </li><li>繋留縫合糸の張力を再確立する。 TEVの回転側（5~6）近位ために縫合糸端部および遠位端部を追加的に中断加える。 </li></ol></li><li> TEVがしっかりと所定の位置に縫合された後、元の位置にそれを回転させ、第一、血管は、一度に1つをクランプ遠位クランプを外す。吻合部位でのわずかな出血が一般的です。これは自然にクランプ解除とreclampingの数分後に解決するか、追加の縫合糸の配置が必要な場合があります。 （ 図3ドップラーフロープローブを配置バックTEV入る血流及びモニタ流量に対するネイティブ動脈の近位に-Fl）。 注：左右の頸動脈の流量は、約15分後に平衡化することを期待。移植されたTEVと頚動脈における流量が着実に低下した場合には、TEVが凝固されることが可能である。流れに関する他の可能な異常がTEVに対して近位または遠位ネイティブ動脈の収縮に起因することができます。この問題が発生した場合、追加の血管平滑筋弛緩剤の使用が適用されてもよい、と本来の血管は、移植部位上の組織の閉鎖後30〜60分後に、基礎トーンに返す必要があります。 <ol><li>必要に応じて、対側頸動脈を切除し、「シャム」対照としての所定の位置に戻し、それを縫合。これは、より臨床的に関連する単独の右頸動脈を残すのみフロープローブ、超音波クリスタル、及びカテーテルを取り付けるよりも長い。シャム制御が望まれる場合は、2.11のステップに続行する前にこれを実行。 </li></ol></li><li> 7-0プロリンを使用したTEVの両側に1ミリメートルの超音波結晶（ 図3 -cr1 CR2）を縫合。超音波クリスタルヘッドを通して縫合糸を通し、唯一のTEVの表層にステッチ。 </li><li>テフロン織り前立て（ 図3のCa＆図4A）で修飾18 Gカテーテルを用いて動脈をカテーテルを挿入。ネイティブ動脈組織上のTEVに対するカテーテル遠位に配置します。 <ol><li>出血を制御するために5/0 Ethibondで動脈壁に前立てを縫合。生理食塩水でフラッシュされたカテーテルにマイクロボアチューブを接着するためにシクロヘキサノンを使用してください。補助線としてチューブを使用してください。 </li><li>チューブの体外に終了します（ 図4B）を密封するためにSurfloインジェクションプラグ付き20 Gルアースタブアダプターを使用してください。カテーテルの開通性を維持するために、2〜3日ごとにラインのプライミングボリュームを取得し、食塩水10mlでそれをフラッシュヘパリンナトリウム注射、次いで5000 U / mlの。 </li></ol></li><li>フロープローブと超音波の結晶、ならびにフロープローブとカテーテルとの間の距離との間の距離を記録する。これはソフトウェアに関連して算出する脈波伝播速度を可能にする。このような計算を必要としない場合、カテーテルを移植しない。 </li><li>機能しているすべての移植ハードウェアを確実にするために必要に応じて手術中の測定値を取得する（セクション3を参照）。 </li><li> 2/0シルクとテーパー針（ 図3）を使用して、近くの筋肉組織に注入された線や電線を固定します。 <ol><li>プローブ尾とワイヤー頭側拡張してから、横の筋肉組織に向けて「Uターン」ことで、容器に血流プローブ線と平行に配置します。ワイヤーまたはフロープローブは、容器上の任意の歪みを配置することができないように、2箇所にテーパー針に2-0シルクを使用して、隣接する筋肉組織にワイヤを固定します。縫合糸がしっかりされていることを確認しますが上musculaを締めとstrangulateはありませんトゥーレ（ 図3）。 </li><li>フロープローブを固定するための前述の手順と同様のたるみ~1.5センチ（ 図3）を考慮して、横方向の筋肉組織に結晶配線および動脈カテーテルラインを縫合。 </li><li>一緒にグループすべてのワイヤや線、ちょうど前のステップと同様の皮下トンネル、を通って出る前に筋肉組織にそれらを固定する。 </li></ol></li><li> （;針をカット、皮膚フェーシャ、非切削針）皮膚にマットレスステッチを実行して、フェイシアと真皮下で実行されている縫合パターンを用いた層で2-0ビクリル縫合糸により手術部位を閉じます。 2/0のVicrylとカッティング針を用いて体外に電線や線の周りの背側頚部で1.5センチの切開を閉じます。 </li><li>しっかりと羊（ -回復した後の図5）の皮膚に縫合されるパウチに置きフロープローブワイヤ、カテーテル線、超音波水晶ワイヤ（×10cmの10cm）に。 </li><li>徐々にオフ麻酔羊を引き離す自発呼吸が再開されたときと一回換気量の換気装置はその後羊を抜管。必要に応じて橈側皮静脈と包帯に挿入された血管カテーテルを削除します。 </li><li>切開、Telfaパッド、ストレッチロールガーゼ、及びエラスチコンにトリプル抗生物質軟膏を使用して首を包帯。 </li><li>一日一日二回ブプレノルフィン0.005から0.01 mgのIVまたはIM、2日間1日1回の回復中に一度フルニキシンメグルミン2.2 mg / kgをIM、その後1.1 mg / kgをIM：術後鎮痛を管理します。 </li></ol> 生体内の監視3. <ol><li>適切な拘束を​​確実にするために、モバイルカートに羊を置きます。これは羊は、ハードウェアを損なうことなく、穏やかで意識したまますることができます。計装録音を得る前に30分間カートに2〜3回の羊を順応する必要があるかもしれません。 </li><li>袋からすべての配線や線を削除し、監視装置に接続します。流量計フロープローブを接続し、1ミリメートルの超音波結晶TRBに接続-USBボックス、及び圧力トランスデューサのカテーテルライン。この設定のフローチャート（ 図6）が設けられている。 </li><li>流量プローブおよびデータ収集に先立って圧力変換器を校正。 注：、ソフトウェアのバージョンや使用される機器の違い、キャリブレーションや設定の間の電位の変動に、場合によって異なります。 </li><li>製造業者のプロトコルに従って、微調整Sonometrics結晶測定をオシロスコープを利用する。 </li><li>コンピュータソフトウェアを使用して記録データ（ 図7）。赤い色の下半分にトレースはシャム/ネイティブに対応している白色で、図7の上半分でトレースは、移植されたTEVに対応している。 TEVとシャム流量（ml /分）、動脈圧（mmHgで）及び直径（mm）の両方のためにライブ記録されている。 </li><li>無擾乱少なくとも1分間の記録。より詳細な分析のためにこのデータをエクスポートします。記録後、DISCONNECTすべてのワイヤと背中羊の首に縫合ポーチに入れる。 </li></ol>

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報告すべき開示はありません。

このレポートの目的は、ヒツジ頸動脈への関心のインプラントTEVSに信頼性と再現手順を提供することにある。このモデルで使用される動物の天然の頸動脈は、厚さ0.5〜0.75ミリメートルおよび外径4.5〜5ミリメ​​ートルであった。ここで説明する外科技術は、厚さが0.25〜1ミリメートル、外径4〜5ミリメ​​ートルと3ヶ月の期間までの効果的な証明して大きな成功を収め、意図されたエンドポイントと長さは4 cmの様々な形状のTEVSを移植するために成功している。この手術法の使用が収集しやすく、より一貫性がデータの取得を可能にした。 さらに、 インビボでのリモデリングのリアルタイムのパラメータを測定する能力が記載されている。様々な直径は、同様に、不一致と移植されたTEVの設計の所望の範囲に依存して、このモデルに首尾よく使用することができ、注入の持続時間は1賛成または超えて拡張することができるR。 このプロトコルの最適化における最大の進歩の一つは、結節縫合技術を用いてエンドツーエンドの吻合の使用である。この報告書の作成に使...

TEVSの開発のための主な焦点は、自家血管が利用できない場合、自家移植片の交換のための代替を提供するために、ドナー視力罹患率を制限することであった。例えば、年間冠動脈バイパス手術の数は、アメリカで35万超えている、との適切な移植片の理想的な供給源は、左内胸動脈、冠動脈及び伏在静脈1を左前下のまま。血管疾患に苦しむ多くの人々は、自家移植片の交換に適し動脈と静脈を持っていない可能性があるため、TEVSの開発は、このように何十年も1-6のための研究の強烈な分野となっています。小説TEVSのエンジニアリングおよび最適化は、自身がそのような激しい議論の話題となっていないTEVSを移植するために採用外科技術に関する報告、多くの進歩を遂げているが。そうではなく、動物モデルにTEVSの移植に関するプロトコルは大きく残されている研究研究者まで。 以下の原稿は、エンドツーエンドの吻合法を利用してTEVSを移植する方法を示します。この手順は、長手方向の張力およびインビボのモニタリング器具の添加を最適化する、縫合技術の安定化、特定の吻合部の縫合パターンを用いて最適化した。この方法は、以前に使用されてきた多くのバリエーションの一部と対比される。さらに、この手順は、動脈血圧、TEV直径/コンプライアンスなどのパラメータを取得し、外植までアップ手術後TEVを通して流速する方法について説明します。それはリモデリングの過程にある間、このデータ収集はTEVの不可欠な分析を提供します。

<table><tbody><tr><td>圧力トランスデューサ</td>ー<td>ベクトンディキンソン</td><td>P23XL-1</td><td>数量:1+(各動脈に1つ). 水で満たされたダイヤフラムドームで使用されます。</td></tr><tr><td>アンプとトランスデューサボックス</td><td>グールド</td><td>5900シグナルコンディショナーケージ</td><td>数量:1. 2つのトランスデューサとアンプをケージに含める必要があります。この特定のユニットは製造中止になる場合がありますが、BNC /アナログ出力を備えた他の市販の圧力トランスデューサは、ソノメトリックス機器と通信します。</td></tr><tr><td>TS420血管周囲流量計モジュール(x2)</td><td>Transonic Systems</td><td>T403モジュールおよびTS420(x2)</td><td>数量:各頸動脈を通る流量を測定する1. Flowプローブは、TS420ユニットの各に接続します。</td></tr><tr><td>デジタル超音波測定ユニット</td><td>ソノメトリクス</td><td>TR-USB</td><td>数量:1</td></tr><tr><td>フロープローブ Precision S-Series 4&nbsp;mm</td><td>Transonic Systems株式会社</td><td>MC4PSS-LS-WC100-CM4B-GA</td><td>数量:2</td></tr><tr><td>1&nbsp;mmソノメトリクスクリスタル</td><td>ソノメトリクスシステム</td><td>1R-38S-20-NC-SH</td><td>数量:2-4(各動脈に2つ)</td></tr><tr><td>移植用カテーテル</td><td>BD(ベクトンディキンソン)</td><td>&nbsp;381447</td><td>数量:1+(動脈ごとに1つ). カテーテルは切断され、マイクロボアチューブに固定され、スタイレットは挿入に使用されます。</td></tr><tr><td>タイゴンマイクロボアチューブ</td><td>ノートンパフォーマンスプラスチック</td><td>(AAQ04127) 配合 S-54-HL</td><td>延長セット用に長さにカット</td></tr><tr><td>ルアースタブアダプター</td><td>BD (ベクトンディッキンソン)</td><td>427564 (20ゲージ)</td><td>数量: 1+ (各動脈カテーテルにつき1つ)</td></tr><tr><td>Surflo インジェクションプラグ</td><td>テルモ</td><td>SR-IP2</td><td>数量: 1+ (各動脈カテーテルにつき 1つ)</td></tr><tr><td>Meadox</td><td>PTFE (テフロン) フェルト</td><td>19306</td><td>サイズにカット. 私たちの研究で使用したPTFEフェルトは製造中止になりました。ただし、「サージカルメッシュ」同等の製品を提供します。</td></tr></tbody></table>

組織工学血管移植片とその後の移植のために手術手技<em&gt;インビボ</em&gt;モニタリング

Surgical Technique for the Implantation of Tissue Engineered Vascular Grafts and Subsequent In Vivo Monitoring

組織工学的船（TEVS）の開発は、大動物モデルへの能力に日常的にかつ効果的にインプラントTEVS（直径4-5 mm）で進められる。ステップバイステップのTEVの間の位置に配置するためのプロトコルおよびTEVネイティブ頸動脈のリアルタイムデジタル評価は、ここで説明されている。 インビボ監視は、流量プローブ、カテーテル、および超音波結晶（可能な注入によって可能にされる手術時に移植さTEVSネイティブ頚動脈）の動的な直径の変化を記録する。一度移植、研究者は、動脈血流パターン、観血血圧や、脈波伝播速度、振幅増加指数、パルス圧およびコンプライアンスなどのパラメータをもたらす動脈直径を計算することができる。データ収集は、実験期間を通じて分析のために、単一のコンピュータプログラムを使用して達成される。このような貴重なデータがTEVマトリックスリモデリングへの洞察を提供し、そのresemblanネイティブ/偽対照およびin vivoでの全体的なTEV性能にCE。

30以上の羊は、（印刷中）TEVSの移植のために、この報告書に記載されて外科技術9を受けている。プロトコルの最適化の後に、最新の羊操作をまとめた表を表2に示す。すべての羊のない生命を脅かす合併症を持つTEV注入後に回復した。いくつかの動物では、線維症は、留置動脈カテーテルの先端付近ネイティブ動脈で観察された。追加されたインスツルメンテーションの存在と炎症の有意な増加が観察されていない。まれに（1 18のカテーテル）、カテーテルTEVを通る血流の妨げを生じなかった。この1閉塞は1ヶ月後に発生した。カテーテルからのマイナーな合併症は動脈信号と血液を吸引することができないの減衰が含まれています。 TEV開発の研究を進め、最も一般的に報告されたデータは、通常、開存率、流速とコンプライアンスである。このプロトコルは、POSSであることを実証している実験期間を通じてそのような貴重なデータを取得するためにible。このレポートは、流量、直径および動脈圧の買収に焦点を当てているが、コンプライアンス、増加指数と脈波速度も算出することができる。 <p class="jove_content"...

動物の屠殺まで、インビボでのエンドツーエンドの吻合およびリアルタイムデジタル評価を用いて、ヒツジの頸動脈への組織工学的船（TEVS）の間の位置に配置するためのステップバイステップのプロトコル。

The development of Tissue Engineered Vessels (TEVs) is advanced by the ability to routinely and effectively implant TEVs (4-5 mm in diameter) into a large ...

この手順の全体的な目標は、血管移植片の外科的移植と新しい器具の頸動脈への再現可能なプロトコルを提供することです。これは、羊の天然頸動脈の一部を最初に切除することによって達成されます。2番目のステップは、ここでは組織改変血管またはTEVと呼ばれる血管移植片を単純な中断縫合を使用して縫合し、吻合を確立することです。次に、フロープローブカテーテル。そして、メートル法の結晶が頸動脈と血管移植片に固定されます。最終的に、移植後、この手順により、実験期間中、直径の変化、血流、および動脈圧をin vivoで記録することができます。これらの測定から、動的コンプライアンス、脈波速度、およびその他の血行動態パラメータを監視して、in vivoリモデリングを追跡できます。この技術の主な利点は、標準的な方法になる可能性のある最適化された詳細な血管移植移植プロトコルを提供し、それによって外科的変動を最小限に抑え、in vivoリモデリングを研究する手段を提供することです。一般に、この方法に不慣れな人は、最適化された移植手順の詳細や、in vivoでの血管移植、適応、およびリモデリングのモニタリングの重要性に精通していない可能性があるため、苦労する可能性があります。この方法は、最適な血管組織工学条件や血管移植片のリモデリングと疾患など、血管移植片の開発と生物学の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の意味は、臨床応用のための血管移植片の開発をよりよく研究するための手順を提供するため、血管置換術の治療にまで及びます。この方法により、全臓器組織工学や血管リモデリング、さらには高血圧や全臓器移植などの疾患の研究に洞察を提供することができます。このアイデアを最初に思いついたのは、ex vivo動静脈シャントモデルを使用して、組織改変された血管グラフトの開発に最適な条件を評価したときでした。縫合糸と器具の配置は開存性とデータ取得の成功に重要であるため、この方法の視覚的なデモンストレーションは不可欠です。この手順を開始するには、羊に麻酔を誘発し、羊を手術の準備をします。テキスト プロトコルで説明されているように、電気焼灼を使用して、腹側正中線頸部を縦に約 12 センチメートル切開します。次に、結合組織を切除して左右の頸動脈を分離します。鈍い解剖技術を使用して、滅菌ドレープの下に手を伸ばし、羊の頭を回して、首の側面がドレープの下に視覚化できるようにします。8センチメートルの湾曲した止血剤を使用して、腹側正中線頸部切開部と首の側面との間の皮下空間をトンネルで貫通します。止血器を開閉して、チューブのスペースを幅約1.5センチメートルまで鈍く解剖します。滅菌ドレープの下に手を伸ばし、滅菌番号11のブレードで止血剤の先端に皮膚から1.5センチメートルの切開を行います。すべての配線とチューブを含むタイゴンチューブを皮下トンネルに通します。ワイヤーとチューブを滅菌ドレープの上に保持します。次に、ドレープの下に手を伸ばして外側のタイゴンチューブを首から取り外し、羊の首を離れるときに埋め込まれた配線を露出させます。皮下空間のたるみを最小限に抑えるために、個々のラインを引き出します。器具を動脈に適切に取り付けるために十分な距離を残してください。ドップラーフロープローブを配置し、テキストプロトコルに記載されているようにヘパリンを投与した後、非粉砕性血管クランプを使用して頸動脈をクランプし、長さ約4センチメートルの部分を切除します。組織改変された血管またはTEVを、7.0プロリンF合金を使用した単純な断続縫合を使用して所定の位置に縫合します。ダブルアームモノフィラメント縫合糸。まず、近位端と遠位端の両方に 2 つの対向するステッチを配置することにより、TEV の 4 つのポイントを内動脈に固定します。次に、近位端と遠位端の両方の表側にさらに5〜6本の縫合糸を追加します。吻合を同時に開始するには、血管クランプを 180 度回転させ、固定縫合糸の張力を再確立し、TEV の回転側の近位端と遠位端に 5 〜 6 本の中断された縫合糸を追加します。TEVが所定の位置にしっかりと縫合されたら、回転させて元の位置に戻し、血管クランプを一度に1つずつ取り外します。次に、1mmの超音波結晶をTEVの反対側に縫合します。7.0を使用して、プロリンはテフロン織りプラークを備えた修正された18ゲージカテーテルを使用して動脈をカテーテルします。プラークを動脈壁に縫合し、テオンで5.0を使用して出血を抑制します。サイクロンを使用して、生理食塩水で洗い流されたカテーテルにマイクロボアチューブを接着します。次に、2.0シルクとテーパー針を使用して、埋め込まれたラインとワイヤーを近くの筋肉組織に固定します。これを行うには、血管フロープローブワイヤーを血管と平行に配置し、プローブコドルとワイヤーを伸ばし、外側の筋肉組織に向かってUターンします。2.0シルクをテーパー針の2か所で使用して、ワイヤーまたはフロープローブが血管に負担をかけないように、ワイヤーを隣接する筋肉組織に固定します。次に、クリスタルワイヤーと動脈カテーテルラインを外側の筋肉組織に縫合し、フロープローブを固定するための前の手順と同様に約1.5センチメートルのたるみを確保し、すべてのワイヤーとラインをグループ化し、皮下トンネルを通って出る直前に筋肉組織に固定します。前のSと同様に、筋膜と皮下へのランニング縫合パターンと皮膚へのランニングマットレスステッチを使用して、2.0 Vicryl縫合糸を層状に使用して手術部位を閉じます。外側のワイヤーとラインの周りの背頸部の1.5センチの切開部を2.0 Vicrylとカッティングニードルで閉じます。最後に、フロープローブワイヤー、カテーテルライン、超音波結晶ワイヤーをポーチに入れ、羊の皮膚にしっかりと縫合します。羊の術後ケアのためのテキストプロトコルを参照してください 羊を移動式カートに入れて、適切な拘束を確保します。これにより、羊はハードウェアを損なうことなく、落ち着いて意識を保つことができます。ポーチからすべてのワイヤーとラインを取り外し、監視装置に接続します。フローを接続します。流量計にプローブし、1ミリメートルの超音波結晶をA-T-R-B-U-S-Bボックスにプローブし、カテーテルラインを圧力トランスデューサにプローブします。フロープローブと圧力トランスデューサを校正します。データ取得前。オシロスコープを使用して、SOE水晶振動子の測定を微調整します。製造元のプロトコルに従って、こちらのコンピューターソフトウェアを使用してデータを記録します。白色の上半分は移植されたTEVに対応し、赤色の下半分はTEVと偽動脈の両方の偽動脈または天然動脈に対応します。直径流量と動脈血圧が記録されます。少なくとも1分間の録音後、邪魔されずにライブします。このデータをエクスポートして、より詳細な分析を行います。次に、すべてのワイヤーを外し、羊の首に縫合したポーチに戻します。表示。これは、TEVの直径流量と動脈血圧のin vivoライブ記録であり、実験期間中は記録できます。血管移植片の移植を最適化します。この外科的技術を使用すると、研究者は移植片の失敗の原因として外科的エラーを除外することができます 一度習得すると、この技術はわずか2時間半から3時間で行うことができます。1つのTEVが埋め込まれている場合、または6時間半もの長さです。TEV自家偽物と器具も埋め込む場合この手順を試みる際には、適切なレベルの抗凝固を維持することを覚えておくことが重要です。血管拡張薬を使用して、吻合糸の留置精度を最適化します この手順に続いて。免疫染色などの他の方法を実施して、細胞遊走や細胞分化などの追加の疑問に答えることができます。このビデオを見れば、ヒツジの頸動脈に組織工学血管を埋め込む方法や、動脈血流、血圧、血管移植片の変化、in vivoでの直径をモニタリングする方法について、よく理解できるはずです。実験的な環境で羊やその他の大型動物を使用する場合、種固有の予防措置に従う必要があることを忘れないでください。これらの大型動物を自分の研究のために扱うことを計画している場合は、これらの動物を安全かつ倫理的な方法で取り扱うための適切な訓練を受けていることを確認してください。私たちのビデオを見ていただきありがとうございます。

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Research

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Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

当社グループは、植込み型小径人工血管を再生成する心臓血管系の生理的拍動性のストレスを模倣したバイオリアクター培養システムを開発しました。...

拍動バイオリアクターを用いた工学生物学ベースの人工血管

自己細胞とテスト生体適合性とチタンの血液接触生体材料をシードする方法について説明する。このメソッドは、ブタ静脈cavaeに外科的に移植後数分以内に接種した内皮前駆細胞およびチタンチューブを、使用しています。この手法は、他の多くの埋め込み型医用機器に適応可能です。...

大動物モデルにおける心血管デバイス用自家血管内皮前駆細胞播種技術と生体適合性試験

細胞および分子新組織形成の我々の知識を向上させるために、TEVGのマウスモデルは、最近開発されました。グラフトは、C57BL / 6マウスにおける大動脈大静脈介在移植片として移植した。このモデルは、私たちの臨床研究で達成されるものと同様の結果を達成するが、はるかに短縮され、時間経過とともに。...

マウスモデルにおける下大静脈介在移植の移植

ここでは、二重播種部分的人工多能性幹細胞がマウスにグラフトするための機能的な組織工学血管移植片を生成するためのプロトコルを提示する（PiPSC）は - 脱細胞化血管足場バイオリアクターに由来内皮細胞 - 平滑筋細胞およびPiPSC由来。...

マウスモデルにおける組織工学血管の生成とグラフト

今日まで、厚い組織の欠陥は通常、自家組織フラップまたは人工組織を適用することによって再構築されています。このプロトコルでは、自家皮弁の代わりとして機能するために、自家椎弓根を持つ血管新生組織皮弁をエンジニアリングするための新しい方法を提示します。...

操作された血管柄マッスルフラップ

これは、組織工学チャンバー内の顕微動動静脈ループまたはフロースルー椎弓根構成を使用して、in...

中に組み込み血管新生による組織工学<em&gt;インビボ</em&gt;ティッシュ・エンジニアリング商工会議所

我々は、単離され、十分に特徴付けられた環境で、in vivoで血管新生を分析するためのモデルとして動静脈（AV）ループの生成のための顕微的なアプローチを説明します。このモデルだけでなく、血管新生の研究のために有用であるだけでなく、最適なエンジニアリングを軸方向に血管および移植組織に適しています。...

血管新生および血管組織工学を研究するための小さな動物モデルにおける動静脈（AV）ループ

スケーラブルな設計された血管は、臨床適用性を改善するであろう。簡単にかなりの3Dプリントガイドを使用して、血管平滑筋のリングは、血管移植片を形成し、筒状に作成して積層しました。移植片は、単純に、3Dプリントガイドサイズを変更することによってヒト冠状動脈寸法の範囲を満たすような大きさにすることができます。...

3Dプリントガイドとリングスタッキング法を用いたエンジニア血管移植片のスケーリング

エレクトロスピニング ラットモデルにおける最適化された構造を有する人工血管の移植

ここでは、カフ技術を使用してマウス頸動脈に組織工学的血管移植片を移植するためのプロトコルが提示され、血管組織再生メカニズムを調査するための適切な動物モデルが提供されます。...

カフ法 による マウス頸動脈への組織改変血管移植片の移植

この研究は、大腿動脈の小径移植片を評価するためのブタモデルを示しています。このモデルは、人間の血管動態を模倣し、移植片の開存性、血行動態、血管のリモデリングを包括的に評価します。これは、血管移植片を検査し、ドップラー超音波と血管造影でそれらを監視するための貴重なプラットフォームを提供します。...

小径血管移植片をテストするためのブタモデルでの大腿骨血管移植片移植

学ぶ組織工学血管移植片の羊頸動脈への外科的移植と血流・血圧のリアルタイムモニタリング手法。この再現性の高いプロトコルは血管移植の生体内評価と臨床応用研究に有用です。

組織工学血管移植片とその後の移植のために手術手技

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