Name: 適度な出生前アルコール暴露と成体ラットにおける社会行動の定量化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: 学ぶラットの出生前アルコール暴露プロトコルと成体における社会行動の定量化手法。神経科学と行動科学の研究に応用可能で、発達障害の理解に貢献します。

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ここ及び添付のビデオで説明したすべての手順は健康科学センターとニューメキシコ大学のメインキャンパスの施設内動物管理使用委員会によって承認されている。 1.出生前エタノール曝露<ol><li>サッカリンナトリウム塩水和物、190プルーフのエタノール（体積95％のアルコール）、ビーズのガラス飲料チューブ、天然ゴム白＃4ストッパー1ホール、1「ベンドチューブボールポイント、WWWから印刷された紙の支配者：すべての必要な材料や化学物質を入手.vendian.org / mncharity / DIR3 / paper_rulers /。 </li><li>ベンダーまたは代替源から実績​​のある大人のブリーダーラットを入手します。このプロトコルで提示方法や代表的なデータのためのロングエバンスブリーダーを使用してください。女性は125〜150グラムと、彼らは（ステップ1.5）の繁殖時に約9〜10週齢であるように、到着時に6〜7週齢の重量を量る。すべての将来のダムが初めての母親であることを確認してください。男性は12であることを確認してください繁殖プロトコルの開始時に到着し、15週齢時の年齢の週。 </li><li>ハウスは、逆12時間の明/暗スケジュールで22℃で個別にプラスチックケージの動物は（9：00時間に21：00から点灯）。すべて飲みセッション中に含めて、研究を通して食品や水道水を自由へのアクセスを提供します。 1.4のステップに進む前に、施設への順化のために少なくとも1週間を許可します。 </li><li>各雌ラットのベースラインの体重を取得します。 </li><li> 2週間雌ラットの妊娠前の飲酒レベルを評価します。手順に従ってください1.5.1-1.5.6ために。 <ol><li>日に1及び2は、水道水中の0.066パーセントのサッカリン溶液（無エタノール）を含有する飲料チューブを埋める。消費がそれを充填する前に飲酒チューブにmmの精度で紙定規を貼付定量化するために。それはエタノール消費を定量化するために、チューブの重さに関連した測定の誤差を減少させるので、この方法を使用します。ルーラー上の20ミリメートルマークにチューブを埋める。 4時間のdrinkiを開始NGセッション（1.5.1-1.5.6と1.7ステップ）活性や飲酒のレベルが最も高い暗期（10時00分時間）の発症後1時間。 </li><li>各飲料セッションの終了時に消費されたサッカリン溶液の量を定量化する。測定を容易にするために、事前に定規に1mm当たり溶液の体積を決定し、ボリュームにミリメートルに変換する。ここで推奨チューブ用各MMは0.366ミリリットルに対応している。 </li><li> 3日目および4日2.5％エタノール（v / v）で、水道水中の0.066パーセントのサッカリン溶液でチューブを埋める。各セッションの終了時に消費されたエタノール溶液（体重1kg当たりの重量）の量を定量する。 </li><li> 5日目、その後、5％エタノール（v / v）で、水道水中の0.066パーセントのサッカリン溶液でチューブを埋める。各セッションの終了時に消費されたエタノール溶液（体重1kg当たりの重量）の量を定量する。 </li><li>妊娠前の飲酒フェーズの終了時に、ラットを計量し、平均エタノールconsumを計算ptionとグループ全体の標準偏差。消費は妊娠中の自発的な飲酒の変動を減らすために研究から意味グループの上または下の1標準偏差よりも大きいことを意味れるラットを削除します。 </li><li>妊娠前の飲酒レベルは2つのグループにできるだけ厳密に一致するようにサッカリン制御やPAE条件のいずれかに残っているラットを割り当てます。 </li></ol></li><li> 1-14日以内にペア実績のある男性のブリーダーと各雌ラット。雌ラットは、繁殖期の間にエタノールを消費しません。膣栓の存在によって妊娠を確認して、雌ラットの重さ、そして個別に彼女を収容する。これは研究から、女性を削除した後、最大5日間、雄ブリーダーと雌ラットを残し、妊娠日1.オプションとして定義されている。 注：妊娠中のエタノール消費が膣栓の存在を妊娠1日目の検査で10：00時間で開始されるために実行する必要がありますこの時間の前に。 </li><li>妊娠期間中の1日4時間（1000 1400時間）のためのエタノールまたはサッカリンソリューションを提供します。 <ol><li>妊娠1日目に開始すると、0％または5％のエタノールとグループの割り当てに基づいて、水道水で0.066パーセントのサッカリン溶液のいずれかとの雌ラットを提供する。サッカリン対照ラットに与え0％エタノール溶液の体積はエタノールラットによって消費5％エタノール溶液の平均体積に一致することを確認する。各セッションの終了時に消費されたまたはサッカリン（体重1kg当たりの重量）のエタノール溶液の量を定量化する。 </li><li>母体の体重増加を評価するために毎週、ラットのダムを量る。 </li><li>飲みセッションを含むすべての回で食品や水道水を提供します。 </li><li>子孫が生まれているときエタノール曝露手続きを中止。出生時のライブ子犬と子犬の重みの数を記録します。生後0日として誕生の日を指定します。 </li><li>生後2-3約10匹にゴミを間引く。 Tを試みるO各リターの雌の動物のオスの等しい比率を維持。これが不可能な場合、男性および女性の等しくない数の10匹に間引く。 </li><li>レコード子犬の重み生後2-3日。 </li><li>同じ出生前処理条件から動物と同性のペアで約生後21-24と家で動物を離乳させる。潜在的なごみの効果を制限するための実験あたりの各ごみから複数の1-2ラットを使用しないでください。 </li></ol></li></ol> 2.社会的行動<ol><li>入手し、すべての必要な資機材を準備します。 <ol><li>社会的相互作用のための装置を得る。きれいにし、消毒するのは簡単です材料で構成され、オープントップでチャンバーを使用してください。装置の前面に撮影用の硬質透明プラスチック（〜2mmの厚さ）で覆われるべきである。洗浄および臭気制御を助けるために、透明なプラスチック（〜2mmの厚さ）に沿って内壁と床。バックインテリアWAに沿ってミラーを配置llは、分析を助けるため。 注：ここにカスタム室を報告した代表的なデータでは（95センチ×47センチメートルワイド×43センチメートル背の高い）オープントップと剛性透明プラスチック（厚さ2mm）インテリア側面を覆うと、装置の床を使用したと。ミラーは、後壁に沿って配置した。特定の寸法および材料は、しかし、それは寸法が本物の社会的相互作用は、他の挙動から区別することができることを確実にするのに十分に大きいことが推奨される社会的行動の測定のための重要なされていない。動物は、互いに近接して必ずしもないように、すなわち、装置が十分に大きくなければならない。 </li><li>すべての撮影が可視スペクトル内ほとんど、あるいは全く周囲の照明を用いて行われるように、低または無光条件下での記録が可能なビデオカメラを入手します。カメラは、そのネイティブで暗い条件の下で、しかし、記録することが可能な任意のカメラを赤外線スペクトル内の高解像度を持っていることを確認してくださいナイトモードまたは追加の赤外線照明器では十分なはずです。 </li><li>装置の周りに位置赤外線照明は、ビデオ記録における装置の照明を改善する。 </li><li>実験室グレードの木材チップ（アスペンチップ）を取得します。 </li><li>セッション及び臭気制御と装置のクリーニングブラシ、ちり取り、二酸化塩素及びイソプロピルアルコール（70％）を得た。 </li></ol></li><li>装置の順化と社会的行動<ol><li>実験のこの段階では、年齢の少なくとも90日である成体ラットで測定を行う。 </li><li>以前は各セッションに、すべての森チップを取り外し、セッションの間に臭いを制御し、新鮮な木材チップを提供するために、イソプロピルアルコールできれいな装置を拭く。木材チップが​​完全に装置の底部をカバーしていることを確認してください。清潔で、必要に応じて、そのような二酸化塩素のような適切な薬剤と装置を消毒する。 </li><li> 3日間連続に動物とそのケージメイトを配置装置に動物を順応さ30分間室。順化セッション中にすべての部屋のライトがオフになっている。 </li><li>第三の順化セッションハウスの最後に、動物を個別に新鮮な寝具、食料、および社会的相互作用をやる気にさせる24時間水を使用して新しいケージで。 </li><li>動物の後に次の日の24時間に録音社会的相互作用を分離した。 <ol><li>きれいな、装置からの木材チップを取り外し、二酸化塩素で消毒、臭いを制御するためにイソプロピルアルコールで拭いて、セッションの前に木材チップを交換してください。 </li><li>相互作用を記録するための位置1つ以上のカメラ。装置の前の位置にある少なくとも1つのカメラ装置の背面壁のミラーは、分析のために、追加の視点を提供することができるように。 </li><li>動物を一度に1を取得し、毛皮のパターンのユニークな機能が注目されるようにカメラの前で動物を保​​持する。これらの特定の特徴毛皮は、分析ではなく、人工的に動物のマーキングの間、ラットを区別するために使用することができる。 注：齧歯類社会的相互作用の多くの側面は、嗅覚シグナルを伴い、パートナーを嗅ぐ​​ので、可能な限り導入外国の臭いを避けるべきである。ロングエバンスラットは、典型的には、動物の任意のペアを区別するために利用することができる毛皮パターンのいくつかの特徴を有する。他の株（ 例えば 、SDラット）のために、このような無香料、色素と尾をマークするなどの代替的なアプローチを使用することができる。これは、関心のある多くの行動は具体的な目標に向けられていることを認識することが重要である（ 例えば 、肛門性器は尾の付け根、脇腹や腹に向け首筋、または積極的な攻撃に向け遊び心の攻撃の近くに指示スニッフィング）。遠く関心のこれらのターゲットから尾の先端に近い動物のマーキングすることをお勧めします。 </li><li>少なくとも12分間社会的相互作用の記録映像。</li><li>セッションを通して戦うために動物を監視します。可能であれば実験者はセッション中に部屋にならないように、モニターまたはウィンドウを経由して動物を見る。 注：ファイティングはまれにしか成体ラットを用いた研究で観察されていない、しかし、動物はセッションを通じて監視する必要があります。過度の戦闘があるか、動物への危害や損傷の兆候がある場合、セッションは中止されるべきである。 </li></ol></li></ol></li><li>行動コーディングと分析。 <ol><li> PAE 1,18で前の仕事に従って関心の次の行動を特定します。次の動作の最初の発生に期間、頻度および待ち時間を定量化。相手の体の、ボクシング​​、パートナー下/上で（交差点）をクロール、肛門性器スニッフィング、他のスニッフィング（ボディスニッフィング）（ピン止め含む）レスリング、木材チップに掘り/、（相手のグルーミング）をallogrooming飼育、およびスニッフィング。各動作の例は、例示されているこの記事のビデオコンポーネントでD。 </li><li>ビデオからの関心の社会的行動を定量化する。関心の各行動のための最初のインスタンスに周波数、合計時間と待ち時間を取得します。 注：これらの対策の取得を手動で達成することができ、しかし、デジタル化されたビデオのコンピュータ化された分析を使用して、これらの対策の定量化が推奨されます。ビデオや行動の定量化の再生のためのMatlab（www.mathworks.com）このスクリプトは、この記事の補足として提供されています。 </li><li>符号化は、全てのラットについて完了した後、得られた持続時間、周波数および待ち時間のデータは統計パッケージを用いて分析される。 </li></ol></li></ol>

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</ol>

著者には開示すべき利益相反はありません。

ここで説明する出生前のアルコール暴露パラダイムは、妊娠中のラットダムによるエタノールの自主的な消費を（5％v / v）を伴う。エタノール投与のタイミング、投与量、持続時間および経路に関してならびに研究中の種と異なり、文献に示される脳の発達中にエタノールに非ヒト動物を露出させるための多くのプロトコルが存在する。種々の露光プロトコルの利点の完全な治療がここで提供されていないが、PAEのための自主的な飲用方法のいくつかの利点が強調表示され、このプロトコルで説明。以前に我々は、ラットダム主要な食料源24の一部として、5％のエタノールを消費した流動食プロトコル、一般的に、研究のこの分野で用いられるアプローチを利用する。このアプローチのための制御条件は、カロリー摂取量がエタノールのかかるダムのように結ばれたペアフィード群及び随意アクセス権を持つグループが含まれる固形飼料。両群のラットダム（エタノール及びサッカリン）は栄養とカロリー摂取のグループの変動との間で減少し、なじみのない食料源の強制消費に伴うストレスの潜在的な交絡を最小限に同じラットの固形飼料を摂取ここで説明する自主的な飲みパラダイムで25。...

子供の推定1から5パーセントは、胎児性アルコール症候群（FAS）、部分的なFAS（PFAS）、およびアルコール関連神経発達障害（ARNDs）3、胎児性アルコールスペクトラム障害（FASDs）2、と診断されている。社会的行動と認知の赤字はFASDs 4-7の小児において観察された最も一般的な有害転帰の一つです。否定的な結果が重い出生前のアルコール暴露（PAE）に限定されないが、目立った形態学的にはつながらない適度なPAEとして、FASの行動および認知障害特性FASDs 8-10ヒトにおける、比較的微妙な、しかしそれにもかかわらず、永続的な障害を引き起こす可能性非ヒト動物は、脳の発達11中のエタノールに曝露した。適度なPAEの行動と対応する神経生物学的影響を理解することの重要性は、現在の見積りによって強調されるFASD症例の大多数は少ない秒内に収まることを示すスペクトル12のエヴェーレ範囲。 いくつかの独立した研究室は、社会的な刺激に、17,18の応答性の変化を積極的な相互作用を増加し、調査と相互作用1,13-15減の変更されたプレイ14,16,17を含む、脳の発達の間に露出をエタノールに関連する齧歯類社会的行動の変化を報告している19-21、そして社会的に獲得した食べ物の好みと社会的認識メモリ22の欠損。社会的行動の赤字が重い（血中エタノール濃度（BECは）〜300mgの/ DL）22,23またはエタノールのより緩やかなレベル（BECを〜80mgの/ DL）1、および他の重要なパラメータの幅広い以下の露出を観察されている行動測定時の露光タイミング、曝露期間、年齢などの要因。 これまでの研究では、社会的なint型の特定の側面でその変化を実証した成人期におけるeractionは1,18サッカリンに暴露された対照動物からのアルコールの適度なレベルに暴露されたラットを区別する。成人期に（相手のスニッフィング、 例えば ）具体的には、適度なPAEは一貫して積極的な行動の増加を示唆している、レスリングで堅牢な増加と関連している、と社会調査のより低いレベル。社会的行動の変化は、PAEの信頼性のある結果であるため、PAE以下の社会的行動の定量化は、社会的行動におけるPAE関連の変化の神経基盤のより完全な理解とインターベンショナルアプローチの開発に向けて進んための重要性を保持することができる。この論文と関連するビデオの目標は、中程度のPAEプロトコルと確実に区別出生前非露光ラットの子孫からアルコールに露出している大人の子孫における社会的行動の定量化のための方法に命令を提供することです。

<table><tbody><tr><td>サッカリンナトリウム塩水和物</td><td>シグマ</td><td>S1002</td><td></td></tr><tr><td>190プルーフエタノール</td>シ<td>グ</td><td>マ493538</td><td></td></tr><tr><td>ビーズガラス飲料チューブフィ</td><td>ッシャー14-955K</td><td></td><td></td></tr><tr><td>天然ゴムホワイト#4ストッパー1穴プラスチック</td><td></td><td>LSG4M181</td><td></td></tr><tr><td>1インチ曲げチューブ-ボールポイント</td><td>アンケア</td><td>TD-199-3"</td><td></td></tr><tr><td>紙定規</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td><a href="http://www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers">www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers</a></td></tr><tr><td>Apparatus for social interaction</td><td>カスタムビルト</td><td>N/A</td><td>95 cm X 47 cm X 43 cm</td></tr><tr><td>ビデオカメラ</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>低照度/無光条件を記録することが可能</td></tr><tr><td>赤外線イルミネーター</td><td>Vitek</td><td>VT-IR1-12</td><td></td></tr><tr><td>TekladラボグレードのサニチップスHarlan</td><td></td><td>7090A</td><td></td></tr><tr><td>ブラシとちりとり</td>N <td>/</td><td>A N / A</td><td></td></tr><tr><td>イソプロピルアルコール</td><td>シグマ</td><td>W292907</td><td></td></tr><tr><td>二酸化塩素(1.5 mg錠剤)</td><td>Quiplabs</td><td>N / A</td>メーカーの<td>推奨に従って準備</td></tr></tbody></table>

適度な出生前アルコール暴露と成体ラットにおける社会行動の定量化

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

社会的行動の変化は、胎児性アルコールスペクトラム障害(FASD)の子供たちに観察される主要な悪影響の一つです。いくつかの独立した研究所は、行動定量化時の幅広い曝露時間、タイミング、用量、および年齢にわたって、脳の発達中にアルコールに曝露されたげっ歯類の社会的行動の強力な変化を実証しています。この研究室の先行研究では、ラットの中程度の出生前アルコール曝露(PAE)後の特定の形態の社会的相互作用における信頼性の高い変化が、レスリングの増加や調査の減少など、成体期まで持続することが確認されています。これらの行動変化は、中等度のPAE1によって変化した神経回路を特定するのに役立ち、社会的行動におけるPAE関連変化の神経基盤のより完全な理解に向けて前進するために重要性を持つ可能性があります。本稿では、ラットの母ネズミが妊娠期間中、エタノールまたはサッカリンを自発的に摂取する中等度のPAEの実施手順と、成体児の社会的行動の測定について述べる。

多くの繁殖ラウンドの過程でエタノール状態の雌ラットは、一貫して4時間の飲み会あたりのエタノールの約2.1グラム/ kgの平均を飲む。ラットダムは45分の時点で測定された約60mg / dlのピーク母体血清中のエタノール濃度が、結果として、飲料チューブを導入した後の最初の15〜30分の間に4時間の合計の約半分を消費する。飲酒期間の残りの3.5時間かけて、それらは0.4グラム/ kg体重/時間の下限が、比較的安定した速度で、5％のエタノールを消費し続ける。自発的エタノール消費のこのレベルとパターンが母体の体重増加、子孫の出生時体重、産子数、妊産婦ケア、胎盤湿重量、行動試験での子孫の重量、または全脳、海馬や小脳湿重量に有意な効果を持っていません。 各行動測定aの男性saccharin-とエタノール曝露したラットからの代表的な手段とのSEM表1に示した再。これらのデータは、前の実験からプールし、それぞれの出生前処理条件のために16人の男性が含まれた。すべての動物は、同じ出生前処理条件からパートナーとペアにされた。雌の動物の社会的行動における堅牢なアルコール...

ここで提示されたプロトコルの目標は、出生前の脳の発達中にラットを中程度のレベルのアルコールにさらす手順を説明し、成人期の社会的行動の結果として生じる変化を定量化することです。

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several ...

成人ラットにおける中程度の出生前アルコール曝露と社会行動の定量化。このビデオでは、出生前アルコール曝露パラダイムと、それに続く成人期の社会行動の定量化について説明します。このビデオで説明されるすべての手順は、ニューメキシコ大学ヘルスサイエンスセンターおよびメインキャンパスの機関動物ケアおよび使用委員会によって承認されています。まず、体重が平均125から150 gで、週齢6から7週の成体雌ラットと、繁殖能力が確認された雄ラットの種ラットを用意します。通常は生後12週齢とし、動物が新しい飼育環境に慣れるために少なくとも1週間の順化期間を設けます。全体として、出生前アルコール曝露のタイムラインには、2週間の曝露前期間、動物がアルコールにアクセスできない交配期間、および妊娠期間全体を通じて行われる出生前曝露期間が含まれます。各段階の詳細は以下の通りです。妊娠前の飲酒量を評価するため、雌ラットにアルコール濃度を段階的に高めたサッカリン水を2週間にわたって任意摂取させます。この評価の目的は、飲酒プロトコルの後続フェーズにおいて、目的の飲酒量を示すラットを特定することです。また、アルコール曝露パラダイムのこの工程により、すべての雌ラットが妊娠前に飲酒を経験したことが保証されます。以下の備品を揃えて飲水チューブを準備します。サッカリンナトリウム塩、水和物、190 proof エタノール、ビーズガラス製飲水チューブ、天然ゴム製白色1孔番号4ストッパー、ボールポイント付き1インチ曲げチューブ、および紙製定規。水道水に溶解させた0.066%サッカリン水のストック溶液を調製します。この0.066%サッカリン水の一部を用いて、2.5%エタノールを含むサッカリンストック溶液を調製し、また別の分量を用いて5%エタノールを含むストック溶液を調製します。チューブに紙製の定規をテープで貼り付け、飲水チューブを準備します。その日の適切な溶液を、チューブの20 millimeterの目盛りまで満たします。各雌ラットのベースライン体重を必ず測定してください。飲水セッションは、暗サイクルの開始から1時間後に始まり、1日あたり4時間行われます。1日目と2日目に、雌マウスに0.066%サッカリン水を投与します。3日目と4日目には、2.5%エタノールを含むSAC溶液を投与します。5日目からは、5%エタノールを含むSAC溶液を投与し、5%エタノール溶液を用いた飲酒セッションを行います。妊娠前の飲酒フェーズが完了するまで継続します。すべての飲酒セッションにおいて、餌と水道水を提供します。4時間の飲酒セッションの終了時に、体重1kgあたりに消費されたエタノール溶液の重量を定量します。妊娠前の飲酒フェーズ終了後、グループ全体の平均エタノール摂取量と標準偏差を算出し、平均摂取量がグループ平均から1標準偏差以上高く、または低いラットを除外します。残りのラットを、サッカリン対照群または出生前エタノール曝露群のいずれかに割り当てます。妊娠前の飲酒レベルが可能な限り一致するように調整してください。これら2つの群について、各雌ラットを実績のある雄繁殖ラットとペアにします。繁殖期の間、雌ラットにアルコールを投与してはいけません。腟栓の確認により妊娠が確定したら、妊娠1日目から雌ラットとHauserを個別に計量します。群分けに従って、アルコール溶液またはサッカリン溶液を投与してください。1日4時間、飲水セッション中に餌と水道水へのアクセスを許可します。妊娠期間中、毎日この飲水セッションを継続してください。飲水量を毎日定量し、ラットの母獣の体重を毎週測定します。子が誕生した時点でアルコール曝露処置を終了します。誕生した日を出生後0日目と定義します。生後2日または3日頃に、1腹あたりの仔ラット数を10匹に調整し、体重を記録します。生後21日から24日頃に離乳させ、同じ出生前処理条件を受けた同性の動物とペアにして飼育します。腹効果（litter effect）による影響を抑えるため、1回の実験に使用するラットは1腹あたり1〜2匹までに制限してください。成人期における社会行動の定量化。必要なすべての材料および器具を準備する。長さ95 cm、幅47 cm、高さ43 cmの特製チャンバーを使用する。チャンバーは、洗浄と消毒が容易な複合プラスチック素材で構成されており、前面は透明なプラスチック製で、上部は開放されています。床面と側壁には、清掃を容易にするためにプラスチックが敷かれています。背面の内壁は、分析を補助するためにミラータイルで覆われています。追加で必要な資材には、低照度または無光条件下での録画が可能なビデオカメラが含まれます。理想的には、カメラは赤外線スペクトルにおいて高解像度である必要があり、装置の照明を改善するために装置の周囲に配置された赤外線照明装置を備えている必要があります。ビデオ録画用として、ラボグレードの砂チップ、セッション間に装置を清掃するためのブラシとちり取り、およびセッション間にラットの臭いを除去するための70% isopropyl alcoholを用意してください。成体での測定では、実験のこの段階を開始する時点でラットが少なくとも90日齢である必要があります。3日間連続して、動物とそのケージメイトを装置内に30分間入れて装置に慣らします。各セッションの前に、ウッドチップをすべて取り除きます。装置をイソプロピルアルコールで拭き取り、新しいウッドチップを補充します。また、適切な洗浄剤を使用して装置を洗浄・消毒してください。必要に応じて、装置の底面全体をウッドチップで覆ってください。順化セッション中、3回目のセッションの終了時に室内の照明をすべて消します。動物を新しいケージに個別に収容し、新しいウッドチップ、餌、および水を与えてください。動物を分離してから24時間後の翌日に、社会行動を評価するための社会的相互作用を記録します。まず、装置を清掃し、ウッドチップを交換することから始めてください。相互作用を記録するために、1台以上のカメラを設置します。当研究室では、個体を識別する方法として毛色のパターンの固有の特徴を利用していますが、個体標識の代替案については本文に記載されています。社会的相互作用の撮影が完了したら、当研究室で関心のある行動を特定します。パートナーに向けられた行動および環境に向けられたその他の行動を定量化しました。先行研究において、レスリングや、肛門・生殖器の嗅ぎ回りといった社会的探索のその他の指標、あるいはアログルーミングは、エタノール曝露動物と嚢内曝露動物を確実に区別してきました。以下のビデオクリップでは、関心のある各行動の例を示します。レスリングは、一方または両方の動物が相手に飛びかかろうとした際に発生し、多くの場合、ペアの一方がもう一方の動物を横向きまたは仰向けに押さえつける結果となります。レスリングの前にはしばしば追いかけっこが見られ、また、ボクシング、交差して潜り抜ける動作、および生殖器の嗅ぎ回りといった他の行動が先行することもあります。これらの行動の連続は、動物たちが離れた時に終了します。動物同士が完全に離れた後、すぐに再び組み合い（レスリング）を開始することがあります。この2回目の組み合いは、別の事例として記録します。組み合いはペアの両方の動物による参加が必要であるため、記録する際はペアに対して同等の評価を行う必要があります。また、どちらの個体が最終的に相手を抑え込んだか（ピン留めしたか）、あるいは抑え込まれたか、およびどちらの個体が追いかけや飛びかかりを行ったかを記録しておくとよいでしょう。また、レスリングの1回分（バウト）を構成する行動を個別にコーディングすることも有用かもしれません。ボクシングにおいてより詳細な分析が必要な場合は、両方の個体が後肢で立ち上がり、4つの足で互いに押し合う様子を確認してください。クロッシングオーバーまたはアンダーの行動において、一方の個体が意図的に相手の上に登るか、または下に潜り込みます。この行動の中で、一方の個体が相手の肛門生殖器領域を嗅ぎます。肛門生殖器の嗅覚探索の機能の一つは、個体識別です。ボディスニッフィングとは、パートナーの身体の他の部位を嗅ぐことを指し、多くの場合、パートナーの側面や脇腹に向けられます。アログルーミングとは、パートナーによるグルーミングのことです。グルーミングは通常、項（うなじ）や頭部付近に向けられます。立ち上がり（rearing）とは、動物が後肢で体を起こす動作を指します。同様に、床材を掘る動作（digging）や床材への嗅ぎ動作（sniffing）は、環境に向けられた一般的な行動であり、装置内で使用される基質に対する行動の指標となります。行動のコーディングおよび定量化には、当研究室で開発したカスタムMATLABプログラムを使用します。このプログラムの主な機能は、ビデオの可変速再生、各目的行動に対応したトグルボタン（オン・オフの状態が行動の有無を示す）、各行動の開始および終了時刻の自動タイムコーディング、およびデータの出力（各行動の総持続時間、頻度、初回出現までの潜伏期間を含む）です。すべての個体のコーディング完了後、得られた持続時間、頻度、および潜伏期間のデータを統計ソフトで分析します。ここに示す例では、組合い（wrestling）の頻度、持続時間、および初回出現までの潜伏期間、ならびに肛門生殖器嗅ぎ（anal genital sniffing）の持続時間が、サッカリン曝露群とエタノール曝露群の間で有意に異なっていることがわかります。その他の行動指標では、群間に差は認められませんでした。本ビデオで提示した手法は、出生前エタノール曝露後の社会行動分析プロセスを、簡便かつ効率的なプロトコルへと合理化したものです。このアプローチは、出生前発生期に中程度のレベルのエタノールに曝露されたラットと非曝露動物を区別するのに有用であるだけでなく、タイミング、用量、期間、および行動分析時の週齢などの条件を変更した他のエタノール曝露プロトコルの評価にも容易に適応させることが可能です。さらに、解析中に定量化される特定の行動は、発達のさまざまな段階におけるエタノール曝露の主要な影響を捉えられるよう調整することが可能です。

moderate-prenatal-alcohol-exposure-quantification-social-behavior

Research

JoVE Journal

Behavior

行動

エタノール誘発性発達損傷の分子機構を理解するために、我々は、エタノール暴露のゼブラフィッシュモデルを開発しており、エタノールの暴露後に発生する物理的な、携帯電話、および遺伝的変化を模索している...

胎児性アルコール暴露のゼブラフィッシュモデルの催奇形性変化を評価する

実験デザインは、ここでアポトーシスと胎児の脳内妊娠中神経ペプチドのアプリケーションでのアルコール曝露の影響を勉強に集中を提案した。育種から胎児の脳のコレクションへの詳細な説明が記載されている。アポトーシスを測定するための技術も詳細に説明する。...

C57BL / 6マウスにおける妊娠中のアルコール誘発性アポトーシスに対する神経栄養ペプチドの効果をテストするための実験方法、ADNF-9、

我々は、同時に6マウスのケージを収容し、容易に入手可能な材料を用いてアルコール蒸気室の構成を示す。我々はさらに、人間の妊娠のすべての3学期に相当胎児性アルコール暴露のマウスモデルでの使用を記載している。このパラダイムは、妊娠や出産後の日1月12日の間、動物を公開します。...

人間開発の3つのすべての学期の等価時にはアルコールにマウスを公開するために使用蒸気チェンバースの建設

複雑な環境における心血管運動と刺激的な経験は、げっ歯類の脳内の神経可塑性の複数のメジャーにプラスの利点を持っています。この記事では、車輪走行と環境の複雑さを組み合わせ、これらの介入の制限に対処します」superintervention」としてこれらの介入の実装について説明します。...

FASDの動物モデルにおける治療的介入としてホイールランニングと環境の複雑さ

トレース瞬目反射条件づけ (ECC) を用いて評価したラット海馬依存学習投与早期新生児の脳の発達の中にアルコールの高濃度 (11.9 %v/v)。一般的には、ECC...

胎児アルコール スペクトルの無秩序のモデルラットにおける海馬機能障害を評価するためにトレース瞬目反射条件づけの使用

この研究は、適切な暴露方法から胚処理およびエタノール分析へのヘッドスペースガスクロマトグラフィーを用いてゼブラフィッシュ胚のエタノールレベルを定量化するプロトコルを記述する。...

ヘッドスペースガスクロマトグラフィーを用いたゼブラフィッシュ胚におけるエタノール濃度の定量

ここに提示されているのは、アルコール使用障害を研究するためのマウスのアルコール依存症の2BC/CIEモデルのプロトコルです。...

アルコール使用障害をモデル化するための 2 本ボトルの選択と組み合わせた慢性間欠性エタノール蒸気曝露

現在のプロトコルの目標は、成魚のゼブラフィッシュの社会的選好アッセイを確立して使用するために必要な手順を概説し、エタノール誘発性の社会的欠陥を特徴付けるために使用できることを実証することです。...

ゼブラフィッシュの胎児アルコールスペクトラム障害をモデル化して、不利な胚環境が成体の社会行動に与える影響を特徴付ける

このプロトコルは、ラットのアルコール消費をモデル化するための標準的な断続的なアクセスの2ボトル選択家庭用ケージ飲用パラダイムを説明しています。さらに、飲酒行動の微細構造分析を可能にするDIYリック検出システムで標準プロトコルを補強するためのステップバイステップの指示を提供します。...

2本ボトル選択、ホームケージ飲酒、および微細構造解析を使用したげっ歯類のアルコール消費量のモデリング

法律上の制限が変わり、その結果、カンナビノイド製品の入手性が高まる中、特に妊娠中にこれらの曝露の影響を研究するモデルを開発することが非常に重要です。自発的な摂取による出生前中中程度のカンナビノイド曝露の前臨床モデルが開発され、より詳細な調査が可能になりました。...

神経発達転帰への影響を評価するための出生前の Δ-9-テトラヒドロカンナビノール曝露の前臨床モデル

学ぶラットの出生前アルコール暴露プロトコルと成体における社会行動の定量化手法。神経科学と行動科学の研究に応用可能で、発達障害の理解に貢献します。

適度な出生前アルコール暴露と成体ラットにおける社会行動の定量化

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