Name: 鶏卵卵におけるインフルエンザウイルスの伝播 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: 学ぶ 鶏卵を用いたインフルエンザウイルスAの大量培養法。無菌操作で卵にウイルスを接種し、アロントイ腔液を採取して高力価ウイルスを得る手法です。ワクチン開発やウイルス学研究に応用可能です。

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本研究は、NIH助成金HL120947(P.C.)、HL103868(P.C.)、およびAmerican Heart Associationの助成金(P.C.)によって支援されました。

注：総論：無菌条件下で卵の操作に関連するすべての手順を実行し、滅菌技術がそれに応じて使用する必要があります。使用前に70％エタノールを用いたプレクリーンなすべての機器。一般的には、インフルエンザウイルス接種および収穫はBSL-2の実験室で実施されるべきである。しかし、このプロトコルは、多くの病原性インフルエンザウイルス（ 例えば 、パンデミックおよびプレパンデミック株は、家禽および家畜への危険をもたらす菌株、高病原性鳥インフルエンザ株、1918 H1N1株）、高い生物学的安全性レベルを伝播するために使用された場合にいくつかのケースでは、バイオセキュリティの注意事項および権限が必要です。地元の機関バイオセーフティ委員会は、インフルエンザウイルスが関与するすべての研究を承認する必要があります。 接種のための卵の調製<ol><li>適切なベンダーからの血清病原体フリー（SPF）たての受精卵鳥類の卵を入手します。一般的に、ニワトリの卵が使用されます。卵は私たちでなければなりません到着後すぐにエド。 </li><li>定期的に卵を回転させる自動卵ターナー加湿卵のインキュベーターで到着地の卵時に。自動卵ターナーが使用できない場合は、手動で（手袋を着用し、できるだけ無菌のすべてを維持することを確認してください）​​は、少なくとも1日2〜3回卵を回転させる。 </li><li> 10〜11日間、37℃で55〜60％の湿度で卵をインキュベートする。 </li></ol> 2.検卵<ol><li>インキュベーションの約7〜8日後にキャンドリングによって不妊のための卵を確認するために、暗い部屋で明るい光に対して卵を検査するために卵キャンドラーを使用してください。 <ol><li> 70％エタノールで卵キャンドラーを拭きます。多くの場合、手袋を変更して病原体による汚染の危険性を最小限にするために70％エタノールで消毒する。 </li><li>インキュベーターから卵を取り出し、空の卵のカートンに配置します。 </li><li>部屋の照明をオフにします。 </li><li>キャンドラーに対して一度に各卵1の大端を持ってください。 </li><li>決定する際に、卵を守ってEそれは肥沃または不妊の場合は。 注：豆の形胚につながる細い血管がはっきりと見えるはずです。未受精卵は、目に見える卵黄の小さな血液スポットとして表示されます。 </li></ol></li><li>未受精卵である卵を破棄し、インキュベーターに実行可能な卵を返す。 30分以上のためのインキュベーターの外に卵を放置しないでください。卵の状態が確認できない場合は、それをマークし、後でそれを観察する。 </li></ol>ウイルス接種の調製<ol><li> 10 mMのHEPES（pHは7.4）を含有する滅菌PBS中で10 4 pfu / mlで-約10 3インフルエンザウイルスストックを希釈する。重要なステップ：使用直前にウイルスストックを希釈し、氷の上のすべての時間を希釈したウイルスを保つ。 </li></ol>尿膜経路を介し4.インフルエンザウイルス接種<ol><li>ウイルス接種（10日または11）の日には、再び卵をキャンドル、デッド胚を排除する。ライブ胚を区別する卵内部の動きを探して。 </li><li>インキュベーターから3卵を取り出し、気嚢を上にして別々のホルダーに卵を配置する。 </li><li>永久的なマーカーで卵のエアスペースをマークします。 </li><li> 70％エタノールで空気層の上に卵の殻を洗ってください。 </li><li>卵のカートンとバイオセーフティーフード（BSL-2）への空気のスペースを上にして卵を入れてください。 </li><li>各卵の気嚢上の殻に小さな穴をパンチするために無菌の18G針を使用してください。胚または卵黄を刺し避けるためにあまりにも深く針を挿入しないように注意してください。 </li><li>無菌の1mlシリンジに希釈したインフルエンザウイルスを策定し、22Gの針を取り付けます。 </li><li>尿膜腔に45°の角度で針で注射器を慎重に進める。 </li><li>希釈されたインフルエンザウイルスを0.2ml注入する。 </li><li>他の二つの卵を注射を繰り返し、その後、注射器と針を捨てる。 </li><li>グルーガンから接着剤の滴（または溶融パラフィンワックス）で穴をシール。 B電子接着剤が卵の中に漏れないように注意してください。 </li><li>エアスペースを上に指摘して卵のインキュベーターに卵をバックに配置します。 </li><li>すべての卵が接種されてきたまでは4.12 - を繰り返して、4.2を繰り返します。 </li></ol> 5.培養時間<ol><li> 37℃、〜60％の湿度で切らずに感染した卵をインキュベートする。 </li><li>インフルエンザウイルスの種類に応じて最適なインキュベーション時間を選択する。 48時間インフルエンザAをインキュベートする。 72時間インフルエンザBとCをインキュベートする。 </li></ol> 6.インフルエンザウイルスの収穫<ol><li>インキュベーション期間の後、胚を死滅させ、血液に感染した尿膜液を汚染する危険性を低減するために、血管を収縮するために4時間（またはO / N）の最小4℃で卵を冷やす。収量が減少したウイルスを、吸収するから赤血球を防ぐためにこれを行います。 -20℃で30分間、あるいは、冷却卵。しかし、これは血液汚染のリスクを増大させる。 </li><li>卵が十分に冷えたされた後に、バイオセーフティフードに卵を移す。気嚢が上を向くようにしてしっかりしたホルダーに卵を置きます。 70％エタノールで卵の表面を清掃してください。 </li><li>気嚢の上に卵の殻を開くために、無菌のハサミを使用してください。漿尿膜を破壊しないように注意しながら気嚢の周りにシェルを削除します。 </li><li>無菌の鈍鉗子で絨毛尿膜を開きます。そっと小さなへらやスプーンを持つ胚と卵黄嚢を脇に移動します。卵黄を破裂しないように注意してください。 </li><li> 1ミリリットルエッペンドルフピペットを用いて、慎重に尿膜液を集める。必要に応じて、できるだけ多くの液体を収集するためにビット側に卵を傾ける。 </li><li> 50ミリリットルプラスチック製コニカルチューブにすべての卵から尿膜液を組み合わせる。ウイルス収集中、常に氷上にチューブを保管してください。わずかに黄色がかった流体10mlの - One卵利回り5。 </li><li> 4で10分間千×gでウイルス含有尿膜液をスピン6; Cは破片をペレット化する。新しい50mlチューブに透明な流体を移送氷上に保持。 BSL-2廃棄物容器に卵を処分してください。 </li></ol> 7.ストレージ<ol><li>すぐに明らかになっ尿膜液（ 例えば、50、100または500 ulのアリコート）をアリコートし、スナップ凍結し、液体窒素中。凍結されたウイルスストックの長期保存のために-80℃の冷凍庫に転送します。 </li></ol>

<ol><li>Centers for Disease Control and Prevention (CDC). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+deaths+associated+with+seasonal+influenza+---+United+States%2C+1976-2007%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR.+Morbidity+and+mortality+weekly+report%22%5BJournal%5D)">Estimates of deaths associated with seasonal influenza --- United States, 1976-2007.</a> MMWR. Morbidity and mortality weekly report. 59 (33), 1057-1062 (2010).</li>
<li>Neumann, G., Noda, T., Kawaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+and+pandemic+potential+of+swine-origin+H1N1+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Emergence and pandemic potential of swine-origin H1N1 influenza virus.</a> Nature. 459 (7249), 931-939 (2009).</li>
<li>Tumpey, T. M., Garcia-Sastre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenicity+of+Influenza+Viruses+with+Genes+from+the+1918+Pandemic+Virus%3A+Functional+Roles+of+Alveolar+Macrophages+and+Neutrophils+in+Limiting+Virus+Replication+and+Mortality+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Pathogenicity of Influenza Viruses with Genes from the 1918 Pandemic Virus: Functional Roles of Alveolar Macrophages and Neutrophils in Limiting Virus Replication and Mortality in Mice.</a> J Virol. 79 (23), 14933-14944 (2005).</li>
<li>Doherty, P. C., Turner, S. J., Webby, R. G., Thomas, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+and+the+challenge+for+immunology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immu%22%5BJournal%5D)">Influenza and the challenge for immunology.</a> Nat Immu. 7 (5), 449-455 (2006).</li>
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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

インフルエンザは、疾患の大規模なグローバル負担が発生し、作業が肺損傷7の病因を理解することに継続する。この致命的な疾患で容易に研究し、種々の方法は、インフルエンザウイルス6を伝播するために開発されている。ここでは、鶏卵中でインフルエンザウイルスを製造する技術が記載されている。この方法の利点は、それが高度に再現可能であることであり、多くのインビトロ研究のために必要である高力価のインフルエンザウイルス株、大量になる。 ほとんどの研究室は、最小限の立ち​​上げ費用を迅速かつ簡単にこのプロトコルを開発することができるようになります。我々は自動ターナーと卵のインキュベーターに投資をお勧めしますが、このプロトコルは、そのような装置なしで完了することができますが、より面倒になります。我々はまた、卵の一貫性と無菌性を保証するために受精卵の購入のための商業研究のベンダーを使用することをお勧めします。 Laboratのオフィス実験動物の愛護管理と使用上の公衆衛生局（PHS）政策のORY動物福祉（OLAW）解釈はPHSポリシーは孵化後にのみ適...

インフルエンザAは、ヒトの健康に対する大きな脅威であり続けている。これは、大規模なグローバルな負担が世界中で毎年150万の死亡までの原因と潜在的に壊滅的な呼吸器疾患である。インフルエンザウイルスは、オルトミクソウイルス科にあり、それらのゲノム1,2- 8ネガティブセンス一本鎖RNAを運ぶ。ウイルスゲノムの高い可変性（ すなわち 、抗原性「ドリフト」）は、長期的な免疫を防ぐことができます。また、インフルエンザは、抗ウイルス薬3にますます抵抗性がある。 2009年新型インフルエンザのパンデミックは、インフルエンザ疾患（パンデミック株、抗ウイルス耐性、遅延ワクチン製造）に関連するすべての困難な問題を強調した。ワクチン製剤は最も可能性の高い病原性インフルエンザ株4（H1N1、H3N2およびB型インフルエンザ用に1つずつ）のために世界保健機関が毎年決定 ​​されます。この方法は、予測されたインフルエンザ株に基づいているのでsは、病原性株は時折間違って識別され、ワクチンの有効性は劇的に低下する。また、新型インフルエンザ株の出現はパンデミック病気2を引き起こすこれらの予防プログラムを回避することができます。 ユニバーサルインフルエンザワクチンの作成 ​​は5とらえどころのないされている。そのため、研究は肺損傷の病因の理解に続けなければならない。施設研究室の研究のために、いくつかの方法は、ウイルスの単離および増殖6のために開発されている。ヒトインフルエンザウイルスは、哺乳動物細胞、種々の基材に増幅することができる。しかし、大量に発生する高力価のウイルスは、最高の孵化卵内で達成される。以下のプロトコルは、インフルエンザのために既存のウイルスストックからのウイルスの伝播とストレージを技術が記載されている。

<table><tbody><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>Cellgro&nbsp;</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>無血清病原体(SPF)受精鶏卵&nbsp;</td><td>VALO BioMedia</td><td></td><td></td></tr>加<tr><td>湿卵インキュベーター&nbsp;</td><td>FARM iNNOVATORS</td><td>Model 2100</td><td></td></tr><tr><td>自動エッグターナー</td><td>FARM iNNOVATORS</td><td>Model 3200</td><td></td></tr><tr><td>エッグキャンドラー</td><td>FARM iNNOVATORS</td><td>Model 3300&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>1mlシリンジ</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>18Gニードル</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>20G/22Gニードル</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>305176/305156</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>エタノール>99.5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459844</td>水グルーガン<td>を使用して70%に希釈</td></tr> 「<tr><td>アドテック ハイテンプ」Project Pro」</td><td>アドテク、株式会社Adhesive Technologies.</td><td>1105</td><td></td>形</tr><tr><td>接着剤 「アドテク MINI SIZE・マルチテン」</td><td>株式会社アドテック 接着剤テクノロジーズ</td><td>220-34ZIP30</td><td></td></tr><tr><td>MDCK細胞</td><td>ATCC</td><td>CRL-2935</td><td></td></tr><tr><td>洗浄プール七面鳥赤血球、10%</td><td>Lampire生物学研究所</td><td>724908</td><td></td></tr></tbody></table>

鶏卵卵におけるインフルエンザウイルスの伝播

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

インフルエンザ感染は約36000人が死亡、米国では20万人以上の入院毎年と関連している。突然変異再類別による新しいインフルエンザウイルス株の連続的な出現は、ウイルスの制御を複雑にし、新規薬剤およびワクチンの永久的な開発を必要とする。インフルエンザの実験室ベースの研究では、ウイルスの増殖のための信頼性とコスト効果的な方法が必要です。ここで、総合的なプロトコルは、一貫して高い力価のウイルスストックをもたらす肥沃鶏卵におけるインフルエンザAウイルスの増殖のために提供される。 11日目 - 要するに、血清病原体フリー（SPF）ニワトリ受精卵を37℃、10 55〜60％の湿度でインキュベートする。この期間、胚発生を容易に卵キャンドラーを用いてモニターすることができる。ウイルス接種針を用いて、尿膜腔へのウイルスストックを注入することにより行われる。 37℃でのインキュベーションの2日後、卵は4℃で少なくとも4時間冷却した。気嚢と漿尿膜上卵殻を注意深く開かれ、ウイルスを含む尿膜液を採取する。流体は、遠心分離によってデブリからクリア等分し、長期保存のために-80°Cに転送される。大量（卵あたりウイルス液5-10）に溶解し、通常、このプロトコルを用いて達成される、高ウイルス力価は、ウイルス調製物のために大量に必要とするin vitro試験のために、特に我々の有利な方法は、卵の使用を行っているウイルスの同じウイルスストックの高用量が必要とされている。

複数の方法は、インフルエンザウイルスを滴定するために開発されている。適切な方法を選択する一つの考慮事項は、他の人が実行可能なビリオンを評価する感染性、（ 例えば 、プラークアッセイ）6に基づいているのに対し、いくつかは関係なく実行可能性（ 例えば 、赤血球凝集素アッセイ）の合計粒子を決定することである。ここでは、マウス適合インフルエンザウイルス（A / PR / 8/34）を接種した鶏卵から採取した尿膜液のウイルス力価はプラークアッセイ（ 図1）及び赤血球凝集アッセイ（ 図2）により決定した。 インフルエンザウイルス感染は細胞の単層上に形成するプラークを生じる細胞変性効果（溶解した細胞の輪帯）を引き起こす。プラークを、クリスタルバイオレットで細胞を染色して可視化し、そして65プラークは、ウイルスの10 -12希釈（ 図1）とよく中で計数した。希釈されたウイルスストックの500 Lのwので、細胞上に置かれ...

肥沃な鶏卵は、大量のヒトインフルエンザA型ウイルスを生産するために広く使用されており、ウイルスの高収量を証明するための便利で費用対効果の高いシステムを提供します。

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

この手順の全体的な目的は、費用対効果の高いシステムを用いて、高タイターのインフルエンザウイルスを大量に調製することです。まず、血清病原体のない新鮮な受精鶏卵を用意します。次に、アラン頭頂路（Alan Toic root）を介して、卵にインフルエンザウイルスを接種します。その後48時間後、ウイルスを含むAlan Toic液を回収し、ウイルスを液体窒素で急冷凍結させます。最終的に、プラークアッセイおよびヘマグルトニーションアッセイを行い、回収したAlan Toic液のウイルス力価の影響を判定することができます。回収工程は非常に繊細であり、卵の慎重な取り扱いと解剖学的構造に関する深い知識が求められるため、本手法の視覚的な実演が不可欠です。手順を開始する前に、適切な販売業者から病原体フリーの新鮮な受精鶏卵を入手します。卵が届いたらすぐに、自動転卵機能付きの加湿卵孵化器に入れ、37 °C、湿度55〜60%の条件下で10〜11日間、定期的に転卵させながら保持します。孵化から7〜8日後、70%エタノールで消毒した手袋を着用し、エッグキャンドラーをエタノールで拭き、卵をインキュベーターから空のエッグカートンに移します。次に、照明を消し、卵の太い方を一つずつキャンドラーに当てます。有精卵であれば、豆のような形の胚に向かう細い血管がはっきりと確認できるはずです。卵が未受精の場合、卵黄と共に小さな血斑が観察されます。未受精卵は廃棄し、生存している卵をインキュベーターに戻します。卵の状態が確認できない場合は、受精後10日目または11日目の後日観察用に印を付けておきます。使用直前に、インフルエンザAウイルスストックを、HIPPSを添加した滅菌PBSを用いて1×10³〜10⁴ PFU/mLに希釈し、氷上に置きます。その後、再度卵の検卵を行い、死んでいる不動の胚を除去します。次に、インキュベーターから3個の卵を取り出し、別のホルダーに配置します。気室を上に向けた状態で、油性マジックを用いて卵の気室部分に印を付けます。次に、気室（エアスペース）より上の領域を70% ethanolで洗浄し、BSL 2のバイオセーフティキャビネット内で卵を気室が上になるようにエッグカートンに移します。次に、滅菌した18ゲージの針を使用して、各卵の気室上の殻に小さな穴を開けます。この際、胚や卵黄を突き刺さないよう、針を深く挿入しすぎないように注意してください。次に、希釈したインフルエンザウイルスを滅菌済みの1 mLシリンジで吸い取ります。22ゲージの針を取り付け、1個目の卵の尿膜腔に45度の角度で慎重に針を刺します。希釈したウイルス0.2 mLを卵内に注入し、残り2個の卵にも同様に注入した後、シリンジと針を廃棄し、グルーガンを用いて各注入穴を接着剤の一滴で封止します。接着剤が卵の内部に漏れないように注意し、卵をインキュベーターに戻します。すべての卵に接種し終えた後、感染させた卵を37°C、湿度60%で、転卵せずに最適な期間インキュベートします。インキュベーション期間は、インフルエンザウイルスの型によって異なります。インキュベーション期間の終了後、胚を死滅させ、血管を収縮させるため、卵を4 °Cで最低4時間冷却します。卵が十分に冷却されたら、バイオセーフティフード内の固定ホルダーに移し、卵の表面を70% ethanolで洗浄します。次に、滅菌したハサミを使用して、1つ目の卵の気室上の卵殻を開きます。気室周囲の殻を取り除きます。この際、絨毛膜を傷つけないように注意してください。次に、滅菌した鈍端鉗子を用いて絨毛膜を開き、小さなスパチュラまたはスプーンで胚と卵黄嚢を慎重に脇に寄せます。この際、卵黄を破裂させないように注意してください。次に、1 mLのピペットを使用して、必要に応じて卵を横に傾けながら、可能な限り多くの羊水を注意深く回収します。各卵の採取により、5〜10 mLのわずかに黄色味を帯びた液体が得られるはずです。アランチック液を氷上の50 milliliterプラスチック製コニカルチューブに回収します。すべての液を回収後、遠心分離してウイルスを沈殿させ、上清を氷上の新しい50 milliliterチューブに移します。最後に、卵をBSL 2廃棄物容器に廃棄し、速やかに精製アランチック液を分注します。その後、液体窒素でウイルスを急速凍結し、凍結したストックを-80°Cのフリーザーに保管します。長期保存についてですが、インフルエンザウイルスの感染は細胞変性効果を引き起こし、細胞単層上に網目状の細胞領域またはプラークと呼ばれる円形の領域を形成します。本実験では、細胞をクリスタルバイオレットで染色することでプラークを可視化しました。500 µLの希釈ウイルスストックを細胞に接種したため、10⁻¹²倍希釈のウェルにおいて65個のプラークがカウントされました。本実験における最終タイターは 1.3 × 10¹⁴ PFU/mL でした。ヘマグルチニン分析（赤血球凝集試験）は、インフルエンザウイルスが赤血球の表面に付着する能力に基づいたウイルスタイター測定法です。観察されたように、ウイルス懸濁液が赤血球を凝集させるため、赤血球が懸濁液から沈降するのを防ぎます。ウイルスを2⁻¹⁰に希釈した50 µLにおいて、明らかに陰性の結果が観察されました。したがって、最終力価は2.1 × 10⁴ HAU/mLとなります。このビデオを視聴することで、鶏卵への接種によるインフルエンザウイルスの増殖方法と、ウイルスを含むアランティック液の回収方法について十分に理解できるはずです。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

プラスミドDNAからのインフルエンザウイルスの救助は、インフルエンザの研究者がインフルエンザウイルスの生物学のさまざまな側面を研究するために組換えウイルスを生成するために、そして潜在的なベクトルまたはワクチンとして使用することを可能にする基本的かつ本質的な実験的な手法です。...

プラスミドDNAの組換えインフルエンザウイルスの生成

インフルエンザウイルスとの同時感染は無症候性の中に侵襲性肺炎球菌疾患の誘導に関与する要因の一つです。...

の間に相乗効果を調査するために生物発光イメージングを使用して肺炎球菌幼児マウスで>とインフルエンザウイルス

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Propagation and Harvest of Influenza Virus from a Fertilized Chicken Egg

このビデオは、中和型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体のエスケープバリアントを生成する手法を示しています。抗体中和ウイルス懸濁液を胚のニワトリ卵に注入し、エスケープバリアントを選択的に増殖させます。これにより、ウイルス集団は主にエスケープ変異体となり、ヘマグルチン化アッセイによって確認されました。...

中和抗体に対するインフルエンザウイルスエスケープバリアントの作製

このビデオでは、寒冷適応型組換えインフルエンザウイルスを作成する方法を紹介しています。これには、ヒト細胞に双方向プラスミドをトランスフェクションした後、低温でインキュベーションして、暖かい条件下での複製が減少するという特徴を持つワクチン製造に適したウイルスを生成するというものです。...

ワクチン用の組換え弱毒生インフルエンザウイルスの作製

ニューカッスル病ウイルス（NDV）は広く、とりわけ、ワクチン接種および治療のための新たなベクターを開発するために、ここ数年で研究されてきた。これらの研究は、そのような私たちがここで説明しているようなcDNAから組換えウイルスを救出するための技術、することが可能となっている。...

cDNAからの組換えニューカッスル病ウイルスのレスキュー

ヒトインフルエンザAウイルスの全身および局所的なゼブラフィッシュ感染モデルが示されています。全身感染モデルを用いて、ゼブラフィッシュは抗ウイルス薬のスクリーニングに使用することができます。局所感染モデルを使用して、ゼブラフィッシュは宿主免疫細胞の応答を特徴付けるために使用できます。...

抗ウイルス薬をスクリーニングし、宿主の免疫細胞応答を特徴づけるために、ヒトインフルエンザAウイルス感染のゼブラフィッシュモデルを使用して、

ここでは、スポロゾアイトや第二世代メロゾサイトを核電化して、ニワトリエイメリア寄生虫の安定したトランスフェクションを実現する方法を提供しました。異種抗原遺伝子を発現する遺伝子組み換えアイメリアン寄生虫はワクチン送達剤として用いることができる。...

ニワトリエイメリア寄生虫の核形成と生体内伝播

この論文の全体的な目標は、ニワトリ胚への外因性物質の卵管細胞内注入 において...

オヴォで ニワトリ胚における血管内注射

ここでは、高力価組換えニューカッスル病ウイルスの生産、精製、および定量のための詳細な手順を提供します。このプロトコールは一貫して&gt;6×109 プラーク形成単位/ mLを産生し、 in vivo 動物実験に適したウイルス量を提供する。 インビボでの...

アラントイック液からの高力価組換えニューカッスル病ウイルスの生産

この方法は、ニワトリの胚を、細菌性病原体L.monocytogenesを生存可能だが培養不可能な(VBNC)状態から復活させるためのシンプルで費用対効果の高いin...

生存可能だが培養不可能な病原体を蘇生させる ためのIn vivo モデルとしてのニワトリ胚

学ぶ 鶏卵を用いたインフルエンザウイルスAの大量培養法。無菌操作で卵にウイルスを接種し、アロントイ腔液を採取して高力価ウイルスを得る手法です。ワクチン開発やウイルス学研究に応用可能です。

鶏卵卵におけるインフルエンザウイルスの伝播

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