Africanizedと欧州のハニーミツバチによって作らBeebreadで栄養素を比較するための方法及び体液タンパク質力価への影響

次の実験の全体的な目標は、2つのミツバチ亜種によって作られた花粉とミツバチのパンの栄養素を定量化し、タンパク質力価の消費量を測定することです。これは、ヨーロッパとアフリカのミツバチに同じ花粉源を限られたエリアに提示し、ミツバチが花粉をミツバチのパンとしてコロニーに保存できるようにすることによって達成されます。次に、ミツバチのパンは、ケージの中で新しく出現したヨーロッパとアフリカのミツバチに与えられます。

次に、ケージ内のミツバチを4日、7日、11日の給餌後にサンプリングし、各ケージに残っているミツバチのパンの量を測定して消費量を推定します。最後に、ヨーロッパとアフリカのミツバチが作った花粉とミツバチのパンに含まれるタンパク質やアミノ酸などの栄養素の濃度を測定し、ミツバチの人種間で比較します。その結果、ミツバチのパンは花粉とタンパク質と一部のアミノ酸濃度、血リンパタンパク質の力価が異なることが分かった。

この方法は、ミツバチの栄養学の研究における重要な疑問、例えば、ミツバチの栄養物に対する花粉源の役割や、それらの栄養素がさまざまな亜種のブレースや遺伝子型のミツバチによってどのように獲得されるかなど、答えるのに役立ちます。技術を実演するのは、私の研究室の学生技術者であるエミリー・ワトキンス・デ・ヤングです ミツバチのコロニーに花粉トラップを配置した後から始めて、花粉を収集し、コーヒーグラインダーを使用して花粉を微粉末に粉砕し、5つのコロニーを確立します、アフリカミツバチまたはHBとヨーロッパミツバチのそれぞれ、または閉鎖された飛行エリアまたはEFAにEHB、 そのため、ミツバチは提供された花粉のみで採餌し、働きバチがEHBとA HBのコロニー間を移動するのを防ぎます。ミツバチがそれらの間を横断できないように、EFAの各セクションに別々のセクションに分割し、3、500〜4、000人の労働者蜂ワックスコームと個々のEHBまたはHBコロニーを配置し、蜜蜂蜜、未熟なひな、および空のコームフィードグラウンド花粉をコロニーに櫛を配置しますEFAの各セクションにトレイを配置し、トレイに約60グラムの花粉を広げます。

このようにして、鍛造ミツバチは花粉をカリキュラムの負荷として収集し、ケージ内のミツバチに餌を与えるためのミツバチのパンとしてコロニーに保管できます。HBおよびEHBのコロニーからの密封された働きバチのひなのフレームを32から24°Cおよび40%の相対湿度に置かれる環境部屋の別々の出現のおりに置く。労働者が私たちの約24時間齢で出現すると、それは12のプレキシガラスバイオアッセイケージを確立し、新たに出現した100のEHBまたはHBの働きバチを各ケージに追加し、ヨーロッパのbbrまたはEBBまたはアフリカ化BパンまたはAB、B細胞のいずれかの既知の数で櫛のセクションを配置します各ケージに次の治療条件を生成します。

A B、BAB、EBBおよびEHBフェッド、EBBに供給されたHB供給ABBは、各ケージに水のバイアルと容量で調製された30%ショ糖溶液を追加します。11日間の学習期間中、砂糖シロップと水バイアルを毎日交換してください。

サンプル10は、新たに出現したEHBとA HBの労働者をケージに入れる前に。これらをデイゼロBと呼び、血リンパタンパク質濃度のベースラインとして役立ててください。10匹のミツバチをEBBまたはB、Bを4日間、7日間、および11日間食べた後、各ケージから取り出します。

生きたミツバチを個々のハヤブサチューブに置き、アイスパックにセットします。11日目にミツバチをサンプリングした後、血リンパタンパク質濃度の分析のために4匹のミツバチのサブサンプルを選択し、まだミツバチのパンが含まれている櫛細胞の数を数えます。各ケージの細胞から残りのミツバチのパンを取り出し、ケージごとに別々のマイクロ遠心チューブに保存します。

pH、可溶性タンパク質濃度、およびアミノ酸含有量について分析するまで、BBRサンプルを摂氏マイナス80度に保ちます。タンパク質分析を行うには、各ケージから花粉の6つのサンプルとEBBおよびA BBのサンプルを採取します。20ミリグラムの花粉またはbbrのいずれかを1ミリリットルの0.1モルPBSボルテックスと混合して10秒間混合し、571.2Gで1分間遠心分離します。

S上清の25マイクロリットルのサンプルを取り出し、96ウェル平底のE-I-A-R-I-Aポリスチレンプレートのウェルに入れます。各サンプルを3つのウェルに複製します。20マイクロリットルのキャピラリーチューブの端を加熱し、加熱された部分を針のような点が形成されるまで引っ張ります。

次に、各ケージから採取したミツバチから、毛細管を翼の取り付け点近くの胸部の右側部分に挿入して血リンパを採取します。必要に応じて、腹部ガイドの間の膜に同じチューブを挿入することにより、追加のリンパ液を採取します。0.1モルPBSの9マイクロリットルに1マイクロリットルの血リンパを追加します。

Bradfordタンパク質アッセイキットを使用し、製造元の指示に従って総可溶性タンパク質を測定します。これらのグラフに示されているように、テキストプロトコルに従ってアミノ酸分析を行う濃度は、pH値とタンパク質濃度の両方が花粉よりもbbrで低かった。ここで示すように、EHBとA HBの両方がEBBよりもA BBを多く消費しました。

A HBの血リンパ中の可溶性タンパク質のレベルは、摂取したbbrの種類に関係なく、EHBよりも有意に高かった。これらの血リンパタンパク質レベルの違いは、EHBとAHBが各タイプのbbrを同程度の量消費したにもかかわらず発生しました。ミツバチにとって必須であった10種類のアミノ酸のうち、花粉からはヒスタミン以外のすべてが検出された。

ほとんどの場合、ミツバチのパンで測定されたアミノ酸濃度は花粉よりも高かった。例えば、ロイシンとチオニンの濃度は花粉と比較してbbrで約60%高く、バリンの濃度は約25%高かった。アラニンアスパラギン酸グルタミンのレベルも、花粉よりもbbrの方が高かった。

アミノ酸濃度は、フェニルアラニンとシスチンを除いて、A、B、B、EBBの間で大きく異なることはありませんでした。フェニルアラニンのレベルは、EBBまたは花粉と比較して、A BBで約2倍高かった。EBBのシスチン濃度は、A、B、B、花粉に比べて低かった。

このビデオを見れば、ミツバチのパン、花粉、ミツバチの血リンパ中のタンパク質濃度を評価する方法についてよく理解できるはずです。これらの手法を使用すると、食品の貯蔵と消費、および血リンパタンパク質濃度が遺伝的要因または環境要因の影響を受けているかどうかを判断できます。