Protein Purification Technique that Allows Detection of Sumoylation and Ubiquitination of Budding Yeast Kinetochore Proteins Ndc10 and Ndc80

Kentaro Ohkuni; Yoshimitsu Takahashi; Munira A. Basrai

doi:10.3791/52482

出芽酵母動原体タンパク質Ndc10とNdc80のSUMO化とユビキチン化の検出を可能にするタンパク質の精製技術

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Protein Purification Technique that Allows Detection of Sumoylation and Ubiquitination of Budding Yeast Kinetochore Proteins Ndc10 and Ndc80

出芽酵母動原体タンパク質Ndc10とNdc80のSUMO化とユビキチン化の検出を可能にするタンパク質の精製技術

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12:28 min

May 3, 2015

DOI: 10.3791/52482-v

Kentaro Ohkuni¹, Yoshimitsu Takahashi¹, Munira A. Basrai¹

¹Genetics Branch, Center for Cancer Research,National Cancer Institute, National Institute of Health

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

この原稿は、出芽酵母サッカロミセス·セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）において、動原体タンパク質、Ndc10とNdc80のSUMO化とユビキチン化の検出について説明します。

この手順の全体的な目標は、出芽酵母の動的コアタンパク質であるNDC 10およびNDC 80のシミュレーションとユビキチン化を検出することです。これは、まず、SMT 3およびMTタグ付きNDC 10またはNDC 80を発現する酵母細胞を採取し、これらの細胞からタンパク質抽出物を作製することによって達成されます。第2のステップは、summationの検出のためのhissフラグタグ付きSMT 3コンジュゲートを精製するか、またはユビキチン化の検出のためのmik taggキネティックコアタンパク質を免疫沈殿させることです。

その後、ウェスタンブロット分析により、合計化またはユビキチン化が検出されます。最終的に、NDC 10およびNDC 80のラダーパターンの存在は、これらのタンパク質がシミュレートされ、ユビキチン化されていることを裏付けています。記載されているタンパク質精製法は、出芽酵母sacroにおけるconnicoタンパク質ND C 10およびNDC 80のシミュレーションとユビキチン化の両方を検出することを可能にする。

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