Isolation of Primary Human Colon Tumor Cells from Surgical Tissues and Culturing Them Directly on Soft Elastic Substrates for Traction Cytometry

M. Yakut Ali; Sandeep V. Anand; Krishnarao Tangella; Davendra Ramkumar; Taher A. Saif

doi:10.3791/52532

外科的組織からの初代ヒト結腸腫瘍細胞の単離およびトラクションサイトメトリーのためのソフト弾性基板...

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Isolation of Primary Human Colon Tumor Cells from Surgical Tissues and Culturing Them Directly on Soft Elastic Substrates for Traction Cytometry

外科的組織からの初代ヒト結腸腫瘍細胞の単離およびトラクションサイトメトリーのためのソフト弾性基板上にそれらを直接培養

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09:28 min

June 4, 2015

DOI: 10.3791/52532-v

M. Yakut Ali¹, Sandeep V. Anand¹, Krishnarao Tangella^2,3, Davendra Ramkumar^2,3, Taher A. Saif^1,4

¹Department of Mechanical Science and Engineering,University of Illinois at Urbana-Champaign, ²College of Medicine,University of Illinois at Urbana-Champaign, ³Provena Covenant Medical Centre, ⁴Micro and Nanotechnology Laboratory,University of Illinois at Urbana-Champaign

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

外科的結腸腫瘍および正常組織から初代ヒト細胞を抽出するためのプロトコルが説明されています。次に、単離された細胞を、細胞外マトリックスタンパク質によって機能化された軟質弾性基質(ポリアクリルアミドヒドロゲル)上で培養し、蛍光マイクロビーズを埋め込みます。トラクションサイトメトリーは、細胞の収縮ストレスを評価するために行われます。

この手順の全体的な目標は、正常組織だけでなく、外科用ヒト結腸腫瘍からも初代細胞を単離し、それらを異なる弾性を持つ基質上で直接培養して分析することです。これは、最初にヒト結腸腫瘍および正常領域から外科組織を採取することによって達成されます。次に、ミンチ組織の酵素的解離により、多数の単一細胞が生成されます。

最後のステップは、ナノスケール、蛍光ビーズ、およびポリスチレン皿に埋め込まれた軟質ポリアクリルアミドハイドロゲル上で単離された細胞を培養することです。最終的には、空間的な細胞牽引マップを得るためにトラクションサイトメトリーを行い、細胞骨格組織を可視化するために免疫蛍光顕微鏡法を行います。この技術の主な利点は、手術組織から単離された初代ヒト結腸細胞を、トラクションサイトメトリーおよび免疫蛍光顕微鏡アッセイで異なる剛性の基質上で直接培養できることです。

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