hiPSC神経系統を効率的に生成するCRISPRを使用して特定のノック記者/ Cas9とCas9ダブルニッカーゼシステム

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2015年5月28日

10.3791/52539-v

2015年5月28日

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* These authors contributed equally

CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas(CRISPR関連)システムなどのゲノム編集ツールは、ヒト人工多能性幹細胞(hiPSC)の遺伝子ターゲティング効率を大幅に向上させました。この原稿では、CRISPR/Casシステム支援相同組換えを使用して系統特異的なhiPSCレポーターを生成するためのプロトコルについて説明します。

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RNA T7

Chapters in this video

0:05

Title

1:54

Design of Targeting Vectors

2:41

Design and Vector Construction of sgRNAs for CRISPR/Cas9 System

5:20

Design and Construction of Cas9n Double Nickase sgRNA

8:06

Evaluation of sgRNAs by T7 Endonuclease1

11:03

In Silico Prediction of Potential Off Target Sites

12:32

Results: The T7E1 Assay is Used to Evaluate sgRNAs Prior to Transfecting hiPSCs

13:56

Conclusion

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