hiPSC神経系統を効率的に生成するCRISPRを使用して特定のノック記者/ Cas9とCas9ダブルニッカーゼシステム

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2015年5月28日

10.3791/52539-v

2015年5月28日

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CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas(CRISPR関連)システムなどのゲノム編集ツールは、ヒト人工多能性幹細胞(hiPSC)の遺伝子ターゲティング効率を大幅に向上させました。この原稿では、CRISPR/Casシステム支援相同組換えを使用して系統特異的なhiPSCレポーターを生成するためのプロトコルについて説明します。

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ノックインリポーターの作製

Chapters in this video

0:05

タイトル

1:54

ターゲティングベクターの設計

2:41

CRISPR/Cas9システム用sgRNAの設計およびベクター構築

5:20

Cas9nダブルニッカーゼ用sgRNAの設計および構築

8:06

T7エンドヌクレアーゼ1によるsgRNAの評価

11:03

潜在的なオフターゲット部位のインシリコ予測

12:32

結果:hiPSCへの導入前にT7E1アッセイを用いてsgRNAを評価する

13:56

結論

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