Name: 多変量慢性非麻酔下の録音のための短期的ヒツジ胎児の計測 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 40 s
Description: 学ぶヒツジ胎児の計測法。麻酔なしで長期生理モニタリングを行い、血管カテーテルと心電図ケーブルを埋め込む手術手順を解説。胎児発達と疾患状態の研究に有用なモデルです。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者は、Molly Towell Perinatal Research Foundation、Canadian Institutes of Health Research (CIHR)、Fonds de Recherche du Québec – Santé (FRQS) (to MGF) および CIHR-Quebec Training Network in Perinatal Research (QTNPR) (to LDD) からの資金援助に感謝します。
著者は、技術支援を提供してくださったEsther Simard、Marco Bosa、Carl Bernard、Carmen Movilaに感謝します。

動物のケアは、動物実験と動物実験のモントリオール大学評議会（プロトコル＃10-RECH-1560）による承認のカナダ人評議会のガイドラインに従いました。使用される材料及び方法の詳細については、表1に提供されます。 1.麻酔<ol><li>頸静脈にシングルルーメンカテーテルを挿入します。 </li><li>落ち着いた雌ヒツジ使用してアセプロマジン（Atravetを10mg / mL）を2 mgを静脈内に約30分今度はコルチゾールのレベルを低下させる手順に関連したストレスを軽減するために、麻酔導入前に。 </li><li>全身麻酔を誘導する（ジアゼパムを5mg / mL）を20 mgを、ケタミン（ケタラールを100mg / mL）を4-5ミリグラム/ kgおよびプロポフォール（プロポフォールを10mg / mL）0.5〜1ミリグラム/ kgの静脈内にジアゼパムを管理します。 </li><li>ウィスコンシン型ブレ​​ードで喉頭鏡を使用して気管に気道交換カテーテルを挿入挿管を補助する（エクストラロング350ミリメートルブレード左利き）。気道交換カテーテルオフと気管内にシリコン気管内チューブ（9〜12 mmの内径）をスライドさせます。この技術は、挿管プロセスを容易にします。気管の圧力誘起潰瘍を回避し、羊の頭にチューブを固定するために慎重に気管内チューブのカフを膨らませます。 </li><li>麻酔器の呼吸回路に気管内チューブを接続し、すぐに人工呼吸を開始します。 35〜45 mmHgでの正常範囲内で、P CO 2を維持するために、人工呼吸器の設定を調整します。 </li><li>耳介動脈にカテーテルを挿入します（22、G 20に、[0.9×25 mm]の1 [1.1×30ミリメートル]で1.16）と直接動脈血圧をモニターするために非準拠のチューブに接続します。 </li><li> 5分毎に心電図、直接動脈血圧、酸素飽和度（たSpO 2）、カプノグラフィー（P ET CO 2）、および温度を記録するためにマルチパラメータ生理学的モニターを使用してください。全てのpHを転送中央の生理学的データ収集コンピュータにシリアルケーブルを介してysiologicデータ。循環水ブランケットを使用して、通常の体温を維持します。 </li><li>全身麻酔の最初の1時間は10ミリリットル/ kgでバランスのとれたポリイオン溶液を投与し、その後、5 mLの/ kg /日hに減少します。 </li><li>直前に予防的抗菌薬として皮膚切開に羊にトリメトプリム - スルファドキシンの5mg / kgのIVを管理します。 </li><li>雌羊および胎児のすべての外科的操作で、標準的な無菌技術を使用してください。 </li><li>バリアナース常に雌羊。これは、非外科的な人員を含みます。これは。例えば、Q熱リケッチアのための流行の可能性を最小限に抑え、常に手袋とマスク（N-95型）を使用します。 </li></ol>手術手順の概要2。 <ol><li>腹部の筋損傷を最小限に抑えるために白線を介して乳房に直接頭蓋下腹壁20〜3cmの正中切開を行います。 <ol><li> R頭側大網をetractと子宮角を手動で触診されています。胎児の数とその大きさに気付いて、ホーンの先端に子宮体から各ホーンを触診。複数の胎児がある場合は、手動でヘッドの大きさと軌道の間の幅を評価することにより、より大きな胎児を選択します。 </li><li>しっかりと部分的に体外に子宮を介して選択された胎児の頭を保持します。 Metzenbaumはさみで大きな曲率に10cmの子宮切開を行います。それは手であるかのように滅菌生理食塩水で満たされた非ラテックス無菌手術用手袋の頭の上にすぐに入れてください。また、湿った胎児の頭部を保つために湿らせた四輪駆動車を使用しています。腹壁に子宮を固定します。 <ol><li>左右の胸部手足を体外に出すと剣状突起に子宮までのうち、静かに胎児を引き出します。 </li></ol></li><li>標準カットダウン技術を使用して、左右の上腕静脈と動脈にポリビニルカテーテルを挿入します。 anothを挿入胎児の胸骨にその &#39;末端を固定することにより羊水腔へのERポリビニルカテーテル。 <ol><li>滅菌カテーテルのみを使用してください。私たちはあなたの標準的な設備でガス滅菌をお勧めします。後で採血や圧力の監視を可能にするために二重のコックに針に各カテーテルと針を取り付けます。 </li></ol></li><li>心電図（ECG）を監視するために胸骨柄、剣状突起へと肩の各点に縫合ステンレス鋼電極。 </li><li>子宮に胎児を返します。左脇腹の小さな刺し切開を介したすべてのカテーテルと電極を終了。 </li><li> 3層の閉鎖を使用して開腹切開を閉じます。単純な連続的に合成吸収性モノフィラメント縫合糸USP 2と腹壁を縫合。単純な連続的に合成吸収性編組縫合糸USP 0で皮下スペースを閉じます。皮膚切開を閉じるために、外科用ステンレス鋼ステープルを使用してください。 </li></ol></li><lI&gt;手術手順の詳細な説明<ol><li> 4％のグルコン酸クロルヘキシジンと3分間、柔らかいブラシで十分その後腹側腹部乳腺に剣状突起を剃ることで、ブレード＃40クリーンで各側の脇腹の折り目に沿って羊毛を削除します。 <ol><li>グルコン酸クロルヘキシジンを標準無菌スクラブ4％腹部の中心から開始して3分間遠心やり方で進んで行ってください。消毒石鹸を除去するために、腹部に滅菌生理食塩水を注ぎます。外科手術の準備の最終段階では、グルコン酸クロルヘキシジン液2％イソプロピルアルコール70％の3別の通路を行います。 </li></ol></li><li>麻酔の深さは前切開に十分であることを確認してください。腹部の筋損傷を最小限に抑えるために白線を介して乳房にちょうど頭蓋に臍から標準開腹切開を行います。 </li><li>左腹壁アップに沿って腹部に長いスポンジ鉗子を挿入paracostal地域におけるカテーテルの計画出口部位へ。 <ol><li>アシスタントがそれを見つけて、適切なサイトを確認できるまで壁に鉗子の先端を押してください。わずかに開いた（1 cm）の鉗子の顎と、アシスタントを全層2センチメートル刺し切開を作ってみましょう。 </li><li>再び開いて、切開部を通して鉗子の先端を体外に出す、と静かに最後に腹側腹部の切開を通って腹部の外に引き出されているピンセットでカテーテルを把握します。注目すべきは、いくつかのグループは、カテーテルを移植し、それらを体外に出します。これはintrasurgical胎児ECG監視が不可能であるという欠点があります。 </li></ol></li><li>胎児の位置と数を決定するために子宮を触診。両耳間の距離を使用して最大の胎児を決定します。子葉を避け、ヘッドの背の上に大きな曲率の子宮壁を切開。 <ol><li>午前を得るために、胎盤膜を通って平滑末端カニューレを挿入出血から無料niotic流体サンプル。はさみを使用して、胎盤膜を切開。 </li></ol></li><li>この切開を通して胎児の頭蓋半分を体外に出します。正常体温を維持するのを助けるために胎児の頭の上に37℃での滅菌生理食塩水で満たされた無菌の非ラテックス手術用手袋を置きます。 <ol><li>子宮から胎児の上半身を除去する際に、アシスタントが羊水の損失を防ぐために、バブコックのアップを保持しています。その後、再びバブコック鉗子を使用して、羊水と腹部の汚染を防止するために、皮膚に胎児膜および子宮壁をクランプ。 </li><li>それぞれ、計装および子宮内部の残りの部分を維持するか、しっとりと温かい（37℃）滅菌布で覆われてする必要が胎児の体の部分だけを公開します。 </li></ol></li><li>上腕動脈への曝露を容易にし、二国間静脈には、両方の胸部手足を誘拐。前腕と介護の両方の内側面に沿って切開完全に上腕動脈と静脈の周りを解剖します。 </li><li>左右の上腕動脈と標準カットダウンの手法を用いて、静脈左上腕にポリビニルカテーテルを挿入します。 <ol><li> 1センチメートル以上の隣接組織からカテーテルを挿入する血管を解放します。編組合成吸収性USP 2-0縫合糸で血管の先端部を連結。容器の近位面での合字をPreplaceが、アンタイドそれを維持。 <ol><li> Castroviejoはさみを使用して、その直径の約30％に対して横方向に容器をカット。近位の縫合糸を引っ張ることによって部分的に血流を停止します。近位方向にカテーテルを挿入します。 </li></ol></li><li> 8センチメートル近位または抵抗が検出され、その後、少し引き戻しされるまでまでポリビニルカテーテルを挿入します。時間的に血管クランプを使用して、カテーテルの近位側面を固定します。近位およびカテーテルの遠位面の両方の周りに別の縫合糸を配置します。アシスタントは、継続的にASPですiratingとカテーテルの開通性を確保するためにカテーテルをフラッシュします。 </li><li>連続縫合パターンで、USP 2-0編組合成吸収性縫合糸を用いて、胎児の皮膚を閉じます。 </li></ol></li><li>右と左の肩、胸骨柄と剣状突起には、胎児心電図のモニタリングを容易にするために、絶縁されたステンレス製の電極を固定。 </li><li>胸骨に羊水の圧力とサンプリングカテーテルを縫合。このカテーテルは、その先端に開窓されます。 </li><li> USP 2-0編組合成吸収性縫合材料を使用して、胎児の背の上にすべてのカテーテルを固定します。 </li><li>胎児の交換の前に戻って子宮へ、低血圧を回避し、子宮弛緩を提供するために、15分かけてゆっくりクレンブテロール30μgのIVを管理します。 </li><li>連続的なパターンでUSP 4-0編組合成吸収性縫合糸材料を用いて、胎児膜を縫合糸。 CLOSに一度に1つのカテーテルや電極を組み込みますタイトな閉鎖を確実にするURE。 USP 0編組合成吸収性縫合材料を使用して、子宮筋層を閉じますハルステッド原則を尊重二層クッシングパターンを使用してください。慎重に外科的結び目を埋めます。 </li><li>巾着縫合パターンを使用して、彼らは左paracostal切開を終了するように、すべてのカテーテルおよびECGケーブルを固定します。 </li><li> USP 2モノフィラメント合成吸収性縫合糸材料を使用すると、連続パターンと白線を確保。 USP 2-0は、連続したパターンで合成吸収性縫合材料を使用して編まれた皮下組織を閉じます。外科用ステープルで皮膚層を固定します。 </li><li>羊膜腔に羊膜カテーテルを介して静脈内投与し、再びアンピシリン250mgのを管理します。温かい生理食塩水で失われた羊水を交換してください。 </li><li>無菌性を維持するために、場所の袋にすべての体外カテーテルおよびECG電極を配置します。 ANすべてのカテーテルを固定するために羊の胴周りメリヤスを配置羊の体にD電極。 </li><li>全身麻酔を停止し、喉頭反射が正常に戻った後に羊を抜管。 </li><li>彼女は全身麻酔以下の安定したら、代謝ケージに羊を返します。雌羊は、実験期間中の代謝ケージに存在します。雌羊は、立って横になると母を鎮静することなく、非麻酔の胎児を監視しながら自由に広告を食べることができるはずです。 </li><li>以下の3日間、雌ヒツジ（トリメトプリムスルファドキシンを5mg / kg）および胎児（アンピシリン250mgの静脈内投与し、再び羊膜カテーテルを介して）に予防的に抗生物質を投与します。 </li><li>血液ガス分析を用いて、雌羊と胎児の両方の代謝状態を評価します。 </li><li>可能なヘパリン添加生理食塩水の最小量を持つすべてのカテーテルをフラッシュします。注意 - ヘパリン及び胎児への許容流体の毎日の線量を超えないようにしてください。流体が胎児をオーバーロードすることが可能です。フラッシュゆっくり回抗生物質の予防的投与の後の行あたりの日〜5 mLの塩化ナトリウム。 </li></ol></li><li>データ記録と分析<ol><li>手術中、必要に応じて母体と胎児の心電図や心拍数など連続母体動脈血圧および気道圧力（ポウ）（ 図1）を記録 。心電図を除くすべての母方のデータを取得する生活ウィンドウモニタを使用してください。胎児および母体ECG信号と共に、アナログ - デジタル変換器にそれらのデータを供給する。 1901プリアンプに最初の母体と胎児の心電図を渡します。記録とメーカーのソフトウェアのすべてのデータを表示します。 </li><li> （すぐに最初の動脈カテーテルを挿入した後）と子宮を閉じた後胎児手術の開始時に動脈血ガス分析、乳酸、グルコースのための雌ヒツジおよび胎児から同時に1 mLの動脈サンプルを取り、（血漿中）過剰決意をベース。 </li><li>術後の回復時には、IL-6およびTNF-αinflammを測定するために3 mLの胎児の血液サンプルを取りますatoryプロファイル。遠心4℃（4分、4,000×gで）での血漿、その後のELISA試験のために-80℃で血漿をデカントし、保存します。 注：報告された代表的な結果のために、6日目、手術後、動物を20 mLのペントバルビタールナトリウムの静脈内注射を使用して屠殺しました。胎児の成長は体、脳、肝臓及び母体の重みにより評価しました。実験期間の長さは、明らかに特定の研究課題のために選択されたデザインに応じて変動するため、〜6週間に到達することができます。 </li></ol></li><li>サイトカイン分析（オプションのステップ） <ol><li>ヒツジ固有のサンドイッチELISAを使用して、血漿中のサイトカイン濃度（IL-6、TNF-α）を決定します。 O / Nで4℃でELISAプレート上の濃度を4μg/ mlのプレコートマウス抗ヒツジモノクローナル抗体（抗体はIL-6を捕捉する）、またはマウス抗ウシモノクローナル抗体（TNF-α）、3時間後に洗浄緩衝液（PBS中0.05％のTween 20、PBST）で洗浄しました。 </li><li>PBST中の1％BSAで1時間プレートをブロックします。洗浄緩衝液で3回プレートを洗浄します。 </li><li>連続希釈標準7 31.25のpg / mlでの標準的な1 2,000のng / mlでの範囲で準備し、ELISAの標準として組換え羊のタンパク質（IL-6、TNF-α）を使用します。 </li><li>ウェルあたりの負荷50段階希釈タンパク質スタンダードμlのサンプルを、室温で2時間インキュベート、プレートを3回洗浄します。二重にすべての標準液およびサンプルを実行します。 </li><li> 1の希釈でウサギ抗ヒツジポリクローナル抗体を50μlの（検出抗体IL-6）またはウサギ抗ウシポリクローナル抗体（TNF-α）を適用する：ウェル250と室温で30分間インキュベートします。洗浄バッファーで5回プレートを洗浄します。 </li><li> 30分間：（5000希釈1）コンジュゲートヤギ抗ウサギIgG-HRP50μlのを追加します。 </li><li>ウェルあたりTMB基質溶液50μlとインキュベートします。 </li><li> 2Nの硫酸25μlの所望の時間に発色反応を停止します。 </li><li> PL読みます570 nmの波長補正で450 nmでELISAプレートリーダー上のATE、。 注：我々のアッセイでは、IL-6 ELISAの感度は16 pg / mlであった、TNF-αELISAの感度は、それぞれ13.9 pg / mlでした。すべてのアッセイのために、分散のアッセイ内およびアッセイ間の係数はそれぞれ、&lt;5％および&lt;10％でした。 </li></ol></li><li>統計分析 注：正確な統計的手法が研究課題に依存します。ここでは、表2に報告された血液ガスの任意の有意差を試験するために使用される方法を報告します。 <ol><li>適切な多重比較のための調整とのパラメトリックまたはノンパラメトリック検定、続いコルモゴロフ - スミルノフ検定を使用して、通常のデータ配信をテスト。 </li><li>使用自発的に低酸素したコホートにおける胎児を特定し、それぞれのPO 2とO 2（土）の値が（フェタチーズとしてPO 2 &lt;20 mmHgのまたはO 2（土）&lt;55％を考慮して決定するためにクラスター分析をK-意味Lの低酸素症）。44-48 </li><li>分析のためにそのようなSPSSなどの統計ソフトウェアを使用してください。 </li><li>有意であると考えられてp &lt;0.05で統計的な差との平均±SDとして存在するデータ。 </li></ol></li></ol>

開示は行われていません。

慢性的に計装非麻酔下の胎児の羊：麻酔および手術の手順は、胎児の生理学と病態生理学を研究するための動物モデルを確立するために必要であることを提示しています。 プロトコル圏内の4つの重要なステップが強調されるべきです。まず、母体の脇腹を通ってカテーテルおよび電極を渡します。これは、任意の臓器損傷を避けるために、一度に行われることが重要です。第二に、胎児をexteriorizingする前uterotomy運営サイトの確保：これは防止または羊水および子宮閉鎖の前に羊膜のその後の縫合の損失を最小限にすることが重要です。第三に、動脈カテーテル法：胎児の羊の動脈は、約1〜2直径ミリメートルので、経験豊富な外科医のためにカテーテルを挿入することは困難ではありません。 2外科医のチームは、手順の全体の長さを最小限にするために時間を節約することができますこのタスクで最高かつ迅速に実行します。第四に、慎重秒uringと羊膜の中に胎児を返すと子宮を閉じる前に羊膜腔内のすべてのカテーテルおよび電極の組織：これは手術後による母体や胎児の動きにECG電極のカテーテルまたは引き裂きの引き上げ偶発回避するのに役立ち...

種々の動物モデルは、実験用げっ歯類、非ヒト霊長類、国内の反芻動物を含む正常と妥協妊娠、両方の研究のために存在する。1,2,3,4,5慢性的に計装妊娠羊のように50年のために広く使用されてきましたそのようなリポ多糖（LPS）などの病態生理学的刺激に対する人間の胎児の発育と応答のモデル。LPS暴露後6-10病変は、両種の同様の成熟プロフィールに起因するものである脳室周囲白質軟化症と早産児に見られる、まさに模倣します。 11、12 その他の妊娠合併症はまた、出産前グルココルチコイドは、肺の開発13-15と胎児16,17の子宮内発育制限（IUGR）の影響を理解を促進することが発見として非常に詳細に研究されています。 胎児ヒツジモデルの広範な使用は、uniqのが原因でありますカテーテルおよび電極の外科的配置およびメンテナンスに非麻酔下のヒツジ胎児のUE従順、反復採血、生体電気活動の記録、電気刺激の適用および in vivo脳イメージングにすることが可能となる。使用頻度の低いが、18テレメトリは、も可能ですまだ設定だけでなく、初期およびメンテナンスコストが高く洗練さに起因する。19 計測器の多くのバリエーションが関心のある施策に応じて可能であるためまた、胎児ヒツジモデルは、非常に汎用性があります。例えば、それは、数日から数週間にわたって記録することができるように胎児の呼吸の動き、電気的脳活動、心血管応答、心電図、臓器の範囲に局所血流に流量プローブまたはマイクロスフェアなどのおかげでの使用など、リアルタイムで多変量の信号この汎用性は、研究の広い範囲がカルディの開発などが行われていますovascularシステム20,21、視床下部-下垂体-副腎（HPA）軸22、特に24で脳の発達23とスリープ状態の開発、低酸素症の影響/仮死25、低体温療法26、炎症6-11、両方の27の組み合わせ、グルココルチコイド28,29、抗うつ30、気管支肺異形成症（BPD）31,32、前と分娩時の名前が、胎児プログラミング33,34,35,36,37,38,39又は新規胎児監視モダリティの開発調査のいくつかの領域。40,41,42,43 提示された方法の全体的な目標は、この汎用性の高いモデルの基本的な実装を示すことです。これは、急性および慢性実験統合的に胎児の生理学と病態生理学を研究プロトコル、臓器、細胞および分子レベルの多種多様を確立することができます。

<table><tbody><tr><td>ACE光源</td><td>ショットフォステック</td><td>A20500</td><td></td></tr>解<tr><td>剖はさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14060 - 11</td><td></td></tr><tr><td>角度付き解剖ハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15006 - 09</td><td></td></tr>メス<tr><td>ハンドル</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>10003 - 12</td><td>交互解剖ツール</td></tr><tr><td>湾曲メスブレード#12</td>ファイン<td>サイエンスツール</td><td>10012 -00</td><td>交互解剖ツール</td></tr><tr><td>骨はさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>16044 - 10</td><td></td></tr><tr><td>S &T縫合タイイング鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>00272-13</td><td></td></tr>デュ<tr><td>モンSS鉗子-角度付き</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11203-25&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>編組絹縫合サイズ 6-0</td><td>テレフレックスメディカル</td><td>07 - 30&nbsp; - 10</td><td></td></tr><tr><td>医療用テープ</td><td>トランスポア</td><td>3M</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン塩酸塩 100 mg/ml</td><td>ホスピーラ</td><td>NDC 0409 - 2051 - 05</td><td>ファイナル ド 80 mg/kg</td></tr><tr><td>トランキ ヴェド インジェクション (キシラジン 100 mg/ml)</td> <td>ベクド</td><td>NDC 50989 - 234 - 11</td><td>ファイナル ド 10 mg/kg</td></tr><tr><td>反応性オレンジ 14</td><td>シグマ - Aldrich</td><td>R - 8254</td><td></td></tr><tr><td>リンガーズ 溶液成分</td><td></td><td></td><td>溶液は、95% O2 と 5% Co2 で平衡化されたガスで、最終 pH 7.4</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>シグマ - Aldrich</td><td>S7653</td><td>最終濃度: 118 mM</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>P217 - 3</td><td>最終濃度: 4.7 mM</td></tr><tr><td>塩化カルシウム二水和物</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>C79 -500</td><td>最終濃度: 2.5 mM</td></tr><tr><td>リン酸カリウム 一塩基性</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>P -285</td><td>最終濃度: 1.2 mM</td></tr><tr><td>硫酸マグネシウム</td><td>J.T. ベイカー</td><td>Jan-00</td><td>最終濃度: 0.57 mM</td></tr><tr><td>4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-エタンスルホン酸 (HEPES)</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>BP 310 - 500</td><td>最終濃度: 5.95 g/L</td></tr><tr><td>グルコース</td><td>シグマ -Aldrich</td><td>G8270</td><td>最終濃度: 5.5 mM</td></tr><tr><td>LifeWindow</td><td>Digicare Biomedical Technology</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CED バイオアンプおよび ADC ユニット</td><td>Cambridge Electronic Design Limited, Unit 4, Science Park, Milton Road, Cambridge CB4 0FE ENGLAND.</td><td>バイオアンプ:1902;ADC:マイクロ1401;データ収集ソフトウェア: Spike 2, V7.13</td><td></td></tr><tr><td>Neurolog アナログ信号バイオアンプ</td><td>Digitimer Ltd 37 Hydeway Welwyn Garden City Hertfordshire, AL7 3BE, England</td><td>NL108A</td><td></td></tr><tr><td>ABL800Flex</td><td>Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5804R</td><td>Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2 Mississauga, Ontario, L5N 8L2</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Arrow Jugular Catheterization Set</td><td>Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atravet</td><td></td><td></td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>ジアゼパム</td><td></td><td></td><td>5 mg/ml</td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>ケタラー</td><td></td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>プロポフォール</td><td></td><td></td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>SurgiVeT</td><td>気管内チューブ;Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cook Airway Exchange Catheter with RAPI-FIT Adapters</td><td>Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dispomed Ventilator</td><td>Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte-W</td><td>Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 USA</td><td></td><td>22から20 g;1インチ [0.9 x 25 mm] から 1.16 インチ [1.1 x 30 mm]</td></tr><tr><td>エドワーズライフサイエンス Ref: PX272 圧力監視キット TruWave 使い捨て圧力</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LifeWindow LW6000</td><td>Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gaymar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Babcock</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polyvinyl catheters</td><td>SCI(サイエンティフィック・コモディティーズ・インク)</td><td></td><td>2メートル</td></tr><tr><td>2-0 Vicryl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo はさみ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>心電図 (ECG)</td><td>LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, ベルリン, ドイツ</td><td></td><td>1 つのシースに 4 つの銅電極、2 メートル</td></tr><tr><td>2-O Vicryl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-0 Vicryl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDS II USP</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>トリメトプリムスルファドキシン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アンピシリン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ストップコ</td><td>ックアルゴンメディカル、猫&nbsp;041220001A</td><td></td><td>男性ルアーロック付きダブル 4 ウェイ ストップコック</td></tr><tr><td>ニードル</td><td>タイコ ヘルスケア 8881202389</td><td></td><td>Monoject アルミニウム ハブ 鈍針、22Gx、0.7mmx 38.1mm: 胎児動脈および静脈カテーテル用</td></tr><tr><td>ニードル</td><td>Tyco Healthcare 8881202322</td><td></td><td>Monoject アルミニウム ハブ 鈍針、16Gx、1.6mmx38.1mm: 羊水カテーテル用</td></tr></tbody></table>

多変量慢性非麻酔下の録音のための短期的ヒツジ胎児の計測

Instrumentation of Near-term Fetal Sheep for Multivariate Chronic Non-anesthetized Recordings

慢性的に装着された妊娠中の羊は、人間の胎児の発育と、エンドトキシン、細菌、臍帯閉塞、低酸素症、およびさまざまな薬理学的治療などの病態生理学的刺激に対する反応のモデルとして使用されてきました。早産のリスクがある胎児におけるグルココルチコイド治療の命を救う臨床実践と、治療的低体温療法がこのモデルで開発されました。これは、麻酔をかけられていない胎児のヒツジがカテーテルや電極の外科的配置とメンテナンスを行うことで、採血、物質注射、生体電気活性の記録、電気刺激の適用、in vivo臓器イメージングが可能になるというユニークな特徴によるものです。ここでは、血ガス、代謝、炎症の観点からの術後回復の特性評価を含む、安定した慢性的に器具化された非麻酔科の胎児ヒツジモデルを達成するために必要な外科的器具手順について説明します。

38妊娠中の時間日付雌ヒツジは、（一般的な麻酔下で無菌技術を用いて、動脈、静脈および羊膜カテーテルおよび心電図（ECG）電極を用いて妊娠の128±2日（DGA、〜0.88妊娠、用語145 DGA）で雌羊と胎児の両方をインストルメントされました）。双子妊娠の場合には、より大きな胎児は触診と異時点間の直径の推定に基づいて選択されまし​​た。代わりに、インストルメントされる胎児の潜在的な偏りを回避するためにランダムに選択してもよいし、両方の胎児は、計測することができます。手順の合計時間は124±27分でした。インストルメントされる胎児の上半身の一部が92±19分間子宮の外に残りました。インストルメント雌ヒツジのほとんどがF2動物でした。彼らのダムは、F1（ボーダーレスター*ロマノフ）だったと種雄ハンプシャー州ラムでした。 - ボーダーレスター（25％） - ロマノフ（25％）= HABLRVハンプシャー（50​​％）を次のように彼らは交配しました。 代表母体と胎児の生理手術および計測時の特性は、図1に示されており、麻酔中の胎児と母性行動の妊娠期間のため...

それは外科的配置およびカテーテルおよび電極、反復採血、物質の注入、生体電気活動の記録の維持、およびin vivoイメージングでを許可するため、慢性的に計装非麻酔下の胎児ヒツジモデルは、健康と病気におけるヒト胎児発達を研究するために使用されます。我々は、このモデルを確立するために必要な手順について説明します。

The chronically instrumented pregnant sheep has been used as a model of human fetal development and responses to pathophysiologic stimuli such as ...

本手順の全体的な目的は、生理学的摂動に対する長期的な生理学的モニタリングを行うためのOV胎児への計器装着について記述することです。この研究モデルにより、非麻酔下の胎内胎児において、血管アクセス、心電図およびその他の生体電気モニタリングが可能になります。これにより、血管閉塞や前炎症性メディエーターの注入などの生理学的摂動中に起こる変化についての知見が得られます。このモデルは、健康状態および疾患状態における胎児の発達を理解する上で臨床的に重要です。ここに示すすべての動物実験手順は、モントリール大学の動物使用倫理委員会の承認を得ており、カナダ動物ケア評議会（Canadian Council for Animal Care）が定めたガイドラインに従って実施されました。本実験は非生存実験です。ここに記載した麻酔プロトコルは、炎症反応への影響を最小限に抑えています。少量のプロポフォールを投与することで喉頭反射が抑制され、挿管が容易になります。麻酔期間中は、マルチパラメータ生体情報モニタを使用します。測定されたすべての母体生理学的パラメータをここで確認できます。心電図、直接動脈血圧、気道圧、パルスオキシメトリ、カプノグラフィ、呼気麻酔薬濃度、体温、および動脈血ガス分析を、母体モニターからCambridge electronic designデータ収集装置に接続します。特製のインターフェースケーブルを使用することで、母体と胎児の生理学的データを同期して表示することが可能です。子宮の腹部は、標準的な無菌操作を用いて準備します。挿入した血管カテーテルとECGケーブルが手術前および手術中にスムーズに退出できるよう、U字型の台をわずかに右側に傾けます。麻酔の深さは、眼球の位置、掌底反射、下顎の緊張、および外科的刺激への反応などの神経学的反射を用いて評価します。スカルペルを用いて正中切開を行います。本研究で用いた止血法は、血管の結紮または単純圧迫のいずれかである。正中皮下腹静脈を結紮する。直線的な肘の部分が明確に確認できるまで、皮下脂肪を鋭的に剥離する。臍部で直線的に慎重に切開します。次に、この小さな切開口から指を挿入し、切開直下に癒着や重要構造物がないことを確認します。切開時にnason brown鉗子のハンドルを使用することで、メス刃の切削端を保護し、下層の解剖学的構造を保護することができます。まず、子宮を触診して子宮角の2つの角を確認し、胎児の数を確認します。三つ子の可能性もありますが、その場合、処置を正常に完了できる確率は低くなります。したがって、三つ子への使用は推奨しません。腹部への血管カテーテルおよびECGケーブルの挿入を可能にするため、腹部まで戻した口間距離に基づき、最大サイズの胎児を選択します。腹壁に沿って腹腔の左側へスポンジ鉗子を挿入し、左側腹部まで押し上げます。この鉗子の上の部位に小さな切開を加えます。その後、血管カテーテルとECGケーブルをこの切開口から通し、腹部の切開部から外へ出します。手術の残りの工程を開始する前に、すべての血管カテーテルとECGケーブルが揃っていることを確認することが重要です。胎児の頭部を体外に露出させ、凝血塊のない子宮領域を確保します。大弯に沿ってリード線を配置します。まず、メスを用いて小さな切開を行います。その後、羊膜を傷つけないよう注意しながら、ハサミを用いて胎児の頭部にかけて切開を広げ、損傷のリスクを最小限に抑えます。血液による混入を最小限にするため、羊膜を開く前に、先端が鈍いカテーテルを用いて羊水を採取します。このサンプルは、炎症性変化の有無を検出するために使用できます。胎児の頭部を胎膜から取り出し、直ちに手術用手袋の中に入れます。手袋に温水を満たし、正常体温を維持させます。羊水の流出および手術操作による胎盤への損傷を軽減するため、 Babcock鉗子を胎膜、子宮、および皮膚に装着します。滅菌ドレープを用いて手術部位を隔離します。胎児への器具挿入の最初のステップは、動脈カテーテルの挿入です。上腕骨の内側に沿って切開を行います。上腕骨の中点において、筋腹の間から上腕動脈を鈍的に剥離します。次に、吸収性縫合糸のループを動脈の下に通します。その後、ループを切断し、2本の縫合糸を動脈の両端まで引きます。動脈の遠位端を結紮します。近位端にループを作り、動脈に牽引をかけることで、RS剪刀を用いて動脈に小さな切開を加えやすくします。その後、鉗子を用いてマイクロ医療グレードのビニールカテーテルを動脈内に挿入します。鉗子の代わりとして、血管拡張器を使用する方法があります。血管拡張器の先端を切開部に挿入することで、カテーテルの挿入を容易にします。カテーテルにある目盛りを確認することで、適切な長さまでカテーテルが挿入されているかを確認できます。血液の漏出を防ぐため、近位結紮部と挿入部位の間のカテーテルに血管クランプを装着します。次に、近位結紮部で血管とカテーテルを固定します。これで血管クランプを取り外すことができます。近位側に2本目の結紮糸を配置します。遠位側の結紮糸の自由端をカテーテルに固定します。この全工程において、助手はカテーテルの開通性を確保し、結紮糸がカテーテルを強く締め付けすぎていないことを確認するため、継続的に吸引とフラッシングを行います。胎児の体液過剰負荷を避けるため、注入する生理食塩水の量を最小限に抑えることが重要です。次に、胎児の健康状態を評価するために、胎児血ガス分析を行うことができます。静脈カテーテルは、全く同様の手法で留置することが可能です。頭側静脈を切開部の近位側に特定します。2本の結紮糸を用いて静脈を固定します。近位側の結紮糸は、カテーテルを静脈に挿入するまで結ばないでください。再び、ハサミを用いて血管に小さな穴を開けます。カテーテルを挿入し、挿入点の近位および遠位の両方で固定します。これらの血管カテーテルの正確な留置場所は、研究モデルの必要性および調査対象となる臓器によって異なります。静脈カテーテルと動脈カテーテルの両方を、同一の切開部位から出します。その後、皮膚の切開部を単層の単純連続縫合で閉鎖します。脚を屈曲させることができるよう、カテーテルを前腕のさまざまな箇所に固定します。通常の位置では、カテーテルを肩に、次いで肩甲骨の間に装着します。予備の動脈血圧測定および術後の動脈血サンプリングを可能にするため、対側に2本目の動脈カテーテルを留置します。16ゲージの針を皮下に通過させ、4本の心電図ケーブルを装着します。ワイヤーの被覆が剥がされた部分に注目してください。この部分は最終的に皮下に配置され、ワイヤーは針の刃先から挿入されます。針を抜くことで、ワイヤーが皮下に残ります。2つの正方形結び（スクエアノット）を用いてワイヤーを固定します。続いて、各結び目にシアノアクリレート接着剤を塗布します。各肩関節、胸骨柄、および剣状突起にケーブルを配置します。胎児を子宮に戻す前に、子宮内圧の測定および羊水の繰り返しサンプリングを可能にするため、胸骨に窓付きカテーテルを装着します。30 µgのクレンブテロール（β2刺激薬）をゆっくりと静脈内投与し、子宮を弛緩させます。クレンブテロールはまた、子宮の操作による腹部不快感の軽減にも寄与します。4本の肢を慎重に子宮内に戻します。あるいは、血管カテーテルとECGケーブルを頸部の背側に通し、手術中はずっと皮膚で縫合固定します。露出した組織の乾燥を防ぎ、胎児の体温を維持するために、温かい生理食塩水で胎児を浸しておくことが重要です。最後に手術用手袋を外して、頭部を子宮内に戻します。子宮の閉鎖を開始します。まず、子宮切開部からバブコッククランプを取り除きます。4-0サイズの合成多フィラメント吸収性縫合糸を用い、単純連続縫合にて胎膜を閉鎖します。各カテーテルとECGケーブルは、それぞれ個別に閉鎖部に組み込まれます。これにより、より密な閉鎖が可能となり、漏出を防ぎます。血清筋組織の二層閉鎖は、Oサイズの合成多フィラメント吸収性縫合糸を用い、クッシング縫合（Cushing suture）法にて行います。この反転縫合パターンにより、癒着の形成と漏出を最小限に抑えることができます。繰り返しになりますが、カテーテルとECGケーブルは、閉鎖とは別に組み込まれます。子宮を閉じた後、失われた羊水を補充するために、羊水カテーテルを介して生理食塩水を子宮内に注入します。手術中。その後、子宮の閉鎖部位を大網で被覆します。線状の切開部は、ポリダイオン縫合糸を用いて閉鎖します。単純な連続縫合が用いられます。図に示すように、針を通すたびに腹直筋鞘を確実に含めることが重要です。ここでは、外科医が線状の肘部を2段階で閉鎖する方法を選択しています。皮下組織の閉鎖には、単純連続縫合も用いられます。この段階で、助手は左側腹部から出ている血管カテーテルとECGケーブルの周囲に、巾着縫合を施します。皮膚の閉鎖にはスキンステープラーを使用し、閉鎖時間を短縮させます。外科的創傷部位を洗浄し、非閉塞性の包帯を貼付します。また、個体の胴体にストックネット包帯を巻きます。術後1時間以内に、個体は歩き回り、落ち着いた好奇心旺盛な様子で再び食事を摂り始めます。この手術期間を通じて、ブプレノルフィンによる鎮痛療法が行われます。母体生理学的パラメータは、マルチパラメータ生理学的モニターを用いて記録されました。母体のECGおよび気道圧は、Cambridge electronic designモニターに接続する専用ケーブルを使用して、胎児の生理学的データと同期されました。これらのデータから、胎児および母体の心拍変動を導き出すことができます。ここで取得した生理学的データの例を示します。母体と胎児の健康状態を確認するため、手術中および術後の所定の時点で、母体と胎児の動脈血ガスサンプルをペアで採取しました。これらの結果に基づき、母体と胎児の両方で十分な換気と灌流が確保されるよう、人工呼吸器の設定、輸液療法、およびドブタミン投与速度をすべて調整し、鼻腔酸素療法を実施しました。Uの抜管後、輸液療法を継続した。酸塩基平衡または電解質異常が検出された場合、胎児に認められた一過性の軽度代謝性アシドーシスの原因は、緩徐な麻酔の使用に伴う子宮血流の減少によるものであるという仮説を立てた。結果に関する詳細については、論文をご参照ください。要約すると、本モデルでは、2本の動脈カテーテルと1本の静脈カテーテルの外科的な留置、ECGケーブルの配置、および羊水カテーテルの留置という基本的手順について記述しています。これにより、心電図のモニタリング、動脈血圧の測定、動脈血および静脈血のサンプリング、ならびに子宮内静水圧のモニタリングが可能になります。この集中的な研究プロジェクトにおいて貴重なご支援をいただいた以下の方々に感謝いたします。また、カナダ保健研究機構（Canadian Institutes of Health Research）、ケベック州のSantiおよびTwell周産期研究財団による本プロジェクトへの資金援助に感謝申し上げます。

instrumentation-near-term-fetal-sheep-for-multivariate-chronic-non

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

超高周波超音波小動物における心臓の異常を調べるための強力なライブイメージングツールです。その非侵襲性は、胚の生理的な状態を維持することができます。ここで、我々は子宮内で E18.5で胚の心拍数を測定するためのM-モード超音波を使用することを示している。...

非侵襲Mモード心エコー検査によるマウスでの心拍数の子宮内測定で

ここでは、自由に動く新生児のてんかんの仔に脳波記録（EEG）を記録し、その手順、特徴、および用途を記載するように設計された新規技術を紹介する。この方法は、1週間以上のEEGを記録することを可能にする。...

新しい方法を用いた自由に動く新生児ラットの脳波記録

侵襲医療機器の正確かつ効率的な可視化は、非常に多くの超音波ガイド下の低侵襲で重要です。ここでは、超音波イメージング用プローブに対する針先端の位置で空間をローカライズする方法が表示されます。...

三次元超音波針の先端光ファイバー超音波受信機と追跡

本研究は、子豚.の生体内で神経伝達物質の活動を監視する酵素法による微小電極アレイ (MEA) 技術の新しい使用法を探るそのグルタミン酸不全麻酔神経毒性のメカニズムに貢献しました。ここでは、麻酔神経毒性の機構解明のための MEA 技術を適応するためのプロトコルを提案する.

そのまま子豚脳内麻酔神経毒性の研究のための微小電極アレイ技術の適応

羊胎仔の侵襲的な計測では、生まれたばかりの乳児によく似たモデルで処理中の循環の生理学的計測を提供します。...

周産期に窒息ラム モデル: 新生児蘇生のためのモデル

ここでは、麻酔薬の使用を必要としない、早期出生後マウス用に最適化された非侵襲的心電図(ECG)プロトコルを提示する。...

周産期マウスにおける非侵襲性心電図

生体内 ヒツジ胎児の頸動脈血流に対する薬物効果のリアルタイム研究

先天性横隔膜ヘルニア (CDH) の 子宮内...

胎児の子羊における 子宮内 連続テレメトリー気管圧測定

この研究は、ブタモデルで慢性皮質記録を繰り返すためのスケーラブルで信頼性が高く、再現性のある方法を示しています。この方法は、疼痛研究や神経疾患診断など、神経科学のさまざまな分野で応用されています。...

ブタの麻酔中に皮質記録を繰り返すための慢性頭蓋窓法

このプロトコルは、心拍数、動脈血圧、下大静脈圧と上大静脈圧、心拍リズムなどの血行動態データの継続的かつ長期的な収集を可能にするために、大型動物の無線テレメトリデバイスを埋め込むための外科的方法論を説明しています。...

継続的および長期の血行動態モニタリングのためのフォンタンヒツジモデルへのワイヤレステレメトリデバイス埋め込み

学ぶヒツジ胎児の計測法。麻酔なしで長期生理モニタリングを行い、血管カテーテルと心電図ケーブルを埋め込む手術手順を解説。胎児発達と疾患状態の研究に有用なモデルです。

多変量慢性非麻酔下の録音のための短期的ヒツジ胎児の計測

さらに動画を探す