ダブルH迷路：げっ歯類での学習と記憶のための堅牢な行動試験

次の実験の全体的な目標は、空間ワーキングメモリとげっ歯類を調査し、彼らの学習と行動戦略を評価することです。これは、最初に学習と記憶のパフォーマンスを評価するためにダブルH迷路を構築することによって達成されます。第2のステップとして、動物は行動訓練の前に迷路環境に慣れます。

次に、動物は、習慣的な反応を発達させるために、自己中心的な学習パラダイムを使用して迷路で毎日訓練されます。あるいは、同種中心のパラダイムを利用して、場所の応答を開発することもできます。最後のステップは、開始位置を変更し、パターンを削除するプローブ試行で動物の学習戦略を評価することです。

この結果は、動物の行動の記録に基づいて、迷路で利用される学習戦略の選択に関する洞察を提供します。この手法が、8本腕の無線迷路やモリスウォーター迷路などの既存の方法よりも優れている点は、最短2日で迅速に習得でき、実験者が動物が学習する戦略のタイプを指示できることです。この方法は、手続き型記憶システムと宣言型記憶システムの間の動的な相互作用や、これらのシステムがさまざまな治療モダリティによってどのように影響を受けるかなど、行動の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。

この手順を実演するのは、神経電子システム研究室のポスドクであるリチャード・ピネル博士です。最初のステップは、ダブルH迷路を構築することです。迷路は、3つの平行なランアームが交差する中央の路地で構成されています。

各廊下の幅は20センチで、透明度の高いプレキシガラスの壁に囲まれています。壁は、アグリフィックスやネジなどの特殊な接着剤で固定され、すべての内部角度で防水されています。まず、プレキシガラスをサイズに合わせてカットし、内部のジョイントを詰まらせます。

接着する接合部の近くで保護プラスチックコーティングを剥がし、すべてのほこりの粒子を洗浄溶剤で除去します。両面を90度に置き、接着剤の漏れを防ぐために端をシールするために特殊なテープを使用します。硬化プロセスでは、重合剤を混合して接着剤を調製し、空気駆動シリンジを使用してCroix接着剤を静かに攪拌します。

その後、ジョイントを固定して防水し、硬化させます。排水のために迷路内に出口を配置する必要があります。迷路をすべての側面にアクセスできるテーブルに置きます。

対照的な手がかりは、周囲の壁に配置する必要があります。次に、ビデオ解析の後半で向きを示すために、北と南のアームにラベルを付けます。最後に、迷路の上にカメラを配置して、動物の行動のテスト後分析を行います。

カメラをオンにすると、各試行の前に動物の動きが記録されます。プレトレーニングフェーズの設定には、迷路を約17センチの高さまで透明な水で満たします。事前トレーニングは、トレーニングセッションの前日または当日に行うことができます。

水温を摂氏21度から23度に維持して、ネズミが脱出プラットフォームを探すインセンティブを提供します。テストの前日に迷路に水を入れて、水温を安定させます。開始位置に関係なく、常に透明なギロチンドアで反対側のアームへの侵入をブロックしてください。

準備ができたら、ラットを中央の腕の1つの端から解放します。脱出プラットフォームに到着したら、ラットを休ませて約15秒間周囲を観察します。試行の間に少なくとも 10 秒の休憩を挟んで、4 回連続して試行を実施します。

トレーニングを開始するには、脱出プラットフォームをトレーニング前の位置から選択したアームに移動し、プラットフォームを水面下1センチメートルまで沈めるための水を追加します。次に、250グラムの脱脂粉乳を混ぜて水を不透明にします。まず、粉乳と水を別々のボトルにあらかじめ混ぜて、この混合物を迷路の周りのいくつかの場所に分配します。

攪拌すると、迷路の水の均一性により早く到達するのに役立ちます。前に示したように、ネズミを中央の路地から放し、反対側の腕への侵入がブロックされていることを確認します。リリースしたら、動物の行動を観察し、手動またはビデオカメラでそのパフォーマンスを記録します。

60秒以内に目標プラットフォームに到達しない場合は、ラットを脱出プラットフォームにそっと誘導し、ラットがそこで休むのを許し、周囲を観察します。その後、約15秒間、ラットを取り出し、タオルで毛羽立たせて乾かしてから、次の試験を行います。これは、ラットが次の4日間冷却不足にならないようにするために重要です。

基本的なトレーニングプロトコルに従ってください。ラットを北または南のスタートアームから予測不可能な順序で放し、両方のアームが2回使用されるようにします。エスケーププラットフォームを取り外して、6日目にプローブトライアルを実行します。

トレーニング中に使用した腕とは異なる腕からラットを解放します。たとえば、北のアームから解放された北のアームで解放され、南東のアームが閉じられた場合、ラットを最大60秒間泳がせます。毎日4回のトレーニング試行のそれぞれについて、同じ開始アームからラットを解放します。

6日目に、プローブトライアルのために脱出プラットフォームを取り外します。試験中に放出された場所とは異なる腕からラットを解放します。ラットが60秒間泳ぐのを待ちます。

テスト後。オーバーヘッドカメラから撮影した録画を確認し、応答、遅延、初期エラーと反復エラー、最初の選択肢、応答タイプを手動で追跡します。最後に、応答エラー、目標を達成するための遅延、およびターゲットアームで費やされた時間に関する統計分析を実行します。

この図では、迷路のエラー ゾーンは灰色で強調表示され、閉じたアームは南と北の両方の開始位置で黒で強調表示されています。ハッチングされた線は、ラットが 4 つのエラー ゾーンすべてを訪れる遊泳経路の例を示しています。脱出プラットフォームに到達する前に、これらの代表的な遊泳軌跡は、プローブ試行中の動きを示しています。

同種中心の訓練後、自己中心的な訓練の後、ラットは北または南の腕のディスプレイから開始するように訓練し、主に開始位置が左に移動したときの手続き型反応を示します。しかし、開始アームを180度回転させたラットは、より多くの場所応答を示しました。トレーニング段階では、偽手術群と新生児腹側海馬病変群の両方について、他の典型的な水泳トラックとして配置された応答と手続き型応答が指定されました。

パフォーマンスの違いに注意してください。プローブセッション中の4回目のトレーニング試行までに、元のスタートアームは閉じられ、ラットは南西アームから解放されました。このテクニックを習得すると、適切に実行されれば、5分以内に実行できます。

この手順を試みるときは、毎日ミルクウォーターを交換することを忘れないでください、そうしないと悪臭を放ちます。開発以来、この手順は、行動学の分野の研究者が覚醒している動物の手続き型および宣言型記憶システムを探求する道を開いてきました。