Name: マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: 学ぶ反復低酸素プレコンディショニングによるマウスの脳卒中後神経血管保護の定量法。梗塞体積と血液脳関門の両方を同時測定し、虚血性脳卒中における内因性保護メカニズムを解明する。

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RHPプロトコルの開発に携わってくださったGidday研究室と、tMCAo手術を支援してくださったNeuro-Models Facility（UTSW）に感謝します。この研究は、米国心臓協会(AMS)、ハガティ脳損傷修復センター(UTSW;AMS)、および国際キワニス(JMG)のイリノイ州東部アイオワ地区の痙性麻痺研究財団。

著者らは開示するものは何もない。

全身低酸素症マウスでの（ すなわち、2時間11％O 2の）への単回暴露は「一過性」 -短い持続である低酸素プレコンディショニングの課題へのエピジェネティックな応答を意味tMCAo、29から脳を保護し、ベースラインの表現型は、内に復元され、日。低酸素プレコンディショニング刺激の繰り返しプレゼンテーションは劇的に神経保護表現型の持続時間を延ばす。6多くの研究は、反復刺激列の周波数、大きさおよび持続時間は、この応答の重要な決定因子であることが示されています。例えば、単純に2週間にわたって低酸素状態の同じ強度と持続時間（11％の酸素の2時間）週3回（MWF）を繰り返すことは、tMCAoから神経血管保護のための治療ウインドウを拡張6が、長期を誘導するのに十分であったしませんでした網膜における用語虚血耐性。30興味深いことに、全身低酸素（8％O 2の5時間を&lt;5エクスポージャーが、/サブ&gt;）は5低酸素曝露は3日おきに配置した場合に、神経保護が失われた、6日間隔で3日、...

成人障害と死因の第4位の主要な原因としては、脳卒中は、米国の成人人口が直面する最も衰弱性疾患状態の一つである。脳卒中の1動物モデルは、虚血性傷害を軽減する新しい方法の実験的調査を可能にし、脳卒中後の回復を改善します。そのようなトランスレーショナルリサーチのための新規な一道がプリコンディショニングされます。前処理は、その後、より重度の傷害からの損傷を低減するために、非損傷刺激の意図的な使用である。2低酸素プレコンディショニングは、 インビボおよびインビトロ試験の両方において脳卒中に対する保護を提供する脳内の多面的な変化をもたらすことが示されています。低比重低酸素しかし、低酸素に一回の露光のみ成体マウスにおける虚血に対する耐性未満の72時間の誘導、短期的な神経保護を提供しています3。でも14時間毎日のエクスポージャーの4週間後の4、Linら。 FOウントその神経保護は、一週間持続した。5繰り返し低酸素プレコンディショニング（RHP）頻度、期間、および低酸素曝露の強度の確率的変動によって特徴付けられます。単一プレコンディショニング課題とは対照的に、RHPはマウスで8週間まで持続脳保護表現型を誘導する。6 RHP、最終低酸素暴露後週間梗塞体積、血液脳関門（BBB）破壊、血管炎症、および白血球漏出を減少。 RHPは、具体的には、虚血性半球におけるB細胞集団を維持しながら、T細胞、単球、およびマクロファージ集団を減少させることにより、虚血性脳の炎症を減少させた。 図7は、実際には、RHPは、脳卒中を含む、任意のCNS ​​傷害の前に、マウスにおける免疫表現型を誘導しました。 RHP処理された健康なマウスから単離したRHP処理されたB細胞は、抗原提示および抗体産生の両方のダウンレギュレーションと、ユニークな抗炎症性の表現型を示しました。ザ炎症誘発性適応免疫機構の全体的な減少だけでなく、中枢神経系に特異的な炎症性疾患のための内因性の免疫抑制を誘導するためにRHPに優れた方法論になりますが、また前炎症性病変を含む全身損傷または疾患モデル。 RHPは一過性の中大脳動脈閉塞（tMCAo）以下の梗塞体積およびBBB破壊の両方を低減します。このような一般的に使用されるtMCAoとして脳卒中の動物モデルは、劇的に脳卒中の病態生理の理解だけでなく、より効果的な神経治療薬の設計を改善します。まず、小泉らによって開発された1986年に、8 tMCAo手順は、広く使用されているげっ歯類において脳卒中を誘導する方法と、再灌流後の炎症を調査するための好ましい方法の一つです。 tMCAoための方法が進化するにつれて、シリコーンコートフィラメントのより最近の使用は、他のモデル9,10 &lt;と比較して、くも膜下出血の危険性を減らします/ SUP&gt;残念ながらtMCAoは、多くの場合、梗塞量に大きなばらつきを生成してもして、信頼性を向上させる。11-13これらの研究のほとんどは、2,3,5-トリフェニルクロリド（TTC）で染色することによって冠状脳切片における梗塞領域の輪郭を描く、考え梗塞定量化のためのゴールドスタンダードは、鮮やかな、複製可能な結果を​​生成するための簡単​​で安価な方法であるためです。 TTCは、ミトコンドリア内に存在する脱水素酵素の基質として機能します。脳切片をTTC溶液にさらされると、ホルマザン、非水溶性の還元生成物は、生存可能なミトコンドリアの深い赤色の沈殿ところ、TTCを選択的に生細胞内に取り込まれます。そのため、虚血組織におけるミトコンドリア機能障害のため、この組織が ​​損傷を受け、健康な組織の分化を可能にする、白のまま。14 RHPはまた、虚血性半球におけるBBB破壊を減少させる。6したがって、同じB内のBBBの整合性の二重の定量化をTTCベース梗塞ボリュームと雨は、内因性の保護の完全な有効性に関する有用な情報、および未処理と処理された動物におけるBBB破壊および梗塞の間の潜在的な因果関係を提供する15の測定します。脳卒中の二次破砕BBBを介して末梢血の流入は、最終的には虚血性脳卒中の患者における感染と死亡率を増加させ、虚血性半球で白血球集団、炎症性サイトカイン、酸化ストレス、血管原性浮腫、出血性転換を増加させます。16,17動物モデルにおいてBBB破壊を測定する一般的な方法は、脳へのエバンスブルー（EB）色素漏出の定量化によるものである。15,18-21 EBを選択的にアルブミン、球状タンパク質を血清に結合する（MW = 65kDaの）それは無傷の動物でBBBを通過していません。22虚血性脳卒中後、EBは、脳に浸透し、光学濃度withiの測定を可能にする、620 nmで蛍光を発しますnは灌流が実質を負傷。22光学密度はEBは経心臓灌流によって死後皮質血管系から洗い流されたBBBの透過性に正比例します。 EBを投与した動物におけるTTC染色脳の即時処理により、梗塞容積及びBBB破壊の両方を効果的に定量することができます。これは、神経損傷およびBBBの破壊は、脳卒中後の脳の同時処理ではないことに留意すべきである、23,24ので屠殺時の選択は重要な考慮事項です。 詳細RHP方法、そのモデルヒト患者において、中大脳動脈閉塞、神経および血管脳卒中損傷エンドポイントを決定するための二重の組織学的方法を、一時的な動脈閉塞を誘導するためのtMCAo方法を以下のプロトコル。 TTCは、全体の梗塞体積の定量化を可能にする、細胞死および累積的組織損傷を測定します梅、EBはBBB損傷の半球定量化を提供します。

<table><tbody><tr><td>流量計、レギュレーター</td><td>VetEquip, Inc</td><td>専門注文</td><td>6.0mmのフレキシブルPVCチューブには、プラスチック製のメスコネクタで各誘導室の入口ポートに接続する4つの流量計が取り付けられています。これらの流量計は、6.5インチ x 1インチ x 1インチの金属棒にボルトで固定されています。この金属棒は、DISSアウトレットを備えたMI-246-P圧力計にボルトで固定されています。この圧力計・流量計は、新品のガスボンベごとにレンチで取り付けることができます。</td></tr><tr><td>21% O2タンク</td><td>AirGas</td><td>OX USP200</td><td></td></tr><tr><td>11% O2 tank</td><td>AirGas</td><td>Specialty order</td><td></td></tr><tr><td>8% O2 tank&nbsp;</td><td>AirGas</td><td>スペシャルティオーダー15L</td><td></td></tr><tr><td>誘導チャンバーVetEquip</td><td>941454</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ムーアレイバードーパーフロー&nbsp;</td><td>ムーア・インスツルメンツ&nbsp;</td><td>moorVMS-LDF1-HP</td><td>0.8 mm 径プローブ&nbsp;</td></tr><tr><td>高輝度イルミネーター&nbsp;</td><td>ニコン</td><td>NI-150</td><td></td></tr><tr><td>ズーム実体顕微鏡&nbsp;</td><td>NIkon</td><td>SMZ800</td><td>他の手術用顕微鏡も使用可能です。&nbsp;</td></tr><tr><td>ケント・サイエンティフィック Right Temperature CODA</td><td>ケント・サイエンティフィック・コーポレーション</td><td>販売終了</td><td>推奨される代替品は、RightTemp Temperature MonitoringおよびHomeothermic Control(Kent Scientific、#PS-RT)を備えたPhysioSuiteです。</td></tr><tr><td>Hovabator Incubator</td><td>Stromberg's</td><td>2362-E</td><td>私たちのモデルは2362Nです。2362Eは後のモデルで、電子サーモスタットが含まれています。&nbsp;</td></tr><tr><td>V010 麻酔システム&nbsp;</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td>含まれるもの:10フィートの高圧酸素ホース、フレーム、流量計、酸素フラッシュアセンブリ、気化器、呼吸回路、チャンバー、ノーズコーン、廃ガス排出チューブ、2つのVapoGuard</td></tr><tr><td>フィルター250mlイソフルラン&nbsp;</td><td>バトラーシャイン</td><td>NDC-11695</td><td></td></tr><tr><td>D-6獣医トリム動物コードレストリマー&nbsp;</td><td>アンディス&nbsp;</td><td>#23905</td><td>交換用ブレードは Andis (#23995)</td></tr><tr><td>Betadine&nbsp;</td> から入手可能です。<td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>19-898-867&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>複数の販売者&nbsp;</td><td>カタログ番号はご利用いただけません&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼパッド</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>67622</td><td></td></tr><tr><td>サージカルドレープ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>GM300&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>シルク縫合糸&nbsp;</td><td>Look/Div Surgical Specialties</td><td>SP115</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Sutures</td><td>Look/Div Surgical Specialties</td><td>SP185</td><td></td></tr><tr><td>Durmont #5 鉗子 (2)&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール&nbsp;</td><td>11251-35</td><td>角度45&deg;</td></tr><tr><td>外科用ハサミ</td><td>ファインサイエンスツール&nbsp;</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>3 mm Vannas</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS600177</td><td>ストレートブレード</td></tr><tr><td>ハートマン止血剤&nbsp;</td><td>ファインサイエンティフィックツール</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>閉塞フィラメント</td><td>ワシントン大学</td><td>専門注文</td><td>フィラメントは、ワシントン大学でシリコーンコーティングされ、UTSWの施設に有料で提供されています。&nbsp;</td></tr><tr><td>エバンス ブルー</td><td>シグマ オルドリッチ</td><td>E2129-10G</td><td></td></tr><tr><td>濾紙&nbsp;</td><td>シグマ オルドリッチ</td><td>WHA1001150</td><td>150 mm、円、グレード 1&nbsp;</td></tr><tr><td>重量を量るボート</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>02-202-101</td><td>2.5 "直径</td></tr><tr><td>0.9%塩化ナトリウム注射USP&nbsp;</td><td>バクスターファーマシューティクス&nbsp;</td><td>2B1321</td><td></td></tr><tr><td>0.3 ccインスリンシリンジ、29ゲージ針ベ</td><td>クトンディキンソン実験器具</td><td>309301</td><td></td></tr><tr><td>平底拘束具付き&nbsp;</td><td>ブレインツリー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>FB&nbsp;M</td><td>2.0" 直径</td></tr><tr><td>TTC</td><td>シグマ</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS、pH 7.4</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>BP399-20</td><td></td></tr><tr><td>ウォーターバス</td><td>複数の販売者&nbsp;</td><td>カタログ番号はご利用いただけません&nbsp;</td><td>TTC付きシンチレーションチューブは、ウォーターバスの代わりに流水で手動で保持することができます。</td></tr><tr><td>発泡スチロールボード</td><td>複数販売者&nbsp;</td><td>カタログ番号はご利用いただけません&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>大型シリンジキット</td><td>PumpSystems Inc</td><td>P-SYRKIT-LG</td><td></td></tr><tr><td>灌流ポンプ</td><td></td><td>NE-300&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>60 ccシリンジ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>NC9203256</td><td></td></tr><tr><td>27ゲージ翼付き輸液セット</td><td>川澄研究所</td><td>D3K1-25G 1</td><td></td></tr><tr><td>20 mlシンチレーションバイアル</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>50-367-126</td><td></td></tr><tr><td>ステンレス製ヘラ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>14-373-25A</td><td></td></tr><tr><td>アルトアクリル 1.0 mm マウス脳、冠状</td><td>セルポイントサイエンティフィック&nbsp;</td><td>カタログ番号はご利用いただけません&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>0.21 mmステンレス製ブレード、25個入り</td><td>CellPoint Scientific&nbsp;</td><td>カタログ番号はご利用いただけません&nbsp;</td><td>再利用可能なクライオスタットブレードは、安価な代替品です。</td></tr><tr><td>4%パラホルムアルデヒド</td><td>Santa Cruz Biotechnology&nbsp;</td><td>SC-281692</td><td></td></tr><tr><td>スーパーフロスト顕微鏡スライド&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>HP Scanjet G4050</td><td>複数の売り手&nbsp;</td><td>カタログ番号はご利用いただけません&nbsp;</td><td>他の市販のスキャナーは、プロトコルのこの手順に適しています。</td></tr><tr><td>イメージJ&nbsp;</td><td>国立衛生研究所の</td><td>カタログ番号はありません&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>分析天びん</td><td>メトラー・トレド&nbsp;</td><td>XSE 205U</td><td></td></tr><tr><td>精密コンパクトオーブン&nbsp;&nbsp;</td><td>サーモサイエンティフィック&nbsp;</td><td></td><td></td>PR305225M</tr><tr><td>1.7 ml微量遠心チューブ(エッペンドルフ)</td><td>デンビルサイエンティフィック&nbsp;</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>ホルムアミド</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>BP228-100</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルプレート</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>07-200-9</td><td></td></tr><tr><td>エポック マイクロプレート分光光度計&nbsp;</td><td>ビオテック&nbsp;</td><td>カタログ番号はご利用いただけません&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

脳卒中の実験動物モデルは、ストロークの病態を理解し、より効果的な治療戦略を開発するための貴重なツールです。反復的な低酸素プレコンディショニング（RHP）2週間のプロトコルは、焦点虚血性脳卒中のマウスモデルにおいて、中枢神経系（CNS）損傷に対する長期保護を誘導します。 RHPは期間（2または4時間）と強度（8％と11％のO 2）の両方に変化する低酸素症に9確率的エクスポージャーで構成されています。 RHPは、内因性CNS-保護表現型の長期的な誘導を示唆し、梗塞体積、血液脳関門（BBB）の破壊、および低酸素への最後の暴露後の数週間のための脳卒中後の炎症反応を減少させます。梗塞体積及びBBB破壊の二重定量化のための方法は、RHPまたは他の推定上の神経保護剤を有するマウスにおける神経血管保護を評価するのに有効です。成人男性のスイスウェブスターマウスを21％OにRHPまたは期間と同等の曝露によって予め調整しました。 <suB&gt; 2（ すなわち、室内空気）。 60分一過中大脳動脈閉塞（tMCAo）は、最後の低酸素曝露後の2週間誘導しました。閉塞および再灌流の両方が経頭蓋レーザドップラー流量測定によって確認しました。再灌流後の二十二時間、エバンスブルー（EB）を尾静脈注射を介して投与しました。 2時間後、動物をイソフルランの過剰投与、脳切片を2,3,5-塩化トリフェニルテトラゾリウム（TTC）で染色したことにより屠殺しました。梗塞容積を定量しました。次に、EBをtMCAo後にBBB破壊を決定するために、48時間かけて組織から抽出しました。要約すると、RHPは他のCNSベースおよびプロ炎症性全身疾患状態のための翻訳可能性のある、マウスにおける脳卒中損傷から長期内因性神経血管保護を誘導するために、最小限のコストで、複製することができる単純なプロトコルです。

本研究では、10週齢がRHPに無作為化の開始時であった（N = 10）25の雄Swiss Websterマウスまたは21％のO 2（N = 15）のグループが含まれていました。二週間最終RHP曝露後、外科的処置は盲検基により行い、日の間相殺します。 tMCAoに続いて、1マウスは、術後の回復中に死亡し、再灌流CBF基準を満たしていなかったので、1マウスは研究から除外しました。両方除外マウスは、21％O 2群からのものでした。ガイドラインに到着によると、28表2は、外科的なパラメータを示しています。間接梗塞体積、半球腫脹（ すなわち 、浮腫）、およびエバンスブルー（EB）extravasations全てのデータは、不対t検定（平均値、標準偏差が示されている）を用いて分析した。 図2に示されており、外れ値が偽発見率で検出しますEBデータセットからの1％未満（RHPから21％から2、2）4外れ値を削除（グラフパッドプリズム）、。 <p clお尻このコホートでは= &quot;jove_content&quot;&gt;...

このプロトコルは、マウスにおける一過性中大脳動脈閉塞後の梗塞容積と血液脳関門の破壊を減少させる反復的な低酸素プレコンディショニング、または全身性低酸素症への短時間の曝露について説明しています。また、脳卒中後の梗塞容積と血液脳関門の破壊の二重定量化についても詳しく説明し、神経血管保護の有効性を評価します。

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

本実験の全体的な目的は、梗塞体積と血液脳関門の完全性を同時に測定することにより、反復性低酸素プレコンディショニング（RHP）後の神経保護作用を定量化することです。これは、マウスを、持続時間と強度が異なる9回の確率的低酸素曝露にさらすことで、脳卒中に対する神経血管保護を提供することによって達成されます。その後、マウスに脳卒中を誘発し、エバンスブルーを注入します。エバンズブルーはアルブミンに選択的に結合するため、動物の犠牲後、注射による血液脳関門の破綻を定量することが可能です。脳を摘出し、TTCで染色して梗塞体積を定量します。結果から、反復的低酸素プレコンディショニングが、虚血性脳卒中後のマウスにおいて神経保護的に作用することが示されました。単回曝露による低酸素プレコンディショニングなどの既存の手法に対する本手法の主な利点は、RHPがマウスにおいて少なくとも8週間にわたり神経保護作用をもたらすことです。この二重定量法は、血液脳関門の破綻における梗塞体積をいかにして同時に測定するかといった、脳卒中研究における重要な課題への答えとなり得ます。本手法は虚血性脳卒中への知見を得るために使用できますが、RHPは他の中枢神経系（CNS）疾患や全身性の炎症性疾患状態にも適用可能です。まず、マウスを2つの群に分けます。8%および11%の酸素に曝露させるRHP群と、同時に21%の酸素に曝露させる対照群について、各ケージの上部フィルター蓋を取り外し、餌と水ボトルを入れたままのケージをそれぞれの酸素タンクに接続されたチャンバーに設置します。チャンバーの蓋を閉じて固定します。タンクのメインガスバルブを開き、各誘導チャンバーの初期流量を2 L/min（LPM）に設定します。5分間の曝露後、残りの曝露時間の間、流量を1 LPMに下げます。曝露終了時に、流量を0 LPMにしてガスバルブを閉じます。タンクについては以下の通りです。チャンバーの蓋を開け、各ケージのフィルター付きトップリッドを付け直します。次回の低酸素曝露まで、ケージを標準的な飼育環境に置きます。使用後は、各誘導チャンバーを消毒剤および消臭剤でスプレー洗浄してください。プロトコルの2週間にわたり、RHPマウスと対照マウスの両方を、一日のうち同じ時間に曝露させます。その後、本文に記載されている通り、一過性中大脳動脈閉塞（tMCAO）を行います。EB注入は再灌流の22時間後に行い、安楽死およびNTTC染色を行う2時間前まで血流中で循環させる必要があります。注入に必要な量のEBを調製します。次に、室温に置いたものを必要な量だけ0.3 ccインスリン用注射器で吸引します。29ゲージの針を用い、底面が平らな保定器でマウスを固定します。側静脈が上になるように尾を保持します。側静脈は尾の中心線の両側に位置しています。マウスを固定して注射を行うため、尾の先端を持って保持します。針を静脈に約3〜5 mm挿入します。静脈を貫通させないように注意しながら、1分かけて染料をすべて注入してください。溶液が静脈に入っていれば、シリンジに圧力をかけた際に抵抗はほとんど感じられないはずです。マウスの尾肢および眼の即時の色変化により、EBの全身静脈投与が成功したことを確認します。尾から針を抜き、出血を止めるために清潔なガーゼで軽く圧迫してください。タイマーを開始します。マウスの皮膚が青くなった後、弱まった血液脳関門に浸透させるため、EBを2時間循環させます。灌流およびTTC染色は、T-M-C-A-Oから24時間後の再灌流24時間後、かつEB投与から2時間後に行います。小型誘導チャンバー内でイソフルランを過剰投与し、動物を安楽死させます。死後の酸素欠乏により開始される自己融解を最小限に抑えるため、安楽死後直ちに灌流を開始してください。動物をスチロフォーム製プラットフォーム上に素早く固定し、前肢を前足からピンで留めます。肋骨の下の正中線から腹壁にかけて側方切開を行います。心臓を露出させるため、横隔膜を慎重に切開します。氷冷した0.01 Mリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を満たした60 ccシリンジを27ゲージの翼状静脈留置針に接続し、灌流ポンプを流速5 mL/minで始動させます。針先を心臓の左心室に約0.5 cm挿入し、右心房を切開します。灌流中、右心房からは次第に希釈された静脈血が流出し、最終的に無色になります。0.01 M PBS 30 mLを心臓内に灌流させます。次に、透明な20個のシンチレーションボトルにTTC溶液を5 mLずつ加えます。灌流後すぐに動物を断頭し、必要に応じて小型の鋏とスパチュラを用いて脳を摘出します。閉塞させた中大脳動脈の対側半球が、顕著なEB漏出や浮腫がなく、蒼白に見えることを確認してください。次に、マウス脳の1.0 mm厚の冠状断面を作成するために設計されたアクリル製脳マトリックスにPBSを注ぎます。脳を背側が上になるようにマトリックスに配置し、直ちに脳の上にPBSを注ぎます。脳を湿った状態に保ってください。マトリックスの吻側から2番目のスロットに厚さ 0.21 millimeter のステンレス製ブレードを挿入し、嗅球を除去します。次に、マトリックスの尾側から4番目のスロットにブレードを挿入し、小脳を除去します。マトリックスの残りのスロットの中央のスロットにブレードを挿入します。次に、スライス時に組織が最も均等に分散するように、残りの組織を等分に二分するようにして、残りのブレードを挿入します。すべてのブレードを挿入したら、PBSを1〜2滴脳に滴下して湿らせます。その後、吻側領域から始めて、ブレードを1本ずつマトリックスから取り出します。最初の7枚のスライスをTTC分析用に保存します。T-M-C-A-Oの後、小型のスパチュラを使用して、スライスをブレードからTTCを満たしたバイアルへ慎重に移動させます。すべての切片をバイアルに入れたら、蓋をして、切片がピンク色に染まるまで温水バスに浸します。染色のムラにつながる切片の重なりを避けるため、必要に応じてバスの中のボトルを静かに回転させます。その後、TTCを廃棄し、脳切片が浸るように4%パラホルムアルデヒド溶液をバイアルに注ぎます。これにより、TTCの化学反応が停止します。直ちに切片を清潔な1×3インチのガラススライド上に配置し、吻側から尾側に向かうように並べます。スライドをスキャンします。標準的なスキャナーを使用し、画像解析のために解像度を最低600 DPIに設定してください。スキャン画像には、必ず動物の名前とメトリック定規を含めてください。最後に、スライドを裏返して背面をスキャンし、すべてのデータが収集されていることを確認します。RHPは、対照群のマウスと比較して梗塞体積を46%減少させますが、同一動物のTTCデータから得られた脳半球の腫脹には影響を与えません。RHPは、対側半球で標準化したエバンズブルーの漏出量で定義される血液脳関門の破壊を抑制します。ここでは、RHP投与群および21%酸素曝露コントロール群の両方の代表的なTTC染色像を示します。マウスの画像の下に、それぞれの梗塞体積とエバンズブルー漏出量を記載しています。同側は脳の虚血半球を指し、対側は脳の非影響側を指します。この手順を実施する際は、融合の22時間後にエバンズブルーを注入し、動物を犠牲にする前に2時間循環させることが重要です。この手法により、前臨床脳卒中研究分野の研究者が、マウスにおける脳卒中に対する内因性保護のメカニズムを探索する道が開かれました。このビデオを視聴することで、血液脳関門の完全性と梗塞体積の二重定量化を通じて、RHPの神経保護効果を測定する方法を明確に理解できるはずです。

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証拠が蓄積され、その虚血プレコンディショニング（PC） - 脳の非損傷虚課題は - その後の損傷虚血への過渡保護を与える。我々はC57BL6 /...

局所脳虚血への早期虚血耐性を誘導するために適切な前処理刺激として二国間の総頚動脈閉塞

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脳虚血のマウスモデルにおける酸性ポストコンディショニングの神経保護効果の評価

出典: Poinsatte, K., et al., マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングおよび一過性中大脳動脈閉塞後の神経血管保護の定量化。J. Vis. 経験。...

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングに対するニューロンの適応

出典: Lee, SE, et al.一過性中大脳動脈閉塞マウスモデルを用いた甘草根根抽出物の神経保護効果の評価J. Vis. 経験。...

中大脳動脈閉塞マウスモデルにおける試験化合物の神経保護効果の評価

脳卒中の病態生理学を理解するためには、信頼性のあるモデルを使用することが重要です。この論文は、マウスにおいて最も頻繁に使用される脳卒中モデルのいずれかを説明する、中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルと呼ばれる再潅流と（また腔内フィラメントまたは縫合モデルと呼ばれます）。...

マウスの中大脳動脈閉塞再灌流誘発性の脳卒中のための外科的アプローチ

遠位中大脳動脈の分岐（MCAO）の外科的閉塞は実験的ストローク研究で頻繁に使用されるモデルです。この原稿は、マウスの縦生体顕微鏡検査のための機会を提供しています横頭蓋窓の挿入と組み合わせて永久にMCAoの基本的な手法について説明します。...

横慢性頭蓋窓の準備を有効インビボマウスの遠位中大脳動脈閉塞後に観測

私たちは、シリコーンコーティング縫合糸を使用して、中大脳動脈の閉塞によって誘発される脳卒中のマウスモデルを記述します。このプロトコルは、永久的な閉塞または一時的な虚血を誘発し、続いて再灌流を誘発するために適用することができます。...

梗塞エリアの中央動脈閉塞技術と可視化を使用したマウスにおける虚血性脳卒中および虚血 - 再灌流の誘導

酸性ポストコンディショニングは、脳虚血を防ぐ。ここでは、APCを実行する2つのモデルを示します。それらはインビトロで酸素 - グルコース欠乏後に皮質層スライスを酸性緩衝液に移し、インビボで中大脳動脈閉塞後に20％CO 2を吸入することによってそれぞれ達成される 。...

脳虚血に対する酸性ポストコンディショニングの神経保護を研究するための実験モデル

脳虚血再灌流のマウス モデルを確立して、脳卒中の病態を調査します。我々 は遠位右中大脳動脈と右総頚動脈を結紮し、10 または 40...

2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル

このプロトコルは中間の大脳の動脈のintraluminal閉塞によってマウスの一時的な焦点の大脳の虚血のモデルを記述する。さらに、磁気共鳴画像法と行動テストを使用した結果評価の例が示されています。...

脳卒中の一過性中大脳動脈閉塞モデル

ここでは、C57BL/6Jマウスの経頭蓋電気凝固術による遠位中大脳動脈閉塞(dMCAO)モデルを確立し、その後の神経学的行動と組織病理学的特徴を評価するためのプロトコルを提示します。...

遠位中動脈閉塞法を用いたマウスにおける急性虚血性脳卒中の誘発

学ぶ反復低酸素プレコンディショニングによるマウスの脳卒中後神経血管保護の定量法。梗塞体積と血液脳関門の両方を同時測定し、虚血性脳卒中における内因性保護メカニズムを解明する。

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

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