Name: ラットの外側尾静脈から血液をサンプリング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: 学ぶラットの外側尾静脈からの血液サンプリング手法。低侵襲で反復採取が可能なこの方法は、ストレスを最小化しながら生体内バイオマーカー評価に適したサンプルを提供します。

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我々は、技術支援のためのバージニアドハーティとJunmei八尾に感謝します。この研究は、KAGにNIMH（R01 MH084966）、および米国陸軍研究室と米国防総省の国防高等研究計画庁（グラントW911NF-10-1-0059）によって資金を供給されました。

全ての実験は、成体雄ロングエバンスラットを用いて行きました。すべての手順は、米国国立衛生研究所に応じて、実験動物の管理と使用に関する（NIH）ガイドであり、マサチューセッツ工科大学の施設内動物管理使用委員会との動物管理使用レビュー庁によって承認されましたUSAMRMC。 1.準備<ol><li>ヘパリン（千USP単位/ ml）を含む500μlのチューブでシールド針を配置した後、針を介してヘパリン溶液を吸引して排出することによりHepariniseカテーテルとシリンジ。 <ol><li>シリンジに蝶カテーテルを取り付けます。損傷から鋭い先端を保護するために、カテーテルの針の上にシールドしてください。 </li><li>収集される血液の量よりもわずかに大きいヘパリンの量を撤回。注射器を外し、空気でそれを埋めます。 </li><li>再アタッチカテーテルに注射器を使用し、空気は、過剰なヘパリン溶液を排出します。確実に微量のみ、チューブ、針、シリンジに残ります。 </li><li>滅菌表面に、ついたまま注射器で、滅菌カテーテルを配置します。 </li></ol></li><li>すぐに前足と後足が快適な位置にあり、呼吸が制限されていないことを保証きれいな布でラットを固定します。 <ol><li>フックとループテープでラップを固定し、外性器がくびれていないことを確認してください。 </li><li>優しくアシスタントを持ち、しっかりと尾はカウンターの端にぶら下がっで堅実な仕事の表面上にラット（腹部と尾の付け根）を抑制する。 </li></ol></li></ol> 2.採血<ol><li> 40〜50秒の血管を拡張し、ペーパータオルで尾を乾燥させるために42℃の水に尾を浸し。 （尾をねじる防止するために、尾と体全体を回転させる）から採血する尾静脈の位置を確認します。 注：尾の十分な温暖化が急速collectioのために重要です血液サンプルのN。血管系の狭窄された場合、カテーテルの適切な配置が困難であり、血流が大幅に低減されます。加熱パッドは、水浸漬の代わりに使用することができます。 </li><li>サンプリング点を特定します。 注：動脈は尾の半ば背側面に沿って位置します。サンプリングのためにこれを使用しないでください。 <ol><li>動脈への側方に位置する左右の尾静脈のいずれかをターゲットにしています。菌株によって異なり、年齢とともに増加する尾の色素沈着は、血管系の一部を覆い隠すことができます。尾の下部に静脈の一部を対象としています。 </li><li> 2％クロルヘキシジン消毒液でターゲット領域を拭いてください。 </li></ol></li><li>約50μlにゼロからプランジャーを引き出すことによって、注射器やカテーテル内の負圧を作成します。 </li><li>ストレートサンプル収集を通じて尾を維持するために先端付近優しく、しっかりと尾を持ちます。血流が過度にタイトなグリップによって閉塞されていないことを確認してください。</li><li>ゆっくりと約5cm、尾の先端から浅い角度で静脈にカテーテルを挿入します。静脈が貫通されると、血液がカテーテル内に流れます。ゆっくりと一定の速度（毎秒〜20μL）で所望の体積を収集するために、注射器のプランジャーを撤回。 <ol><li>収集することができる最大の血液量については、獣医のスタッフにご相談ください。収集する必要があります血液の最大量は、ラットの体重と健康状態に依存します。 14日の期間中の総血液量の15％以上を撤回しないでください。 注：血液は急性ストレスホルモンが血管系を収縮するので、コレクションをサンプリングする前に数分で強調された動物から収集するためにはるかに困難です。例えば、動物をラップするのに数分を取って、新規の部屋にラットのホームケージを移動、または静脈にカテーテルの挿入を繰り返し、すべての急性ストレス反応を引き起こす可能性があります。 </li><li> blooを促進「搾乳」静脈からdフロー。尾の先端に向かってベースから、静脈の長さに沿って指を実行しますが、挿入された針やカテーテルの先端から2cm以上が静脈から除去になる可能性が残っています。 </li><li>血液が正常にカテーテルの浸透の最初のサイトから収集することができない場合は、静脈までさらに針を再挿入します。血液は最初のサイトで収集された場合は、切断した後、静脈に先立って再挿入するカテーテルと注射器を再接続することにより、針を再加圧します。一般的には、追加の貫通を避けます。 </li><li>複数の貫通は、尾への血液供給が遮断され、柔らかい尾組織を壊死されるようになる中で、尾静脈の崩壊を引き起こす可能性がありますように尾静脈の崩壊がある場合に、ラットを安楽死させます。 </li></ol></li><li>十分な試料体積が収集されると、切断したカテーテルを再接続することによって、注射器内の圧力を解放します。吸引液がわずかにシリンジプランジャを使用して（〜50＆＃181; L）、および静脈から針を撤回。 注意：針が第1のシリンジ内の圧力を解放することなく撤回された場合、血液が針から滴下します。 </li><li>簡単に説明すると出血を止めるために挿入部位に圧力を適用し、消毒液で拭きます。そのホームケージにラットを返します。 </li></ol> 3.血液サンプルを処理<ol><li>吸引した空気には血液がカテーテル針の内部に残っていないことを確認し、ちょうど針の上にカテーテルチューブをカットするはさみを使用しています。滅菌1.5ミリリットルのマイクロチューブに血液を放出します。 注：血液が針を通して押された場合、剪断力は、多くの下流のアッセイを妨害し得る破裂する赤血球を引き起こす可能性があります。溶血を回避するために、針を外します。 <ol><li>血漿、ここで（抗凝固剤としてEDTAが含まれている血液の200〜400μlの0.1 M EDTA10μlのを使用し、使用チューブを収集するには、使用されるEDTAの濃度は、Wに干渉しないよう下流アッセイ番目）、氷上に置きます。 <ol><li>回収の10分以内に10分間冷却遠心機（4℃）で2,100×gでの全血サンプルをスピン。赤および白血球層を乱す避け、プラズマを溶出します。 </li></ol></li><li>凝固を可能にするために最大30分間、室温で（抗凝固剤を含まない）は、血液、血清、場所のサンプルを収集します。 2,000×gで冷却遠心機（4℃）で回収チューブをスピン。血清は、その後、溶出され得ます。 </li></ol></li><li>使用直ちに試料、または1年まで-80℃で保存。 </li></ol>

<ol><li>Vausort, M., Wagner, D. R., Devaux, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+Noncoding+RNAs+in+Patients+with+Acute+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Long Noncoding RNAs in Patients with Acute Myocardial Infarction.</a> Circ Res. 115 (7), 668-677 (2014).</li>
<li>Shah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+for+Early+Detection+of+Colorectal+Cancer+and+Polyps%3A+Systematic+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Biomarkers for Early Detection of Colorectal Cancer and Polyps: Systematic Review.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 23 (9), 1712-1728 (2014).</li>
<li>Chan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+blood-based+protein+biomarker+strategies+in+the+study+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Applications of blood-based protein biomarker strategies in the study of psychiatric disorders.</a> Prog Neurobiol. , (2014).</li>
<li>Cao, L., Li, L., Lin, D., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induces+learning+impairment+that+is+mediated+by+interleukin+1beta+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induces learning impairment that is mediated by interleukin 1beta in rodents.</a> PLoS One. 7 (12), e51431(2012).</li>
<li>Culley, D. J., Baxter, M. G., Yukhananov, R., Crosby, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+impairment+of+acquisition+of+a+spatial+memory+task+following+isoflurane-nitrous+oxide+anesthesia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Long-term impairment of acquisition of a spatial memory task following isoflurane-nitrous oxide anesthesia in rats.</a> Anesthesiology. 100 (2), 309-314 (2004).</li>
<li>Vahl, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+ACTH+and+corticosterone+sampling+methods+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of ACTH and corticosterone sampling methods in rats.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 289 (5), E823-E828 (2005).</li>
<li>Kalinichenko, L. S., Koplik, E. V., Pertsov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+profile+of+peripheral+blood+in+rats+with+various+behavioral+characteristics+during+acute+emotional+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Exp+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Cytokine profile of peripheral blood in rats with various behavioral characteristics during acute emotional stress.</a> Bull Exp Biol Med. 156 (4), 441-444 (2014).</li>
<li>McEwen, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+effects+of+stress+hormones+in+health+and+disease%3A+Understanding+the+protective+and+damaging+effects+of+stress+and+stress+mediators%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Central effects of stress hormones in health and disease: Understanding the protective and damaging effects of stress and stress mediators.</a> Eur J Pharmacol. 583 (2-3), 174-185 (2008).</li>
<li>Sanchez, A., Toledo-Pinto, E. A., Menezes, M. L., Pereira, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+norepinephrine+and+epinephrine+concentrations+in+adrenal+gland+of+the+rats+submitted+to+acute+immobilization+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in norepinephrine and epinephrine concentrations in adrenal gland of the rats submitted to acute immobilization stress.</a> Pharmacol Res. 48 (6), 607-613 (2003).</li>
<li>Meyer, R. M., Burgos-Robles, A., Liu, E., Correia, S. S., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ghrelin-growth+hormone+axis+drives+stress-induced+vulnerability+to+enhanced+fear%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">A ghrelin-growth hormone axis drives stress-induced vulnerability to enhanced fear.</a> Mol Psychiatry. , (2013).</li>
<li>Knoll, A. T., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynorphin%2C+stress%2C+and+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Dynorphin, stress, and depression.</a> Brain Res. 1314 (56-73), (2010).</li>
<li>Harvey, B. H., Brand, L., Jeeva, Z., Stein, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical%2Fhippocampal+monoamines%2C+HPA-axis+changes+and+aversive+behavior+following+stress+and+restress+in+an+animal+model+of+post-traumatic+stress+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Cortical/hippocampal monoamines, HPA-axis changes and aversive behavior following stress and restress in an animal model of post-traumatic stress disorder.</a> Physiol Behav. 87 (5), 881-890 (2006).</li>
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著者らは、開示することは何もありません。

ここでは、他の一般的に使用される技術上の重要な利点がありますラットから血液サンプルを得るための迅速かつ簡単な手順について説明します。まず、頚静脈または眼窩後洞からのサンプリングとは対照的に、麻酔を必要としません。血液サンプルは、行動手順を取り巻く収集された場合には、学習および記憶4,5と干渉することができるので、麻酔薬の投与は望ましくありません。第二に、そのような伏在や背ペダル静脈から収集などの他の静脈穿刺技術、より大きな血液容量を収集する機能を提供しています。血液1.5 mlまでの、ここに記載の技術を使用して、単一の時点でラットから回収することができる、容易に複数のアッセイを並行して実行されることを可能にする量。最後に、この手順では、尾の先端切断または眼窩後出血と比較して、組織の損傷の可能性を最小限に抑えることができます。この手順の使用は、動物Wの遵守を促進します動物で実施される実験方法から生じる痛みや苦痛を最小限に抑える必要が法および実験動物の管理と使用に関する指針は 、elfare。 それは、この方法に新しい研究者は、実験動物が抑制されている時間を最小限に抑えるために拘束し、尾の出血技術を練習することをお勧めします。拘束の開始から3分未満で採取した血液は、最適な結果を提供します。 ここで説明するプロトコルは、週に1〜4回のサンプリングに使用されないが、一日二回よりも多くすることができます。繰り返し血液収集を行うことができるが、尾の基部から上方に移動する別のサンプリング部位を使用する必要があり、左右の尾静脈サンプリング部位として交互にされるべきです。げっ歯類の総血液量は、その体重の6〜7％であり、全血液量の15％以下は、2週間の期間内に収集されるべきではありません。血清または血漿を採取したサンプルの体積の約40〜60％を含みます。 いくつかの小さな変更を加えてここで説明したように外側尾静脈を介して血液採取は、マウスで実行されてもよいです。まず、わずかなゲージ（27 G）カテーテルを使用することができます。第二に、それは、マウスを固定化するために、むしろラップよりも、チューブ拘束具を使用することをお勧めします。顎下維管束（200〜500μL）の静脈穿刺を用いて、マウスから得ることができる血液の量を安全に尾静脈（200μlの最大値）から採取することができるよりも大きいです。顎下維管束からのサンプリング血液が最小限の拘束を必要とし、より多くの血液をもたらす可能性があるため、これは、マウスでのサンプリングのための好ましい経路です。 この手順は、その低侵襲性の性質と共に、実行することができるこれで迅速に、また、急性ストレス反応6によって血液ベース措置の潜在的な摂動を最小限に抑えることができます。ザ急性ストレス反応は、インターロイキンおよび他の免疫活性因子7を含む多くの分子の循環レベル、視床下部-下垂体-副腎軸8のホルモン、交感神経系9、グレリン10、内因性オピオイド11、ドーパミンでホルモンを変えることができ、セロトニン12。これらの分子によって調節されるこれらの分子または他の静止循環対策が望まれる場合には、ストレッサ露光開始の分だけ少なく内でトリガされるストレス応答を最小限にすることが重要です。 ストレス反応は、血液の組成を変化させるだけでなく、交感神経系から増加したドライブを介しているため、血管系の収縮の血液採取のための技術的な障害を表すだけではなく。これは、急性のストレス応答をマウントされたラットからの安定した血流量を得ることが困難になる大きくします。したがって、動物の苦痛はミニムでなければなりません急速に関心のある生理的状態を反映し、サンプルを得るために化さ。

血液から得られたバイオマーカーは有用な診断、予測を提供し、心血管疾患1、がん科学2、および精神疾患3を含む多くの臨床状況において対策を、階層化。また、飢餓、炎症、またはストレスの存在度を含む、生物の「状態」を評価するために基礎科学において使用され得ます。このような措置は、またはサンプルが得られる時刻と対象者の性別など、関心の問題に重要であってもなくてもよいの変数によって影響を受けることができます。また、血液採取手順自体の間に誘起される応力によって影響され得ます。ストレスホルモンと痛みの知覚は急速に血液の組成を変化させることができます。 げっ歯類は、最も一般的に使用される実験動物であり、そして複数の方法は、血液採取のために開発されています。採血の理想的な方法は、最小限のphysiologicaを持つ必要があります動物のLへの影響は、全く麻酔を必要とせず、迅速かつ繰り返しサンプリングを可能にし、多数の下流の適用のために十分な血液量を提供します。例えば、頸静脈または尾先端切断のカテーテルなどの血液を採取するための一般的な技術は、これらの基準を満たしていません。 このプロトコルの目的は、最小限のストレスであるラットにおける使用のための血液サンプリング技術について記述して麻酔を必要とせず、単一の被験者内で複数の血液採取を可能にし、複数のアッセイを行うことができるように、比較的大きな試料体積を提供します単一のサンプルに。この方法の目的は、最低限、急性ストレス反応に影響される血液サンプルを得ることです。

<table><tbody><tr><td>ヘパリンナトリウム (1,000 USP units/ml)</td><td>Patternson Veterinary Supply</td><td>25021040010</td><td></td></tr><tr><td>エチレンジアミン四酢酸 (EDTA)</td><td>JT Taylor</td><td>JT2020-01</td><td></td></tr><tr><td>Dermachlor rinse-chlorhexadine</td><td>Butler Schein</td><td>6356</td><td>局所消毒液、2% グルコン酸クロルヘキシジン</td></tr><tr><td>SURFLO Winged Infusion Sets、テルモ、バタフライカテーテル</td><td>VWR Scientific</td><td></td><td></td>TESV25BLK</tr><tr><td>BDツベルクリン1ccシリンジ</td><td>VWRサイエンティフィック</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>1.5ml微量遠心チューブVWR</td><td>サイエンティフィック</td><td>89202-682</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu;l マイクロ遠心チューブ</td><td>VWR Scientific</td><td>21150-330</td><td></td></tr><tr><td>はさみ、ステンレス鋼、5 インチ</td> <td>VWR Scientific</td><td>82027-586</td><td></td></tr><tr><td>500 ml プラスチックビーカー</td><td>VWR Scientific</td><td>414004-149</td><td></td></tr><tr><td>きれいな布ラップ</td><td>Butler Schein</td><td>2993</td><td></td></tr><tr><td>ベルクロテープ、幅 0.75</td><td>モノプライス</td><td>B004AF9II6</td><td>フックとループテープ</td></tr><tr><td>タイマー</td><td>VWR Scientific</td><td>62344-641</td><td></td></tr></tbody></table>

ラットの外側尾静脈から血液をサンプリング

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

血液サンプルは、ホルモン、免疫因子、成長因子、タンパク質、グルコースなど、関心のあるターゲットを測定するために多くの実験状況で一般的に取得されますが、血液の組成は動的に制御され、容易に摂動されます。血液組成を変化させる可能性のある要因の1つは、サンプリング手順によって引き起こされるストレス反応であり、これは関心のある測定値の変動に寄与する可能性があります。ここでは、ラットの外側尾静脈からの採血手順について説明します。この手順には、他のより一般的に使用される手法に比べて大きな利点があります。麻酔や鎮痛剤を使わずに、痛みや侵襲性を最小限に抑えながら迅速なサンプリングが可能です。さらに、大量のサンプル(一部のラットでは1 ml以上)の入手に使用でき、実験日をまたいで繰り返し使用できます。採血によるストレス反応や痛みを最小限に抑えることで、採血手順自体の影響を最小限に抑えながら、動物の真の基礎状態をより正確に反映することができます。

プロトコールに記載されているように外側尾静脈から採取した血漿は、外観に半透明で淡黄色であった血漿サンプルを提供します。 図1に示すように、サンプル中の溶血は、血漿に赤い色合いを与えます。急性ストレス反応が急速に血液の組成を変化させることができます。 図2に示すように、例えば、循環コルチコステロン濃度が著しく、ストレッサー曝露の10分以内に増やすことができます。露出をストレッサーの前に、この方法で得られたコルチコステロンの低い基礎レベルは、サンプリング手順自体がストレスの大きな原因ではないことを明らかにしました。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig1.jpg" /> 図1：サンプルの外観（A）A溶血試料が示されています。遠心分離後、血漿または血清の層（表面黒Arで示されます行）ピンクや赤を帯び表示されます。暗い色合いは、溶血の高いレベルを示しています。 （B）遠心分離した後、適切に収集したサンプルは、非溶血血漿または血清に対応する上のバンド（黒矢印で示す面）に透明な、黄色がかった外観を持つことになります。この層を除去するとき、それは、いずれかの全血層にピペットの先端を押して、またはチップ内に全血を吸引することにより、下層の全血を乱さないことが重要です。全血で汚染された任意の血漿または血清は破棄されるべきです。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig2.jpg" /> 図2：血漿コルチコステロンは急速にストレスの多い経験以下に上昇する血液が前に成人女性ロングエバンスラットの外側尾静脈から得られ、10分4トーン（10秒、2 kHzの、85デシベル）への曝露後の共同終了しました。 fooでtshocks（1秒、350μA）。ベースライン（290.4±138.8 pg / mlで）における血漿コルチコステロンのレベルは、フットショックストレスの提示後10分で観察されるよりも有意に低かった（2204.8±454.5 pg / mlで、p = 0.02、n = 4） は 、対応のあるtによって決定されます-test。 *、p &lt;0.05

血液サンプルは、生体内の生理学的状態や疾患のバイオマーカーを評価するのに役立ちます。ここでは、ラットの側尾静脈から血液を採取する方法を説明します。この方法では、痛みや侵襲性を最小限に抑えながら、迅速なサンプルを得ることができます。

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

本手順の総合的な目的は、外側尾静脈からサンプリングを行うことで、ラットからの採血に伴うストレスを最小限に抑えることです。これは、まずラットを固定して尾部を温めることで達成されます。次に、拡張した外側尾静脈のいずれかにバタフライカテーテルを挿入し、最終ステップで血液を採取します。カテーテルを抜去し、穿刺部位からの出血を止めてください。最終的に、外側尾静脈から採血を行うことは、採血中のラットへのストレスを最小限に抑え、急性ストレス反応が血液組成に及ぼす影響を軽減させます。尾端切断などの既存の手法に対するこの手法の主な利点は、動物への苦痛がはるかに少ないこと、および同一被験者内での反復採血が可能であることです。この手順は、私の研究室のメンバーであるポストドクのGraham Leeと、技術者のElia Harmatzの2名によって実演します。まず、シリンジにバタフライカテーテルを取り付けますが、先端を保護するためにシリンジシールドで針を覆ったままにします。次に、採取予定の血液量よりわずかに多い量のヘパリンを吸引します。シリンジを取り外し、シリンジに空気を充填します。シリンジをカテーテルに再度接続し、チューブ、針、およびシリンジ内からヘパリン溶液を、ごく少量まで排出します。次に、カテーテルとシリンジを滅菌した表面の上に置きます。続いて、ラットを清潔な布で速やかに固定します。その際、前肢と後肢が快適な位置にあり、呼吸が妨げられていないことに注意してください。面ファスナーでラップを固定します。次に、血液サンプルを採取するため、安定した作業台の上で、助手にラットの腹部と尾の付け根を優しく、かつしっかりと固定させます。この際、尾がカウンターの端から垂れ下がるようにしてください。続いて、42 °Cの温水に40〜50秒間浸し、尾の血管を拡張させます。次に、ペーパータオルで尾を乾かし、尾を持って全身を回転させ、採血のために動脈の外側にある右または左の尾静脈を確認します。尾の下部の静脈の一箇所を標的にし、その領域を2%クロルヘキシジン消毒液で拭きます。次に、シリンジのプランジャーを0から約50 microlitersまで引き、シリンジ内に陰圧を作成します。そして、サンプリング中に尾を真っ直ぐに保つため、尾の先端付近を優しく、かつしっかりと保持します。次に、尾の先端から約5 cmの位置で、カテーテルを浅い角度でゆっくりと静脈内に挿入します。静脈に穿刺されると、カテーテル内に血液が流れ込みます。シリンジのプランジャーをゆっくりと引き、1秒あたり約20 µLの一定速度で必要な量を採取します。血流を促進するためには、挿入した針の先端から2 cm以上の距離を保ちながら、尾の付け根から先端に向かって静脈に沿って指を滑らせ、血液をミルキングします。最初のカテーテル穿刺部位から血液を正常に採取できない場合は、針を静脈のさらに上流に挿入し直してください。十分な検体量が採取されたら、カテーテルを一度切り離して再接続し、シリンジ内の圧力を解放します。その後、静脈から針を抜き、穿刺部位を短時間圧迫して止血してください。消毒液で患部を拭き、動物をホームケージに戻します。血液サンプルの処理を行うには、カテーテル針の中に血液が残らないよう空気を吸引し、ハサミで針の直上のカテーテルチューブを切断します。針を取り外した後、血漿を回収し、EDTAを含むマイクロ遠心チューブに血液を排出します。抗凝固剤として使用します。チューブを軽く弾いて抗凝固剤を血液に混ぜ合わせ、サンプルを氷上に置きます。採取後10分以内に全血を遠心分離し、赤血球および白血球の層を乱さないように注意しながら血漿を抽出し、血清を回収します。血液を抗凝固剤の入っていないマイクロ遠心チューブに入れ、室温で最大30分間放置します。血液が凝固した後、回収チューブを冷却遠心機で遠心分離し、血清を回収します。どちらのタイプの試料も、すぐに使用するか、-80 °Cで最大1年間保存することが可能です。実演した通りに側尾静脈から採取した血漿は、半透明で淡黄色の外観を呈します。溶血が起こっている場合、血漿に赤みがかった色調が現れます。急性ストレス反応は、血液サンプルの組成を急速に変化させることがあります。例えば、この代表的な実験に示されているように、ストレッサーへの曝露から10分以内に血中コルチコステロン濃度が著しく上昇します。しかし重要な点として、ストレッサー曝露前に本手法で得られたコルチコステロンの低基礎レベルは、サンプリング操作自体が大きなストレス源になっていないことを示しています。針の挿入と採血に習熟するまで、麻酔をかけた動物でこの手順を練習することをお勧めします。習得後は、適切に行えばこの手技を5分で完了させることができます。この手順を実施する際は、周囲の騒音などの潜在的なストレス要因を最小限に抑え、可能な限り迅速に完了させることが重要です。

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Biology

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意識のあるラットにおける鎖骨下静脈採血

ナチュラルキラー細胞はリンパ球の小集団である。ここでは、StemCell...

StemCell Technologies社からRosetteSepキットと人間の血液からNK細胞の濃縮

アメリカカブトガニ、カブトガニポリフェムスは、間違いなくあらゆる脊椎動物の血液中の大量のための最も便利なソースです。血液は全身循環、粒状の血球、血漿、ヘモシアニン、C -反応性タンパク質、およびα2-マクログロブリンで唯一の3種類のタンパク質で唯一の細胞型で、構成は単純です。血液は心臓から収集され、血液細胞と血漿を遠心分離によって分離されています。...

アメリカカブトガニ、カブトガニポリフェムスから採血

学ぶラットの外側尾静脈からの血液サンプリング手法。低侵襲で反復採取が可能なこの方法は、ストレスを最小化しながら生体内バイオマーカー評価に適したサンプルを提供します。

ラットの外側尾静脈から血液をサンプリング

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