Name: 胆道主導の肝臓の再生を研究するためにゼブラフィッシュにおける肝細胞特異的アブレーション (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: 学ぶゼブラフィッシュにおける肝細胞特異的アブレーション手法。メトロニダゾール処理により胆道細胞由来の肝臓再生メカニズムを解析し、in vivoでの組織修復過程をリアルタイムで観察できます。

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著者はHukriede博士とTsang博士の議論に感謝します。 M.K.はNIHのトレーニング助成金(T32EB001026)の支援を受けました。 この研究は、American Liver Foundation、March of Dimes Foundation(5-FY12-39)、およびNIH(DK101426)からD.S.への助成金によって部分的に支援されました。

ゼブラフィッシュは、標準的な手順に従って上昇して飼育しました。実験は、ピッツバーグ大学の施設内動物管理使用委員会によって承認されました。 胚/幼虫の調製<ol><li>時限交配を行うために、成人男性と女性のTg（fabp10a：CFP-NTR）を設定S931半接合またはホモ接合性魚類のO / Nを、それらの間の仕切りを配置します。相手が所望される場合は、次の朝、この分周器を取り外します。細かいプラスチックメッシュストレーナーを用いて水を負担することによって胚を収集します。 </li><li>逆さまにストレーナを回して、スクイーズボトルから分配卵の水の細い流れにメッシュ表面をすすぎます。卵、水25mlで100ミリメートルペトリ皿に100胚を移します。ペトリ皿当たりない100以上の胚を維持し、28℃でそれらを発生させます。 </li><li>色素沈着を抑制するために、10時間後に受精（HPF）の前にペトリ皿にフェニルチオ尿素（PTU）を追加し、電子メールを上げます80 HPFまでmbryos /幼虫。 PTUの最終濃度は0.2 mMです。注意：PTUは有毒です。適切な取り扱いガイドラインに従って使用してください。 </li><li>ペトリ皿の中に0.016％の最終濃度で、3-アミノ安息香酸エチルエステル（トリカイン）を加えることにより、幼虫を麻酔。そして、落射蛍光顕微鏡、ソートCFP陽性幼虫を使用。同様の肝臓サイズで幼虫を使用して、小さいまたは大きい肝臓のものを捨てます。 注：ヘミ接合性およびホモ接合性幼虫の間に肝切除の程度の差がないため、任意のCFP陽性幼虫は関係なく、強度、使用することができます。注意：トリカインは有毒です。適切な取り扱いガイドラインに従って使用してください。 </li><li>トリカインを含む卵の水を除去し、0.2 mMのPTUを補充した卵の水を加えます。 28℃での胚/幼虫を保管してください。 </li></ol> 2. MTZトリートメント<ol><li> 1にMTZ粉末0.171グラムを溶解することにより、新鮮な10mMのMTZ溶液を調製します00ミリリットルの卵の水は、0.2％DMS​​Oおよび0.2 mMのPTUを補いました。完全にMTZを溶解するために、20〜30分間急速に撹拌しながら室温で溶液を混合。 MTZを製造する場合MTZを可溶化するために役立つと幼虫にMTZの浸透を高めるために、DMSOを追加します。注意：長時間の暴露またはMTZ濃度の増加は、毒性です。適切な取り扱いガイドラインに従って使用してください。 </li><li>二つの異なるの100mmペトリ皿またはマルチウェルプレートに幼虫の所望の数を転送することにより、対照群と実験群に幼虫を区切り。実験群では、10 mMのMTZ溶液中の幼虫を保ちます。対照群のために、0.2％のDMSOを含む卵水に保管してください。 </li><li> MTZの光不活性化を防止するために、プレート又はアルミニウム箔でMTZ溶液を含むペトリ皿を覆い、そして28℃でインキュベートします。 MTZ処理の時間は、幼虫期およびトランスジェニックラインに依存しています。 </li><li>で同様の重度の肝切除を観察するために、 <eM&gt;のTg（fabp10a：CFP-NTR）ライン、（36時間の期間）3.5日後受精（DPF）のいずれかから、または（24時間の期間）5 DPFからMTZ溶液で幼虫を扱います。 </li></ol>胆道主導の肝再生の3分析<ol><li>アブレーション期間の終わりに、プレートからMTZ溶液を除去。卵の水25mlを添加することにより、MTZ処理した幼虫を洗ってください。卵の水を廃棄する前に幼虫を洗浄し、プレートを2〜3回渦巻きます。 3回繰り返し、その後、もう一度卵水に幼虫を浸します。 MTZ処理した幼虫における心臓浮腫と幼虫の死を回避するために、幼虫を固定化するために0.008％の最終濃度で、トリカインの低濃度を追加します。 </li><li>肝臓分析のために、CFPフィルターと落射蛍光顕微鏡下でMTZ処置幼虫の肝臓サイズを調べます。肝臓の相対サイズに基づいて肝切除レベルを評価：大（非アブレーション; 0〜10％の幼虫）、中（部分的に切除さを、10-20％）、及び非常に小さな（完全に切除された; 80〜90％）。 </li><li>非アブレーションされたまたは部分的に切除された肝臓と幼虫を削除します。唯一の重度の肝切除の指標である小さな肝臓で幼虫を保ちます。再生0時間の時点（R0H）で肝臓分析のために、MTZの洗い出しとCFPのソート後の幼虫を収穫。それ以外の場合は、収穫の準備ができるまで、0.2 mMのPTUを補充した卵水にソートされた幼虫を保ちます。 </li><li> 1.5ミリリットルマイクロ遠心チューブに回収した幼虫を転送し、PEM緩衝液中の3％のホルムアルデヒドの固定液で卵の水を交換してください。回転子O上/ Nチューブを4℃でインキュベートします。 </li><li> PBSDT 1mlの固定液を交換し、5分間ローテーターの幼虫を含むチューブを回転させます。 </li><li>手動で解剖顕微鏡下で卵黄と胸のフィンを取り外し、ピンセットをPBSDTを含有し、使用して100ミリメートルのペトリ皿に固定された幼虫を転送します。 1.5mlチューブにアップTP 20解剖幼虫を転送します。 </li> &lt;LI&gt;ブロッキング溶液1mlのPBSDT液を交換し、2時間室温で回転体にチューブを揺すります。 </li><li>一次抗体を含むブロッキング溶液100μlのブロッキング溶液を交換してください。ゆっくりと回転体のO / Nで4°Cのチューブを揺すります。 </li><li>一次抗体溶液を除去し、10分間PBSDTで毎回5回洗浄します。その後、二次抗体を含む溶液を阻止する100μlのを追加し、2時間室温で回転装置上でそれを揺すります。 </li><li>回転子に揺動することにより、室温で10分間PBSDTで毎回5回洗浄します。 </li><li>顕微鏡スライド上に横方向に幼虫を向けると装着メディアのドロップを追加します。慎重にカバーガラスでそれらをカバーし、ネイルポリッシャーでカバーガラスをシール。今は、共焦点顕微鏡のための準備ができています。 </li></ol>

<ol><li>Riehle, K. J., Dan, Y. Y., Campbell, J. S., Fausto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+concepts+in+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroen+Hepatol%22%5BJournal%5D)">New concepts in liver regeneration.</a> J Gastroen Hepatol. 26, 203-212 (2011).</li>
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</ol>

著者は、彼らが競合する金融利害関係がないことを宣言します。

重度、軽度ではない、肝切除は、胆管駆動の肝臓の再生を誘発します。 CFP-NTR導入遺伝子：したがって、MTZの治療およびウォッシュアウトの後、それはfabp10aから固有のCFPの蛍光によって評価することができるMTZ処理した幼虫の肝臓サイズを調べることが重要です。 MTZ処理した幼虫の小さな割合は、非アブレーション表示（0-5％）または（10〜20％）の肝臓の一部アブレーションされますので、整理し、非常に小さな肝臓で幼虫を分析することが不可欠であり、その重度の肝切除の指標です。 我々のプロトコルでは、我々は5 DPF（36時間の処理期間）に3.5からMTZとゼブラフィッシュの幼虫を処理しているが、代替のステージとMTZ処理の時間も可能です。例えば、6 DPF（24時間の処理期間）5から処理された幼虫は、前述の36時間の処理期間に類似重症肝切除を示しました。独立して生成された二つの追加のグループ類似fabp10a：NTRトランスジェニック系統とは、肝細胞特異的切除次胆汁主導の肝再生の過程について報告しました。...

肝臓は非常に再生器官です。肝臓再生中に、肝細胞の再生、肝臓の実質細胞は、既存の肝細胞（肝細胞ドリブン肝再生）またはBECS（胆汁ドリブン肝再生）1,2から誘導されます。肝臓損傷は、通常、既存の肝細胞の増殖を誘発します。肝細胞増殖が損なわれたときただし、BECS 2-4を肝細胞に寄与することができます。肝再生のこれらの2つのモードは、臨床的に重要です。 （理由肝腫瘍やライブ肝ドナーの例えば ）ヒト肝臓の一部を外科的に除去すると、残りの肝臓における肝細胞は、失われた肝臓塊を回復するために増殖します。 BECSまたは肝臓前駆細胞（たLPC）は、肝細胞の再生5,6に寄与するように見えるように対照的に、重篤な肝疾患を有する患者において、肝細胞増殖が大きく損なわれる。げっ歯類2/3部分肝切除モデル、中肝細胞は有意に肝細胞主導の肝再生7,8の現在の理解に貢献してきました、失われた肝臓塊を回復するために増殖します。しかし、再生肝細胞は、主にBECSに由来する有効なげっ歯類モデルはありません。いくつかのげっ歯類の肝臓毒素モデルは胆道駆動型肝再生2-4の同定をもたらしたが、マウスにおける最近の系譜トレースの研究では、これらのモデル9,10に肝細胞の再生にBECSの最小の寄与を示しています。部分肝切除11-13とアセトアミノフェン誘発性肝障害14,15を含むげっ歯類の肝障害モデルのいくつかは、ゼブラフィッシュに適用され、肝臓再生に関与する新規遺伝子または経路の同定につながってきました。しかし、肝細胞主導型ではなく、BECドリブン、肝再生は、これらのゼブラフィッシュの肝障害モデルで発生します。したがって、新規な肝臓損傷モデルとは、BECSは広くregeneratに寄与します肝細胞をるがBEC主導の肝再生のよりよい理解のために必要とされます。 ここで説明肝切除モデルの全体的な目標は、（1）BECSは広範囲の肝細胞の再生に寄与し、そして（2）BECドリブン肝再生の基礎となる分子及び細胞メカニズムを解明した肝損傷モデルを生成することです。私たちは、損傷の重症度は、肝臓再生のモードを決定するという仮説を立てました。このように、我々は、胆管駆動の肝再生が厳しい肝細胞傷害の際に開始するだろうと予測しました。この仮説を検証するため、我々はトランスジェニック系統を生成することにより、ゼブラフィッシュの肝臓損傷モデルを開発し、Tgは（fabp10a：CFP-NTR）S931は 、ことは非常に肝細胞特異的fabp10a下シアン蛍光タンパク質（CFP）と融合した細菌ニトロレダクターゼ（NTR）を発現しますプロモーター。 NTRは、非毒性のプロドラッグを変換するので、メトロニダゾール（MTZ）は、細胞傷害性薬物に、それだけで意図アブレーションNTR-この場合、16-18肝細胞発現細胞。 MTZ治療の持続時間を操作することによって、肝切除の程度を制御することができます。このモデルを使用して、我々は最近、重度の肝細胞の喪失時に、BECSは広く、さらに他の二つの独立した研究20,21によって確認された肝細胞19を 、再生を生じさせることを報告しました。したがって、上記の齧歯類及びゼブラフィッシュ肝臓損傷モデルと比較して、我々の肝切除モデルはBEC駆動型肝再生を研究するため、より有利です。 このプロトコルは、ゼブラフィッシュ肝切除モデルを用いて、肝再生の実験を行うための手順を記載しています。このモデルは、胆汁駆動型肝再生のメカニズムを決定するための、および化学スクリーンが抑制または肝再生を増強することができる小分子を同定するために適切です。

<table><tbody><tr><td>3-アミノ安息香酸エチルエステル(トリカイン)粉末</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td>0.4%(15 mM)トリカインストックを作る:0.4 gのトリカインを卵水で100 mLにします。pH 7に調整します。</td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド(DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>メトロニダゾール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1547</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8532</td><td></td></tr><tr><td>ホルムアルデヒド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>252549</td><td></td></tr><tr><td>硫酸カルシウム二水和物</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3771</td><td></td></tr><tr><td>N-フェニルチオ尿素(PTU)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7629</td><td></td></tr><tr><td>封入剤(ベクタシールド)</td><td>ベクターラボラトリーズ</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>100 x 15 mm シャーレ&nbsp;</td><td>デンビルサイエンティフィック株式会社</td><td>M5300</td><td></td></tr><tr><td>クリアマニキュア</td>フィ<td>ッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>50949071</td><td></td></tr><tr><td>ファインフォーセプス</td>ファイン<td>サイエンスツール</td><td>11251-20</td><td>デュモン#5&nbsp;</td></tr><tr><td>スライドガラス</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-544-1</td><td></td></tr><tr><td>ガラスカバースリップ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-540-A および 12-542-A</td><td>18 x 18 mm</td></tr><tr><td>zn-5 (マウス アンチアルカム)</td><td>ZIRC</td><td>zn-5</td><td>1:10 希釈</td></tr><tr><td>ヤギ anti-Hnf4a</td><td>サンタクルス</td><td>sc-6556 (C-19)</td><td>1:50 希釈</td></tr><tr><td>ラット anti-RFP</td><td>対立遺伝子バイオテクノロジー</td><td>ACT-CM-MRRFP10</td><td>1:300希釈</td></tr><tr><td>AlexaFluor 647 AffiniPure Donkey Anti-goat IgG (H+L)</td><td>Jackson laboratories</td><td>705-605-147</td><td>1:500 希釈</td></tr><tr><td>AlexaFluor 647 AffiniPure Goat Anti-mouse IgG (H+L)</td><td>Invitrogen</td><td>A21240</td><td>1:500 希釈</td></tr><tr><td>Cy3 ロバ抗ラット IgG</td><td>Jackson laboratories</td><td>712-165-150</td><td>1:500 希釈</td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ライカ マイクロシステムズ</td><td>S6F</td><td></td></tr><tr><td>落射蛍光顕微鏡</td><td>ライカマイクロシステムズ</td><td>M205FA</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>カールツァイス</td><td>LSM700</td><td></td></tr><tr><td>卵 水</td><td></td><td></td><td>0.3 g/L の海塩 'インスタントオーシャン」0.5 mM CaSO4 蒸留水 
&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; </td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>10X PBS</td><td></td><td></td><td>25.6 g Na2HPO4&middot;7H2O、80 g NaCl、2 g KCl、2 g KH2PO4.&nbsp;蒸留水で1Lにします。&nbsp;pH 7を調整します。&nbsp;121°Cで20分間オートクレーブします。</td></tr><tr><td>1X PBSDT</td><td></td><td></td><td>0.2% Triton X-100 および 0.2% DMSO を 1 X PBS に含みます。</td></tr><tr><td>PEM</td>バッファー30.2 <td></td><td></td><td>g PIPES、761 mg EGTA、1 mM MgSO4.&nbsp;蒸留水で1Lにします。&nbsp;pH 7を調整します。</td></tr><tr><td>ブロッキング溶液</td><td></td><td></td><td>1 mLの熱不活化ウマ血清と9 mLの1X PBSDTを混合します。</td></tr></tbody></table>

胆道主導の肝臓の再生を研究するためにゼブラフィッシュにおける肝細胞特異的アブレーション

Hepatocyte-specific Ablation in Zebrafish to Study Biliary-driven Liver Regeneration

肝臓は再生する素晴らしい能力を持っています。 hepatocyte-または胆管駆動の肝再生：肝細胞、肝臓の実質細胞は、次のいずれかの方法で再生することができます。胆管駆動の再生に、再生肝細胞は、胆管上皮細胞（BECS）から誘導され、一方、肝細胞主導の肝再生においては、再生肝細胞は、既存の肝細胞に由来します。肝細胞主導の肝臓再生のために、大幅に肝再生の現在の理解に貢献した優れたげっ歯類モデルがあります。しかし、そのようなげっ歯類モデルは胆汁駆動型肝再生のために存在しません。私たちは最近、BECSが広く重度の肝細胞の喪失時の肝細胞を生じさせているゼブラフィッシュの肝障害モデルについて報告しました。このモデルでは、肝細胞を特異的薬理遺伝学的手段によって切除されています。ここでは、肝細胞を切除するとBEC主導の肝再生過程を分析するために、詳細に方法を提示します。この肝細胞特異的切除モデルは、さらに胆汁ドリブン肝再生の基礎となる分子及び細胞メカニズムを発見するために使用することができます。さらに、これらの方法は、肝再生を増強または抑制する小分子を同定するために、化学的スクリーニングに適用することができます。

3.5へのDPF劇的に低減肝臓サイズ（ 図1B）から36時間、MTZ処理（A36h、Aは、アブレーションの略）。 MTZのウォッシュアウト後、肝再生（R）の始まりと考え、強いfabp10a：CFP-NTRとfabp10a：DsRedの発現は、30時間（ 図1B）内に再び現れました。肝内胆管ネットワークBECS 22の膜中に存在するALCAMの発現によって評価されるように、最初に崩壊したが54時間後にウォッシュアウト（R54h）（ 図1C）で再確立されました。これらのデータは、肝臓の再生及び回復が急速に我々の肝傷害モデルで起こることを示しています。 図2は、再生肝細胞がBECSから派生していることを示しています。 Tgが（Tp1の：H2B-mCherryを）S939ラインは12 RBP-Jĸ結合部位23を含む要素の制御下にある核...

ゼブラフィッシュの胆道による肝臓再生の根底にある分子メカニズムを評価するために、メトロニダゾール治療によりニトロレダクターゼを発現する肝細胞が遺伝的に除去される肝障害モデルを確立しました。 このプロトコルでは、肝細胞のアブレーションと胆道主導の肝臓再生を巧みに操作、監視、分析する方法について説明します。

The liver has a great capacity to regenerate. Hepatocytes, the parenchymal cells of the liver, can regenerate in one of two ways: hepatocyte- or ...

本手順の全体的な目的は、胆道駆動性の肝再生を解析するために、ゼブラフィッシュにおいて肝細胞の除去（アブレーション）を誘導することである。まず、肝細胞でニトロレダクターゼを発現するトランスジェニック幼魚をメトロニダゾール（MTZ）に曝露させることでこれを達成する。第2ステップでは、肝臓の相対的な大きさと基づいて、肝細胞の除去レベルを評価する。最終ステップのMTZ処理後、小さな肝具有アブレーション幼魚を回収し、最終的に肝臓のサイズおよび再生肝における肝マーカーの発現を、それぞれエピ蛍光顕微鏡および共焦点顕微鏡を用いて測定します。齧歯類のおばげ細胞活性化モデルのような既存の手法と比較した本手法の主な利点は、再生肝細胞が主に胆管上皮細胞に由来することです。この方法は、胆管細胞または肝前駆細胞がどのように肝再生に寄与するかといった、肝再生分野における重要な疑問に対する答えを導き出すのに役立ちます。一般的に、この手法に不慣れな人は、アブレーションおよび再生過程にある幼魚の肝臓サイズにばらつきがあるため、困難に直面する可能性があります。タイミングを合わせた交配を行うため、成魚のオスとメスのヘミ接合体またはホモ接合体を、間にディバイダーを挟んで一晩セットします。交配させたい翌朝にディバイダーを取り除き、細かいプラスチック製メッシュストレーナーを用いて胚を回収します。ストレーナーを逆さまにし、スクイズボトルを使用して、卵用水の細い流れでメッシュ表面を洗浄してください。その後、最大100個の胚を25 mLの卵用水が入った100 mmのシャーレに移し、色素沈着を抑制するためにシャーレを28 °Cに置きます。培養液にPTUを加え、10時間まで保持する。受精後80時間まで待機する。その後、トリカインで幼魚を麻酔し、エピ蛍光顕微鏡を用いてCFP陽性の幼魚を回収し、肝臓の大きさが同程度の個体のみを選別する。次に、trica卵水をPTUを添加した新しい卵水に交換し、CFP陽性のゼブラフィッシュ幼魚を28 degrees Celsiusのインキュベーターに戻します。ゼブラフィッシュ幼魚にMTZ処理を行うには、まず適切な数の幼魚を2つの異なる培養容器に分けます。実験群の幼魚は調製直後のMTZ溶液に入れ、対照群は卵水で維持します。DMSOで補充します。MTZの光不活性化を防ぐため、実験群をアルミホイルで覆い、アブレーション期間の終了時にゼブラフィッシュ幼魚の両群を28°Cでインキュベートします。プレートからMTZ溶液を取り除き、MTZ処理した幼魚を25 mLの卵水で2〜3回洗浄し、洗浄ごとに卵水を swirling して廃棄します。最後の洗浄後、MTZ処理した幼魚の心水腫および死亡を避けるため、以前に使用した濃度の半分のtricaを用いて幼魚を固定します。次に、エピ蛍光顕微鏡のCFPフィルターを使用し、MTZ処理した幼魚の相対的な肝臓サイズに基づいて肝細胞の除去レベルを評価します。肝臓が大きいゼブラフィッシュ（幼魚全体の0〜5%に相当）を、非除去個体とみなします。肝臓が中程度の大きさ（幼魚の10〜20%）のものは部分的に切除されたものとし、非常に小さい肝臓（幼魚の80〜90%）のものは完全に切除されたものとします。すべての個体を分類した後、切除されていないか、または部分的に切除された肝臓を持つ幼魚を除外し、肝臓分析のために、重度の肝細胞切除を示す非常に小さな肝臓を持つゼブラフィッシュのみを選別します。再生開始時の0時間時点で、幼魚を1.5 milliliterのマイクロ遠心チューブに移します。MTZの洗浄およびCFPのソーシング直後に、卵水を3% formaldehyde含有MPEM緩衝液に交換し、4 °Cのローター内で一晩固定します。翌朝、固定液を1 mLのPBS-Tに交換し、さらに5分間回転させます。次に、解剖顕微鏡下で、固定したすべての幼魚を新鮮なPBS-Tを含む100 mmペトリ皿に移し、ピンセットを使用して卵黄と胸鰭を手作業で除去します。最大20匹までの個体を1.5 mLチューブに移し、P-B-S-D-Tを1 mLのブロッキング溶液に交換します。室温のローテーターで2時間後、ブロッキング溶液を100 µLの一次抗体カクテルに交換し、4 °Cで一晩インキュベートします。翌日、ロッキングしながら一次抗体溶液を除去し、ゼブラフィッシュをP-B-S-D-Tで10分間ずつ5回洗浄します。最後の洗浄後、二次抗体100 µLを加え、室温でロッキングしながら2時間インキュベートします。最後に、先ほど示した方法で、幼魚をP-B-S-D-Tで5回洗浄します。幼魚を顕微鏡スライドガラス上で側方に向け、封入剤を1滴加えます。次に、各ゼブラフィッシュをカバーガラスで慎重に覆い、ネイルポリッシュでカバーガラスを密封します。受精後3.5日から5日までの36時間、MTZ処理を行うことで、肝臓のサイズが劇的に減少します。MTZの洗浄後、30時間以内に強力なCFPおよび赤色蛍光の発現が再出現し、これは胆管上皮細胞の膜におけるLCAMの発現によって確認されます。肝内胆管ネットワークは一旦崩壊しますが、洗浄後54時間で再構築されており、これは急速な肝再生と回復を示しています。これらの画像では、肝臓の胆管上皮細胞に特異的に発現する核赤色蛍光タンパク質をトランスジェニックに発現させた、再生中の肝細胞が示されています。再生肝におけるこれらのH2B-mCherry陽性細胞の大部分は、再生0時間および再生48時間においてHNF4αを発現しています。MTZ処理されたCFP陽性肝細胞は依然としてH2B-mCherryの発現を維持しており、これは重度の肝細胞喪失に伴い、胆管上皮細胞が肝細胞へ転換したことを示しています。この手順を行う際は、MTT処理後の肝再生に備え、溶血アクションの展開後に完全に切除された個体を選択することが重要であることを忘れないでください。この手法は、肝再生分野の研究者が、肝前駆細胞主導の肝再生の根底にあるメカニズムを探索する道を開きました。このビデオを視聴することで、胆管細胞主導の肝変性研究において、この胆管細胞特異的な操作モデルをどのように活用すべきかについて、十分に理解できるはずです。

hepatocyte-specific-ablation-zebrafish-to-study-biliary-driven-liver

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

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胆道主導の肝臓の再生を研究するためにゼブラフィッシュにおける肝細胞特異的アブレーション

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