マウスの腎臓移植技術
2015年10月20日
この原稿の目的は、特に動脈吻合の詳細に注意を払いながら、マウスで腎臓移植を行うために必要な手順を説明することです。
この手順の全体的な目標は、マウスの腎臓移植のための修正された動脈吻合技術を実証することです。これは、最初にドナーの関連する血管を慎重に分析することによって達成されます。2番目のステップは、腎動脈に隣接するドナー腹部大動脈のかかととつま先のカフを作成することです。
次に、このかかととつま先のカフを使用して、レシピエントの動脈吻合を形成します。最終的に、この手法は動脈血栓症の症例を非常に少なくするはずです。このビデオでは、口の中の腎臓移植を容易にするために、動脈のかかととつま先のカフを作成する方法を紹介します。
抵抗方法のこの技術の主な利点は、レシピエント大動脈からドナー腎動脈への血流経路がまっすぐになり、血小板活性化と血栓形成が減少することです手術顕微鏡の下で滅菌技術を使用して、ドナーの腎臓を採取し、適切に実行します。収穫時間は15分から20分になります。毛皮を取り除き、動物を拘束します。
ポビドンヨードで皮膚を洗浄し、マウスをドレープし、腹部の正中線を2センチメートル切開して手術を開始します。腸を胸に引っ込め、湿ったガーゼで包みます。施術中はガーゼを湿らせておきます。
さあ、大きな腹血管を見つけて動員してください。腰椎の枝は、焼灼するか、10 個のゼロ ナイロン縫合糸で結紮する必要があります。次に、下大静脈と左腎血管の遠位にある大動脈の2ミリメートルの分割を単刀直入に解剖します。
次に、腎血管に付着する小さな動脈枝と静脈枝を結紮して分割します。鈍的解剖を続行して腎静脈を腎動脈から分離し、後でキャロルパッチを作成できるようにします 腎静脈の近位端に、このパッチは静脈吻合の形成に使用されます。次に、それを好きになり、左の副腎血管を分割して、腎上大動脈にアクセスします。
アクセスしたら、6つのゼロシルクをループします。後で使用するために、腎上大動脈の周りを縫合します。次に、周囲の筋膜から腎臓血管と尿管を動員します。
腎臓を後側で右に回転させ、尿管に焦点を合わせた血管枝を結紮して分割します。尿管を周囲の筋膜から慎重に解放します。腎門を乱さず、腎血管を保存しないでください。.
次に、尿管を管設計のレベルで分割します。これで腎臓を回復できます。まず、300単位のヘパリンを遠位IVCにゆっくりと注入して、ドナーをヘパリン化します。
次に、腎臓上aaの周りの6つのゼロ縫合糸を結びます。次に、腹部大動脈から左腎臓を灌流し、0.8ミリリットルのヘパリン生理食塩水を1ミリリットルあたり100単位で注入します。灌流後、すぐに静脈キャリルパッチを作成し、腎臓への逆流を回避します。
腎静脈を腎臓に向かって引っ込めて、AAと腎動脈を露出させます。次に、腎動脈に隣接する大動脈を分割します。かかとを作り、袖口にします。
その後、0分間の冷気虚血が必要な場合は、回復した腎臓を準備したレシピエントに移します。あるいは、臓器を摂氏4度の保管室に移し、テキストプロトコルに示されているようにドナーを安楽死させます。この手順は、ドナーの麻酔の場合と同様に 35 分から 45 分かかります。
レシピエントはまた、必要に応じて初期ボーラスを補足します。.レシピエントに眼科用クリームを提供します。.その後、動物にブプレノルフィンを注射し、処置後も投与を継続し、最初の切開を行い、ドナーと同様に腸を変位させた後、右腎摘出術を進め、腎動脈と静脈を6つのゼロ縫合糸で結紮し、尿管を腎臓の近位に6つのゼロ縫合糸で分割します。
次に、血管縫合糸の遠位にある腎臓を切除します。次に、腎血管の下にAAとIVCを分離し、次に吻合部位よりも上に配置します。大動脈の周りに4つのゼロコットンタイを置き、IVCは同じようにその部位に劣ります。
その領域に見つかった腰椎血管は、焼灼するか、10 0 ナイロン縫合糸で結紮する必要があります。これは、劣った縫合糸ではなく、優れた縫合糸ではなく、しっかりと結紮する必要があります。これにより、大動脈に血液が保持され、AORの自律切開が容易になります。30ゲージの針でアトミーを行い、細いマイクロハサミを使用して切開部を約2ミリメートルの長さに伸ばします。
次のステップは、ドナーのかかととつま先のカフからレシピエントの大動脈まで内膜吻合を行うことです。まず、ドナー大動脈のかかとにステーステッチを10ゼロ縫合糸で入れます。これをレシピエントの大動脈の切開の下端まで続け、結びます。
次に、大動脈切開の上端に 10 ゼロ縫合糸を配置し、これをドナー カフのつま先まで続けて結びます。第三に、上端から始めて、大動脈の側壁に水っぽい縫合糸を作り、前に配置した下ステー ステッチに対して結びます。次に、腎臓を裏返し、内側壁に沿ってランニング縫合を続け、上ステーステッチに結び付けます。
針を使用してIVCを穿刺し、細いマイクロハサミで切開部を延長することにより、静脈吻合を完了します。10ゼロナイロンを使用して、ドナーの腎静脈をIVCの下隅に結びます。IVCとドナー静脈の上端に別の10ゼロ縫合糸を配置し、両側に沿ってランニング縫合を行います。
動脈吻合と同様に、組織縁の嫌悪感はシールと治癒に役立ちます。さあ、あなたの仕事をチェックしてください。対向する壁が縫い目で引っかかったり、血流が狭くなりすぎたりしないようにしてください。
吻合部縫合線の張力が最適であることを保証するもう一つの極めて重要な要素は、緩すぎると不可逆的な漏れがあり、きつすぎると流れに制約があります。動脈側の場合、これにより移植片の過剰さが少なくなります。静脈側の場合、腎臓のうっ血が生じます。
吻合が完了したら、遠位の綿のネクタイを緩めて静脈の流れを確立します。次に、近位タイを徐々に緩め、動脈吻合での止血のために洗浄します。両方の吻合が安全であることが確認されたら、ここにレシピエントの膀胱があり、2つの穴が開いている20ゲージの針が鉗子を穴に通し、ドナー尿管を膀胱に通します。
次に、尿管の近位端を2 10 0縫合糸で膀胱壁に固定します。突き出た尿管の余分な長さを切り取り、膀胱内に引っ込むようにします。次に、膀胱の他の穴を10ゼロ縫合糸で閉じます。
腸を交換し、5つのゼロシルク縫合糸を実行して腹部を2層に閉じ、閉じる前に腹部に1マイクロリットルの生理食塩水を注入して手術を完了します。腹部を閉じた後、さらに0.8ミリリットルの生理食塩水を皮下に注射し、暖かい毛布で動物を回復します 1年間のデータ収集で、この技術は動脈血栓症の発生率を35%から0%に大幅に減少させ、この0%血栓症の割合は、免疫組織化学が非移植腎臓と移植された腎臓で行われて以来維持されています。記載された技術を用いて、周期的な酸シフト染色により、対照およびドナーにおいて正常な近位尿細管細胞が明らかになった。
細胞は立方体で、透明な細胞質と、両方の矢印の細胞の中央に丸い明るい核があります。軽度のブラシボーダー損傷の証拠を指摘しますが、ブラシボーダーの大部分は定期的で保存状態が良いです。このビデオを見た後、動脈のかかととつま先のカップ吻合を行う方法をよく理解しているはずです。これにより、血栓症の症例が減少し、腎臓移植がより成功するようになります。
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概要
本記事では、マウスの腎移植における改良動脈吻合術について詳述します。血管の慎重な剥離と、ドナーの腹大動脈を用いたヒールおよびトゥカフの作成に重点を置いています。
研究の主要構成要素
科学分野
- 神経科学
- 移植
- 顕微手術
背景
- 腎臓移植は、臓器移植の研究において極めて重要です。
- 動脈吻合は、移植を成功させるための重要なステップです。
- 動脈血栓症を最小限に抑えることが、移植の成功に不可欠です。
- 移植研究には、一般的にマウスモデルが用いられます。
研究目的
- 動脈吻合の改良技法を実演すること。
- 研究者向けにステップバイステップのガイドを提供すること。
- 腎移植の手術成績を向上させること。
使用された手法
- ドナーマウスにおける関連血管の解剖。
- ドナーの腹部大動脈を用いたヒールおよびトゥカフの作成。
- レシピエントマウスにおける動脈吻合の形成。
- 手技のビデオデモンストレーション。
主な結果
- この手法は、動脈血栓症の発生頻度を低減させることを目的としています。
- ヒール・アンド・トゥ・カフ法の実証に成功しました。
- 処置を行う研究者に対し、明確な視覚的ガイダンスを提供します。
- 移植成功率を向上させる可能性があります。
結論
- この改良された手法は、マウスにおける腎移植に有用です。
- これにより、動脈吻合のための信頼性の高い方法が提供されます。
- 今後の研究において、この手法を基盤として移植成績の向上が期待できます。
よくある質問
産業界への実用的な意義
動脈血栓症は前臨床移植モデルにおける極めて重要な失敗要因であり、データの信頼性や化合物の評価期間に直接的な影響を及ぼします。本手法は、血行動態の最適化を通じてグラフト灌流の整合性を向上させることで、メカニズム的なリスク低減という主要な課題に対処します。モデルの予測能を高めることにより、移植関連治療薬の開発における意思決定（go/no-go decision）をより早期に行うことが可能になります。
バイオ医薬品研究開発における戦略的応用
初期探索およびターゲットバリデーション
- 科学的価値： 移植片の評価において、混在する血栓性イベントを減少させることで、腎経路の機能的検証を可能にする。
- 実用的価値： モデルの再現性を向上させ、研究全体を通じて一貫したターゲット結合の読み取り結果をサポートする。
スクリーニングおよびアッセイ開発
- 科学的価値：生理学的血流条件下で、腎臓特異的な薬物効果を評価するための安定した血管インターフェースを提供します。
- 実用的価値：技術的な失敗による脱落を減少させ、アッセイのスループットと化合物スクリーニングの効率を向上させます。
トランスレーショナル・前臨床研究
- 科学的価値： 薬剤による腎臓への影響を不明瞭にする手技由来のアーティファクトを最小限に抑えることで、トランスレーショナルな再現性を向上させます。
- 運用的価値： グラフトの生存期間を延長させることで、長期的な薬物動態および薬力学的なモニタリングを可能にします。
パイプラインおよびワークフローの統合
本手法は、後続の解析に向けた信頼性の高い外科的プラットフォームを提供することにより、特に腎臓の安全性または有効性が主要評価項目となる場合の、創薬から前臨床段階に至る一連の流れに適合します。
- 探索生物学： 化合物曝露中の移植片の完全性を確保することで、腎病態生理モデルにおける仮説検証をサポートします。
- スクリーニング： 血管系の合併症によるばらつきを低減し、腎移植モデルにおける信頼性の高い化合物評価を可能にします。
- 分析学： 一貫した移植片灌流を通じて、尿細管障害および炎症マーカーの定量的な評価を容易にします。
- トランスレーショナルリサーチ： 移植片機能を臨床的な移植血行動態に合わせることで、前臨床段階の連続性を向上させます。
- エンタープライズ再利用： 複数の腎疾患モデルに適応可能な、標準化された血管吻合プロトコルを確立します。
運用および企業への影響
- 科学的価値：血栓による機序的な曖昧さを低減し、腎臓のターゲットバリデーションにおける予測信頼性を向上させる。
- 運用的価値：標準化されたマイクロサージェリー技術により、ラボ間の再現性とトレーニング効率を改善する。
- 戦略的価値：有効性試験における生物学的ノイズを低減し、より適切なリソース配分とポートフォリオの選別を支援する。
- ポートフォリオへの影響：前臨床データの質を向上させることで、リスク調整に基づいた腎臓候補薬の開発推進を可能にする。
実施上の留意点
- 拡大鏡下での微小外科的な血管操作および縫合技術の習熟が必要である。
- 凝固を防ぐため、無菌領域の維持および抗凝固剤灌流プロトコルへの依存がある。
- カフの形状と吻合部のテンションを一定に保つため、チーム間での標準化されたトレーニングが必要である。
- マウスの系統や血管径の違いによる適応上の考慮事項が、カフ形成の実現可能性に影響を及ぼす可能性がある。
- 実用上の制限：成功は精密なヒールアンドトー（heel-and-toe）型カフの作成に依存しており、これには細心の剥離技術が要求される。
